不孕不育患者解脲脲支原体培养及耐药性研究

2015-04-23王欣玲孙建琴罗霞

河北医药 2015年10期

王欣玲　孙建琴　罗霞

王欣玲孙建琴罗霞

【摘要】目的针对不孕不育患者展开临床研究，了解患者解脲脲支原体感染情况以及对药物作用的耐药性，旨在优化临床药物使用。方法选取我院近两年来收治的不孕不育患者共280例作为不孕不育组，同时选取270例已生育正常人作为已生育组。对两组研究对象展开解脲脲支原体的细胞材料培养并实施体外药敏试验，对比解脲支原体检测结果，了解不同类型支原体构成比与分离率、解脲支原体生物分群情况以及女性感染情况。结果550例标本中共分离出了210株支原体，Uu(解脲脲支原体)分离率为26.37%; Mh(人支原体)分离率为0.91%; Uu+Mh分离率为10.91%。由此可见解脲脲支原体感染率最高。而不孕不育组经解脲脲支原体培养后结果为47.62%的女性为阳性，39.29%的男性结果为阳性;已生育组9.23%的男性为阳性，7.14%的女性为阳性，比较差异有统计学意义(P ＜0.05)。同时对210株支原体进行药敏试验后发现，解脲脲支原体耐药性最强的为环丙沙星，敏感性最高的则为普那美素。结论对于不孕不育患者而言，解脲脲支原体感染是主要因素，因此需重视对解脲脲支原体的检测与筛查，同时依据患者药敏试验结果选择最合适的抗生素，以降低不孕不育发生率。

【关键词】解脲脲支原体;不孕不育;耐药菌株;药敏分析

作者单位: 442000湖北省十堰市，湖北医药学院附属太和医院门诊服务中心

随着人们生活习惯以及饮食习惯的变化，越来越多人出现了不孕不育现象，影响到了正常生活。不孕不育并非单一因素作用的结果，其通常受到多种因素的影响，在综合作用下导致无法受孕或精子能力降低［1，2］。在众多因素之中，微生物造成的患者生殖道感染是导致患者出现不孕不育的重要因素，在近年来统计中占较大比例。解脲脲支原体是微生物的一种，属于原核细胞类型，多出现于泌尿生殖道。解脲支原体不侵入机体组织与血液，而是在泌尿生殖道上皮细胞黏附并定居后，通过不同机制引起细胞损伤，如获取细胞膜上的脂质与胆固醇造成膜的损伤，释放神经(外)毒素、磷酸酶及过氧化氢等。由此，预防支原体感染，筛查敏感药物已经成为了各大医院研究的重点课题。本院基于这一背景，采用实验方式研究了我院近年来收治的不孕不育患者解脲脲支原体培养及其耐药性，报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选取2012年6月至2014年6月来我院接受治疗的280例不孕不育患者作为不孕不育组，其中男112例(占40.0%)，年龄22～43岁，平均年龄(30.7±2.4)岁;不孕不育症状已经持续2～12年，平均(7.8±1.3)年，112例男性患者经检验后精液处于正常状态;女168例(占60.0%)，年龄21～39岁，平均(29.4±1.9)岁;不孕不育症状持续3～11年，平均(7.1±1.1)年。168例女性患者均排除先天性不孕不育、排卵存在障碍以及内分泌失调现象严重等症状。选择2012年6月至2014年6月已生育正常人270例作为已生育组，其中男130例，年龄21～42岁，平均(31.5±2.4)岁。130例健康男性的配偶妊娠时间均已超过5个月;女140例，年龄22～38岁，平均年龄(31.2±1.8)岁。140例健康女性均已分娩最少1个孩子，且孩子身体健康。2组患者在一般资料比较差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。取所有男性的精液、前列腺液、尿道分泌物或者中段尿液作为标本送检，女性则取其阴道或者宫颈处分泌物即可，取后立即送检。

1.2方法

1.2.1采集方法:采集方式根据患者性别的不同，在操作上也存在差异性。本次研究中支原体培养、药敏试验以及鉴定相关操作均按照试剂说明书严格完成，在对结果的判断上也需保障细胞材料获取的有效性，避免细胞材料获取不当影响对结果的判断。对不同性别患者的细胞材料获取操作如下:

