APP下载

人巨细胞病毒在乳汁中的载量变化及其传播风险

2015-04-24王婷崔会玲段歌红陈茂才冀恒涛

中国医药导报 2015年21期
关键词:足月儿传播者载量

王婷 崔会玲 段歌红 陈茂才 冀恒涛

郑州大学第二附属医院检验科,河南郑州450014

人巨细胞病毒在乳汁中的载量变化及其传播风险

王婷 崔会玲 段歌红 陈茂才 冀恒涛

郑州大学第二附属医院检验科,河南郑州450014

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)DNA在乳汁中的载量变化以揭示其通过母乳喂养将病毒传播给婴儿的风险。方法选择2013年9月~2014年10月于郑州大学第二附属医院产科住:的305名产妇(哺乳期母亲)及其婴儿作为实验对象,选择同期103名奶粉喂养婴儿为对照,用实时荧光定量PCR方法检测其乳汁、尿液和外周血白细胞中的HCMV病毒DNA载量,数据进行统计学分析比较各组差异。结果产后第6周乳汁病毒DNA总阳性率为44.92%,其中有73名母亲将病毒传播给了婴儿,72名是非传播者。传播者的DNA载量为(4.70±1.26)(lg)而非传播者为(3.08±0.88)(lg),差异有高度统计学意义(P<0.01)。病毒DNA阳性乳汁喂养的婴儿感染率(50.68%)显著高于阴性乳汁喂养的婴儿(3.70%)和奶粉喂养的婴儿(9.71%),差异均有高度统计学意义(P<0.01)。而且母乳喂养及奶粉喂养的早产儿的尿液HCMV-DNA阳性率(83.33%、37.50%)均高于足月儿(47.76%、7.37%),差异均有统计学意义(P<0.05)。乳汁病毒DNA载量高于3.42者,84%将病毒传播给婴儿,而低于3.42者75%没有传播病。因此,2600 copies/mL(lg2600=3.42)为传播者的临界值。结论含有病毒的乳汁是HCMV的重要传染源,而且建议乳汁HCMV DNA载量2600 copies/mL作为传播者的临界值。早产儿对HCMV更为易感,尿液病毒DNA检测用来诊断HCMV具有很好的敏感性。

人巨细胞病毒曰母婴传播曰乳汁曰病毒DNA

人巨细胞病毒(HCMV)属于β-疱疹病毒,即人疱疹病毒-5型,是先天性病毒感染的最主要原因,也是引起人类出生缺陷的主要病原体[1]。但只有10%的先天性HCMV感染表现出临床症状,有症状的新生儿中5%~17%会发生神经损伤或听力、视力损伤[2]。如果在孕期HCMV复发感染,母亲有1%的概率将病毒传播给胎儿,而原发感染的孕妇有40%会发生母婴传播[3]。围生期HCMV感染的传播途径有胎盘、产道、母乳喂养和亲密接触等[4]。哺乳期妇女会发生HCMV复发并将病毒排入乳汁成为重要的传播途径[5]。原发感染、复发感染和持续性感染期间HCMV DNA可以从多种体液中分离纯化,如尿液、唾液、羊水、血液、泪液、宫颈阴道分泌物、乳汁、精液等[6-8]。本研究对母亲乳汁和婴儿尿液及外周血白细胞中DNA载量进行定量检测以评价乳汁对于HCMV母婴传播的影响。

1 对象与方法

1.1 对象

选择2013年9月~2014年10月在郑州大学第二附属医院出生的308名母乳喂养的婴儿及其母亲,其中男160名,女148名;早产儿22名,足月儿286名,包含3对双胞胎。选择同期奶粉喂养的婴儿103名(男54名,女49名;早产儿8名和足月儿95名)。305名哺乳母亲在孕期优生筛查时,HCMV IgG均为阳性,年龄19~41岁,平均(28.9±3.4)岁;出生时孕龄31~42周,平均(38.4±6.3)周;婴儿出生体重1910~4665 g;平均(3389±121)g。出生时孕龄<37周为早产儿。

1.2 仪器与试剂

PCR扩增仪LightCycler1.5(曼海姆)购自德国罗氏诊断有限公司。离心机(水平转子)购自北京白洋医疗器械有限公司。人巨细胞病毒核酸定量检测试剂盒购自中山大学达安基因股份有限公司。人外周血淋巴细胞分离液购自北京索莱宝科技有限公司。

1.3 方法

1.3.1 样本收集与处理每个患者抽取1 mL EDTA抗凝血,经1mL无菌生理盐水倍比稀释后缓缓加入至淋巴细胞分离液中,用密度梯度离心法,1500 r/min离心20 min,分离收集外周血单核细胞(PBMC)。<3 mL尿液收集至无菌试管,12 000 r/min离心5 min,保留沉淀备用。<3 mL乳汁收集至无菌试管,1500 r/min离心15 min,弃去上层脂肪层和底层细胞层,吸取中间乳清层再次离心,12 000 r/min离心5 min,保留沉淀备用[9]。

