白术多糖对H22肝癌小鼠抗肿瘤作用实验研究

周 剑，苏德春，宋国权

(牡丹江医学院红旗医院 普外二科，黑龙江 牡丹江 157011)



白术多糖对H22肝癌小鼠抗肿瘤作用实验研究

周 剑，苏德春，宋国权

(牡丹江医学院红旗医院 普外二科，黑龙江 牡丹江 157011)

目的：探讨白术多糖对H22肝癌小鼠相关因子的影响，分析其抗肿瘤机制。方法：观察白术多糖不同给药剂量对H22肝癌小鼠模型血清中VEGF、 IL-2含量和瘤组织中p21和Bcl-2表达变化的影响，并计算抑瘤率。结果：白术多糖对H22肝癌小鼠肿瘤抑制效果以中剂量为佳，可减少血清中VEGF含量，增加IL-2含量，同时下调Bcl-2基因表达，而上调p21基因表达。结论：白术多糖对H22肝癌小鼠的肿瘤有较明显的抑制作用，可能是通过增强机体免疫功能而实现。

肝癌；白术多糖；IL-2；VEGF；Bcl-2；p21

中药白术为菊科类植物，药用部位为干燥根茎，主要产于浙江、湖北、湖南等地。白术性苦，甘，温，归脾，有和中、止汗的功效[1]。白术的有效化学成分十分复杂，包括脂类、糖类等。白术多糖是从白术根茎中提取出的多糖类，其主要成分为甘露聚糖、果聚糖及白术挥发油等。其中，免疫活性多糖类的药用报道较为多见，其具有抑制肿瘤生长、激活免疫细胞、改善机体免疫功能，并且对免疫器官和固有免疫功能都有积极的促进作用[2]。

1 材料与方法

1.1 实验动物

昆明小鼠50只,雌雄各半,体重18～22g,由黑龙江中医药大学实验动物饲养中心提供。将其分为5组,每组10只,即空白对照组，白术多糖高、中、低剂量组，猪苓多糖组。

1.2 试剂

白术多糖粗制晶体药品、H22肝癌细胞株由哈尔滨医科大学购进；IL-2、VEGF、Bcl-2、p21测定试剂盒购自西安瑞安试剂有限公司。

1.3 主要仪器

电子天平、电热恒温水浴锅(成都台盟仪器厂)；微量移液器(上海优博器械厂)；MNT5-WS型台式低速离心机、全自动酶标仪-ER-7078A酶标仪、PCR扩增仪(成都仪器厂制造)。

1.4 造模及给药方法

将H22肝癌细胞按照一定比例配比,每只小鼠右腋部皮下接种0.25mL。接种24h后,分别腹腔注射给药白术多糖高(200mg/kg)、中(100mg/kg)、低(50mg/kg)剂量组,阳性组给药猪苓多糖100mg/kg,空白对照组给予相同体积的生理盐水,连续给药15天，停药次日处死。

1.5 指标检测

ELISA法测血清中VEGF、IL-2含量；免疫组化法测瘤组织中Bcl-2基因表达情况、RT-PCR法测瘤组织中p21基因表达；并且计算抑瘤率。抑瘤率=(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重×100%。

1.6 数据处理

2 结果

2.1 白术多糖对小鼠血清中IL-2、VEGF及瘤组织Bcl-2、p21基因表达的影响

经不同剂量给药后，白术多糖中剂量小鼠血清中IL-2水平显著上升，VEGF水平明显降低；瘤组织Bcl-2基因表达上调、p21基因表达显著下调，与猪苓多糖组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。见表1。

2.2 白术多糖对H22肝癌小鼠瘤重的影响

检测H22肝癌小鼠瘤重可得，白术多糖中剂量抑瘤效果最好，其抑瘤率达28.36%，与猪苓多糖组比较，差异有统计学意义(P<0.01)。见表2。

表1 白术多糖对小鼠血清中IL-2、VEGF及瘤组织Bcl-2、p21基因表达的影响

组别例数(n)剂量(mg/kg·d)IL-2(μg/mL)VEGF(μg/mL)p21/β-actinBcl-2(平均积分)空白对照组109.15±0.174.51±0.0117.26±2.238.32±0.43猪苓多糖组1010011.14±0.532.34±0.2226.16±2.363.69±0.42白术多糖低剂量组105010.31±0.28**2.24±0.25**21.34±1.68**3.05±0.28**白术多糖中剂量组1010011.78±0.75**2.14±0.39**26.51±2.28**3.13±0.78**白术多糖高剂量组1020010.56±0.57**2.59±0.38**23.55±3.16**3.59±0.48**

注：与猪苓多糖组比较，*P<0.05，**P<0.01。

表2 白术多糖对H22肝癌小鼠瘤重的影响 ±s)

注：与猪苓多糖组比较，*P<0.05，**P<0.01。

3 讨论

随着社会的发展和时代的进步，人民的生活水平不断提升，加之大气、环境污染和电离辐射及食物各种添加剂的使用，使得普通人群中肿瘤的发生率不断提高。其中最常见的为胃癌、肝癌、肺癌、消化道肿瘤等。临床最直接且最有效的治疗方法为手术切除和大面积清扫淋巴结等，对患者带来了极大的创伤，且治疗效果并不明显，存活率不过数月或者几年。因此，各国学者始终在寻找一种能够有效遏制肿瘤生长和转移的高效药物[3]。

本项研究在祖国传统医学宝库资料的基础上建立，白术多糖为白术根茎的重要提取物，有资料记载其有抗氧化、抗自由基、提高对缺氧耐受度及控制机体细胞过度生长等作用。同时在细胞信号传导和细胞凋亡的调节中也有十分重要的作用，并且可以提高固有免疫细胞的功能，如NK细胞、NKT细胞、B1细胞、肥大细胞、嗜碱性粒细胞等[4]。另外，其不仅能够提高机体的体液免疫水平，还可提高小鼠淋巴细胞对ConA的反应性及小鼠学习记忆和抗氧化作用。

实验数据明确显示，不同给药剂量的白术多糖相对于空白组肿瘤的重量都有不同程度的减轻，并且抑制肿瘤生长的效果较好。白术多糖的高、中、低剂量组与猪苓多糖组相对比，可以发现其能够提高血清中IL-2含量达到提高机体免疫力效果，进而消灭肿瘤细胞；同时减少VEGF含量水平，减少了肿瘤的生长营养和抑制其转移效果；并抑制促凋亡蛋白Bcl-2的表达，且上调p21基因表达，控制细胞周期杀死肿瘤细胞[5]。因此，希望本研究的进一步推进，为开发新型抗癌药物提供理论依据。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京：中国医药科技出版社，2010:95.

[2] 黄利，李利民，唐丽燕畅白术水煎剂对小鼠免疫功能的影响[J].中药药理与临床，2012,28(1):114.

[3] 孙文平，李发胜，侯殿东，等.当归、白术、制白附子多糖对小鼠免疫调节作用的影响[J].中国中医药信息杂志，2008,15(7):37.

[4] 金伯泉.医学免疫学[M].北京：人民卫生出版社，2011.

[5] Kamb A,Gruis NA.Weaver-Feldhaus J,et al.A cell regulator potentiallyinvolved in genseis of many tumor types[J].Science,1994,264:436-440.

(责任编辑：魏 晓)

2015-04-21

周剑(1984-)，男，黑龙江省牡丹江医学院红旗医院医师，研究方向为直肠肿瘤的临床治疗。

R285.5

A

1673-2197(2015)17-0009-01

10.11954/ytctyy.201517004