1.2.1.1女性采集:首先将患者外阴部位使用沾有消毒水的棉签清洁干净，将外阴处分泌物彻底清洁。使用阴道窥镜将患者阴道部位扩张，让阴道便于标本的采集。使用无菌棉球将其宫颈部位的分泌物擦拭干净，以没有粘连的分泌物为主。将无菌棉拭子深入到患者宫颈之中，深度大约在1～2 cm即可。深入后旋转一圈(360°，保障无菌棉拭子上细胞材料获取的充分性)，让宫颈壁上的分泌物充分粘在无菌棉拭子上。在将无菌棉拭子取出后，将其接种到转送液培养基里面，轻微搅拌后将棉拭子丢弃。

1.2.2.2男性采集:首先使用沾有消毒水的棉签将患研究对象尿道口部位的分泌物仔细清洁干净，之后采用积压方式，将管道中原本存在的分泌物挤出。挤压可由患者自行操作，数次之后看到有分泌物流出则可开始擦拭，直到无分泌物溢出为止。在有效清洁之后，使用无菌棉拭子，将其缓慢深入患者尿道之中，注意手法需轻微仔细，伸入后将无菌棉拭子轻轻旋转一圈(360°，保障无菌棉拭子上细胞材料获取的充分性)。旋转之后需停留10～20 s，保障细胞材料的有效获取。在将无菌棉拭子取出后，将其接种到转送液培养基里面，轻微搅拌后将棉拭子丢弃。除上述方法外，也可在消毒前列腺之后采用按摩方式，在适当按摩下将患者精液或是中段尿液留取，制成标本之后立即送检实验。这种方式需要保障检验的及时性，即在获取到标本后立即开始检验，才能够保障支原体培养的有效性。而采用无菌棉拭子的方式可不必立即送检，但也要注意培养基的有效保存。

1.3观察指标使用交沙霉素、美满霉素、普那美素、阿奇霉素、红霉素、多西环素、司帕沙星以及左氧氟沙星等13种药物进行解脲支原体耐药敏试验，结果解脲支原体对这些药物的敏感度、中介度与耐药率。

1.4统计学分析应用SPSS 17.0统计软件，计数资料采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1已生育和不孕不育患者的解脲支原体检测结果对比已生育男、女性解脲支原体检出率低于不孕不育者(P＜0.05)。见表1。

表1　已生育和不孕不育患者的解脲支原体检测结果对比%(例)

2.2不同类型支原体构成比与分离率不同类型支原体构成中Uu所占比例最大，其次为Uu+Mh，Uu分离率最高，其次为Uu+Mh。见表2。

表2　不同类型支原体构成比与分离率

2.3对210株解脲支原体药敏试验结果分析解脲支原体敏感药物分别为交沙霉素素、普那美素、多西环素，其中普那美素敏感性最高为98.57%，而红霉素、环丙沙量耐药率均＞50%，其中环丙沙量耐药最高为58.10%。见表3。

表3　210株解脲支原体药敏试验结果分析

2.4不孕不育女性感染情况在本研究中有168例女性患者，其中合并衣原体感染患者有80例，91例则合并患有阴道炎、宫颈炎等其他妇科疾病。症状出现时间不等，约在7 d～1年，发病具有反复性或者持续性。临床症状主要为阴道分泌物出现不同程度的增加，同时伴随有较严重的灼热感或者阴道内部痛感剧烈;腹部或者腰骶部均出现较强烈的疼痛感或者不适感。宫颈炎会导致患者分泌出一种黏液，形态为Q型，阻碍精子穿透。而子宫内膜炎则会对受精卵着床造成不利影响。

2.5解脲支原体生物分群情况将45株菌株放置于PCR反应情况下，发现其出现扩增现象，且产生目的条带，同时部分解脲支原体株分群出现电泳现象。具体如下: 32株为Parvo生物群，其出现的bp条带数量为403，所占比例为71.11%;而剩余13株则属于T960生物群，出现的bp条带数量为448，较Parvo生物群要多，所占比例为28.89%。此外，在PCR反应情况下并未发现Parvo和T960生物群出现混合感染现象。

3　讨论

支原体属于存在于病毒与细菌之间，能够在人体中独立存活的原核状态微生物。支原体的生存环境主要在于人体泌尿系统以及生殖道部位，容易造成这两个部分产生炎症，继而造成患者无法孕育［3］。研究发现，支原体感染并不会对患者血液以及人体组织产生影响，只会附着在其泌尿道或是呼吸道的上皮细胞表层，其生存依赖于宿主细胞，通过吸收营养获取胆固醇以及脂质。在这种情况下，患者细胞会受损，释放出存在毒素的代谢物。在解脲脲支原体中，含有一种尿素酶，会将尿素水解产生大量氨元素，氨元素会毒害健康细胞，对患者生殖功能产生影响［4－6］。

