不同地区白术饮片中白术内酯的含量测定

★ 许舒颜 (深圳市宝安区石岩医院 广东 深圳518108)

白术主产浙江、安徽等地，是著名的“浙八味”之一，其中浙江磐安、新昌、嵘州被认为是白术药材的道地产区［1］。由于我国白术产地较多，各产地环境、气候、地貌等均有差异，因此所产白术药材功效及成分含量差异较大［2］，本研究采用高效液相色谱方法对不同地区白术饮片中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量进行了测定，通方法学考察验证，该方法精密度、稳定性、重复性、回收率试验良好，方法可行，现整理报道如下:

1 材料与仪器

1.1 仪器 岛津-LC20AT高效液相色谱仪，紫外检测器，色谱工作站(日本岛金有限公司);TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);AB-135型万分之一电子分析天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);KH 300P型超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司);SHZ-3循环水多用真空泵(上海市沪西分析仪器上有限公司);FZ102微型植物试样粉碎机(北京市永光明医疗仪器厂)。

1.2 试剂 甲醇(分析纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)，所用试剂均为分析纯，水为超纯水(浙江杭州娃哈哈集团)，甲醇(色谱纯，天津市科密欧化学试剂有限公司)。

1.3 试药与药材 白术内酯Ⅱ标准品(中国药品生物制品检定所，批号为0906045);白术内酯Ⅲ(中国药品生物制品检定所，批号为0804061);白术产地见表1。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 以十八烷基键合硅胶为填充剂;流动相甲醇:水(45∶55)，检测波长为335nm，进样量10μL，流速1.0mL/min。

表1 白术药材来源

2.2 标准品溶液的制备 取白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ对照品适量，精密称取1mg，置100mL容量瓶中，加适量甲醇溶解，稀释至刻度，摇匀，制成每1mL含0.01mg的溶液，即得标准品溶液。

2.3 样品溶液的制备 取药白术饮片，粉碎，过120目筛或者四号筛。精密称取白术样品粉末1.0g，加入带有塞得锥形瓶中，精密称定100mL甲醇溶液，加入至锥形瓶中，称定重量，超声30min，取出，放凉，在称定重量，加入甲醇不足减少的重量，混匀，过滤，量取滤液10mL，加入50mL棕色容量瓶中，加入甲醇定容至刻度，混匀，即得所需样品溶液［3］。

2.4 线性关系考察 分别精密量取上述配好的0.01mg/ml标准品溶液2，5，10，15，20μL注入高效液相色谱仪，记录峰面积数值，以进样量为横坐标，以峰面积为纵坐标，绘制标准曲线得到线性回归方程白术内酯Ⅱ:Y=2 221.2X+7 843.1，r=0.999 6;白术内酯Ⅲ:Y=1 844.1X+5 865.1，r=0.999 7，对照品在2.0～20.0μL范围内线性关系良好，样品浓度与峰面积成直线关系。

2.5 精密度试验 精密量取2.2项下配制的标准品溶液连续重复测定6次，计算平均值及RSD值。结果显示标准品和样品RSD值分别为0.32%，表明仪器精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密量取连续进标准品溶液，进样量为10μL，每隔一定时间测定一次峰面积，测定24h，根据测得对照品峰面积，计算白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量的平均值及RSD值。试验结果显示，在24h内RSD值为1.12%，1.23%，表明样品溶液在24 h内基本稳定。

2.7 重复性试验 精密称取标准品溶液一份，连续进针，进样量为10μL，精密称取2.3项下白术样品溶液6份，分别测定峰面积值。计算白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量平均值、RSD值，重复性试验结果显示，白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量的RSD值为1.18%，1.24%，表明该方法重复性较好。

表2 白术内酯Ⅱ回收率试验测定结果

表3 白术内酯Ⅲ回收率试验测定结果

2.8 加样回收率试验 精密称取同一批次白术药材粉末1g，按比例精密加入2.2项下标准品，制备低、中、高剂量组，每组平行3份，按上述的方法处理后，依次测定，计算回收率、RSD值。加样回收率考察结果显示，所有供试品回收率均介于95%～105%之间，样品的平均回收率为99.98%，99.63%;RSD值为1.03%，1.25%，均小于3%，说明本法准确性较好，方法可行。结果见表2-3。

2.9 含量测定结果 取9批不同产地的白术样品按照上述方法提取的样品溶液，按照2.3项下的方法处理，制备供试品溶液，测定相应样品的峰面积，根据对照品与样品的峰面积计算白术内酯Ⅱ、白术内酯Ⅲ含量，结果见表4。

表4 9个不同产地白术含量测定结果

3 讨论

本研究对测定波长进行了选择，取白术内酯对照品、供试品及空白溶液，在200～400nm波长范围进行光谱扫描。供试品和对照品在335nm处有最大吸收，而空白溶液无吸收。测得数据与查询相关报道文献接近。白术提取液最大吸收波长与对照品最大吸收波长一样，故将335nm作为测定波长。相关研究报道，白术，在制药、香料、化妆品、保健食品［24］等许多领域广阔的市场前景，可以说是中药之瑰宝［4］。相信随着对白术进一步的研究，白术一定会在医药领域、化妆品领域、食品等相关领域发挥越来越大的作用。综上所述，不同地区白术饮片中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量有较大的差异，通过方法学考察验证，该方法精密度、稳定性、重复性、回收率试验良好，方法可行。

［1］葛建，楼纪东，林芳，等.反相高效液相色谱法同时测定参苓白术颗粒中白术内酯Ⅱ和白术内酯Ⅲ的含量［J］.时珍国医国药.2009，12(6):152-154.

［2］段启，李彩萍，赵珍东，等.高效液相色谱法测定清炒白术中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ［J］.中南药学.2009，14(5):614-616.

［3］宿廷敏，王敏娟，阮时宝.白术的化学成分及药理作用研究概述［J］.贵阳学院学报(自然科学版).2008，4(2):135-137.

［4］段启，许冬谨，谢晨.HPLC法测定白术不同炮制品中白术内酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ［J］.中草药.2009，21(9):886-888.