1.3.2 HCMV-DNA定量检测尿液、乳汁和PBMC中病毒DNA的提取和检测,利用PCR扩增仪LightCycler1.5和HCMC核酸定量检测试剂盒,按照说明书进行。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0统计学软件(国际商业机器公司,美国纽<)进行数据分析,计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示,两组间比较采用t检验;计数资料用率表示,组间比较采用χ2检验和四格表精确检验,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 出生6周内母亲和婴儿各标本中HCMV DNA阳性率的变化

乳汁HCMV DNA阳性率前6周持续升高,母乳喂养婴儿和奶粉喂养婴儿的尿液DNA阳性率均显著高于PBMC(P<0.05)。母乳喂养婴儿与奶粉喂养婴儿尿液DNA阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 产后6周母亲乳汁和婴儿PBMC及尿液HCMV DNA阳性率变化(%)

2.2 早产儿和足月儿各种喂养方法的HCMV DNA阳性率

病毒DNA阳性母乳喂养婴儿的尿液DNA总阳性率显著高于阴性母乳喂养和奶粉喂养的婴儿(P<0.01)。而且早产儿尿液HCMV DNA总阳性率高于足月儿(P<0.05)。见表2。

2.3 产后8周HCMV在乳汁中DNA载量的变化

病毒传播者与非传播者母亲乳汁中病毒DNA载量的变化趋势相似,前6周逐渐升高,第8周开始下降,见图1;但前者的DNA载量(4.70±1.26)(lg)显著高于后者(3.08±0.88)(lg),差异有高度统计学意义(P<0.01)。乳汁病毒DNA载量高于3.42者,84%将病毒传播给婴儿;而低于3.42者75%没有传播病毒。鉴于该载量差异,建议2600 copies/mL(lg2600=3.42)作为传播者的临界值。见图2。

表2 不同喂养方式的早产儿和足月儿尿液HCMV DNA表达情况[n(%)]

图1 产后8周哺乳母亲乳汁中HCMV DAN载量变化

图2 病毒传播者母亲与非传播者母亲乳汁DNA载量比较

3 讨论

实时荧光定量PCR检测体液中病毒DNA载量是诊断HCMV感染可靠敏感的指标[10],与既往的报道一致[1,5],婴儿尿液HCMV-DNA阳性率显著高于PBMC,表明多数婴儿感染是局部的而非全身性的,所以尿液作为病毒载量检测标本敏感性更高。无论母乳喂养还是奶粉喂养,早产儿都比足月儿的感染率更高,说明前者对HCMV更为易感,与其它研究结果一致[2-3]。可能因为早产儿较足月儿免疫系统等各方面发育略为迟缓,因此更易发生感染性疾病[11]。研究表明HCMV病毒复制可以发生在腺上皮细胞,并将病毒排入乳汁。产后6周内,乳汁HCMV DNA阳性率持续升高,表明越来越多的母亲发生了复发感染,同时,婴儿的感染率液随之增高。处于哺乳期的母亲,其乳腺细胞中活性物质的产生和积累促使HCMV病毒复制[12-14],而含有病毒的乳汁喂养婴儿导致的感染率更高,表明母乳喂养是HCMV母婴传播的重要途径,这与其他研究结果一致[3,5-6],随着乳汁病毒含量的增高,婴儿感染率也升高。根据病毒传播者和非传播者之间乳汁病毒DNA载量的差异,建议2600 copies/mL作为传播者的临界值。由此一来,可以监测个体乳汁病毒载量以评估其传播风险。但母乳是婴儿最为理想的天然食物,除了提供营养,乳汁还为婴儿带来免疫、发育和心理等方面的好处。因此需要研究出杀灭乳汁中病毒成分同时又不损伤乳汁营养成分的方法并引入临床实践当中[15]。在后续研究中,将对比巴氏灭菌、冷冻复融等方法对母乳中HCMV的清除作用及其对婴儿感染率的影响,为临床提供可行的预防婴儿HCMV感染的方法。

综上所述,母乳喂养是HCMV重要的母婴传播途径;检测尿液病毒DNA对于儿童HCMV感染具有诊断意义;早产儿较足月儿对HCMV具有更高的易感性。

[1]Kohda C,Chiba N,Shimokoba K,et al.A simple smart amplification assay for the rapid detection of human cytomegalovirus in the urine of neonates[J].J Virol Methods,2014,208:160-165.

[2]miechura M,Struzycka M,Konopka W.Congenital and acquired cytomegalovirus infection and hearing evaluation in children[J].Otolaryngol Pol,2014,68(6):303-307.

[3]Alkhawaja S,Ismaeel A,Botta G,et al.The prevalence of congenital and perinatal cytomegalovirus infections among newborns of seropositive mothers[J].J Infect Dev Ctries,2012,6(5):410-415.

[4]Jackson SE,Mason GM,Wills MR.Human cytomegalovirus immunity and immumeevasion[J].Virus Res,2011,157(2):151-160.

[5]徐莉莉,牟文凤,杨丽,等.婴儿血液、尿液及母乳中病毒DNA检测在诊断人巨细胞病毒感染中的应用[J].中国当代儿科杂志,2013,15(9):748-750.