研究发现，解脲脲支原体会从多层面对人体生育能力造成损伤。随着这类型支原体感染比例的不断上涨，临床上使用的抗菌类型药物无论是剂量还是种类都有所增加，继而使得耐药菌株数量也呈上涨趋势［7－9］。且国内外资料提示，不孕症夫妇的宫颈黏液、精液中解脲支原体培养阳性率高达50%以上，由此可见，解脲支原体感染与不孕症的发生有相关关系。解脲支原体感染造成的女性生殖器官病理性改变，是不孕不育的重要原因。对解脲支原体的培养方面，营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10%～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。最适合酸碱值在7.8～8.0，低于7.0则死亡，但解脲支原体最适pH值6.0～6.5。大多数兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%二氧化碳生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3 d出现典型的“荷包蛋样”菌落:圆形(直径10～16 μm)，核心部分较厚，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。此外，支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。其繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，盖因缺乏细胞壁造成分裂时二个子细胞大小均所致。同时，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。

在患者出现不孕不育症状时，其产生原因可能在于以下几点: (1)解脲脲支原体造成患者出现急性输卵管炎症，部分研究者在体外实验中得知，解脲脲支原体会造成动物(实验动物为牛)输卵管纤维毛产生脱落，周围细胞坏死影响卵子存活［10］。(2)解脲脲支原体容易造成患者出现慢性宫颈炎症，让宫颈部分分泌黏液。这种黏液会在一定程度上阻挡精子的穿透，成为“Q型黏液”，造成女性患者不易受精。(3)解脲脲支原体会分泌出一种“N-氨酸酶”［11］类型物质，影响受精卵的正常发育，在早期将其杀死。(4)解脲脲支原体会引起患者子宫内膜产生炎症，即使精子进入到子宫内部与卵子结合，也不易在子宫壁着床。(5)解脲脲支原体容易对细胞产生不良影响，或是让精子形态畸形，让原本健康的精子活力下滑或是减少男性患者精子数量，对受精产生影响。在实验中使用电镜观察患者精子中段部位存在解脲脲支原体［12］。由此可见，这类型支原体属于造成患者不孕不育的重要因素。

在本研究中共有550例标本中，分离出了210株支原体，总感染率为38.19%(210/550)。其中Uu(解脲脲支原体)构成比为69.05%，分离率为26.37%; Mh(人支原体)构成比为2.38%，分离率为0.91%; Uu+Mh构成比为28.57%，分离率为10.91%。由此可见解脲脲支原体感染率最高。而不孕不育组经解脲脲支原体培养后结果为47.62%的女性为阳性，已生育组7.14%的女性为阳性，差异有统计学意义(P＜0.05) ;不孕不育组39.29%的男性结果为阳性，已生育组9.23%的男性为阳性，差异有统计学意义(P＜0.05)。由此可见解脲脲支原体是导致不孕不育、早产以及自然流产的主要因素。同时对210株支原体进行药敏试验后发现，解脲脲支原体耐药性最强的为环丙沙星、红霉素以及罗红霉素，敏感性最高的则为普那美素、多西环素以及交沙霉素。由于临床滥用抗菌药物，再加之支原体自身对于细胞壁的缺乏，致使对青霉素这类干扰细胞壁的合成抗生素缺乏敏感性，因此需选取敏感性较高的药物予以治疗，摒弃传统的经验型用药方法，采用联合用药法。此外，在168例不孕不育女性中，有80例合并衣原体感染，91例患者则合并其他妇科疾病，这也是导致不孕不育的重要影响因素之一，因此女性要注意阴道清洁，一旦发现不适症状应立即就诊，避免导致不孕不育。本研究还将45株菌株放置于PCR反应情况下，发现有71.11%的为Parvo生物群，28.89%的属于T960生物群。对于女性泌尿生殖道而言，Parvo生物群是一种优势群，而T960生物群则极容易导致女性患者出现泌尿生殖道感染现象，且Parvo生物群也有可能是作为定植菌群而存在。

综上所述，解脲脲支原体感染是造成患者不孕不育的重要因素，临床检验中应重视对这类支原体的筛查与检验。同时注重对患者的药敏试验，根据实验结果选择合适的抗生素类药物，提升药物作用有效性。

参考文献

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