[6]Neirukh T,Qaisi A,Saleh N,et al.Seroprevalence of Cytomegalovirus among pregnant women and hospitalized children in Palestine[J].BMC Infect Dis,2013,13:528.

[7]陆佳飞,周科隆,王缦.磁珠快速提取乙型肝炎病毒DNA方法的建立及其应用研究[J].中华检验医学杂志,2012,35(9):843-850.

[8]Gohring K,Dietz K,Hartleif S,et al.Influence of different extraction methods and PCR techniques on the sensitivity of HCMV-DNA detection in dried blood spot(DBS)filter cards[J].J ClinVirol,2010,48(4):278-281.

[9]Grosjean J,Trapes L,Hantz S,et al.Human cytomegalovirus quantification in toddlers saliva from day care centers and emergency unit:a feasibility study[J].J ClinVirol,2014,61(3):371-377.

[10]Harkins LE,Matlaf LA,Soroceanu L.Detection of human cytomegalovirus in normal and neoplastic breast epithelium[J].Herpesviridae,2010,1(1):8.

[11]deVries JJ,Claas EC,Kroes AC,et al.Evaluation of DNA extraction methods for dried blood spots in the diagnosis of congenital cytomegalovirus infection[J].J ClinVirol,2009,46S(4):S37-S42.

[12]黄莲芬.乙肝病毒感染或携带产妇检测乳汁乙肝病毒DNA结果分析[J].中国医药导报,2011,8(22):90-91,93.

[13]赵巍松,刘伶,杨飞,等.母乳及婴儿血液、尿液人巨细胞病毒DNA检测在婴儿HCMV感染中的应用[J].中国实验诊断学,2013,17(6):1059-1061.

[14]何佳英,张迎华,张永乐,等.乙型肝炎病毒感染产妇乳汁中乙型肝炎病毒DNA载量对母乳喂养的指导意义[J].中华预防医学杂志,2011,45(11):1004-1006.

[15]Yinon Y,Farine D,Yudin MH.Screening,diagnosis,and management of cytomegalovirus infection in pregnancy[J]. Obstet Gynecol Surv,2010,65(11):736-743.

Loads change of HCMV in breast milk and the risk of transmission via breast milk

WANG TingCUI HuilingDUAN GehongCHEN MaocaiJI Hengtao
Department of Medical Laboratory,the Second Affiliated Hospital of Zhengzhou University,He'nan Province,Zhengzhou 450014,China

Objective To discuss the loads change of HCMV in breast milk and to reveal the risk of transmission to infants via breast-feeding.Methods From September 2013 to October 2014,305 lactating mothers admitted to Obstetric Department of the Second Affiliated Hospital,and their 308 infants were screened for HCMV,with 103 formula-fed infants in the same period were selected as control.HCMV DNA isolated from breast milk,urine and peripheral blood mononuclear cells(PBMC)was detected by real-time PCR.Results The accumulative DNAlactia(+)was 44.92%during the first 6 weeks postpartum,including 73 transmitters and 72 non-transmitters.But transmitters had significantly higher DNA load than non-transmitters[(4.70±1.26)vs(3.08±0.88)],the difference was statistically significant(P<0.01). Breast-fed infants with DNAlactia+milk were found more DNAuria(+)(50.68%)than breast-fed infants with DNAlactia-milk(3.70%)and formula-fed babies(9.71%),the difference was statistically significant(P<0.01).And preterm babies breast-fed and formula fed had significant higher DNAuria(+)(83.33%,37.50%)than term ones(47.76%, 7.37%),the differences were statistically significant(P<0.05).84%puerpera with milk viral DNA loads<3.42 spread the virus to infants,and 75%puerpera with milk viral DNA loads<3.42 had not spread the virus to infants,so 2600 copies/mL(lg2600=3.42)was the cut-off viral DNA load.Conclusion Breast milk is a main source for transmission and a proposal cut-off viral DNA load is defined as 2600 copies/mL in milk for potential maternal virus transmitters. Preterm infants seem more vulnerable to HCMV infection and the analysis of urine from children for the presence of DNA is more valuable for the diagnosis of HCMV.

Human cytomegalovirus;Transmission;Breast milk;Viral DNA

R511

A

1673-7210(2015)07(c)-0063-04

2015-04-23本文编辑:任念)

河南省医学科技攻关计划项目(201403085)。

王婷(1976-),女,硕士,主要从事病原体分子诊断学研究。

崔会玲(1957-),女,副主任技师,主要从事病原体免疫学研究。

猜你喜欢

足月儿传播者载量
误传了几千年的俗语,你也是传播者吗?
42例新生儿坏死性小肠结肠炎临床分析
病毒载量检测在102例HIV抗体不确定样本诊断中的应用
陈建杰教授治疗低病毒载量慢性乙型肝炎经验总结
不同胎龄足月儿临床转归研究
让我们都成为直销正能量的传播者
选择性剖宫产对足月儿产生呼吸窘迫综合征的影响
新闻传播者的现代意识
乙肝患者HBV载量与IgA,IgG,IgM及C3,C4相关性研究
肾移植及胰肾联合移植患者短暂/持续BK病毒血症对远期预后的影响