血清倍比稀释法应用于自身抗体合并同种抗体鉴定—附1例报告

郭路生 李建路 李 姣

血清倍比稀释法应用于自身抗体合并同种抗体鉴定—附1例报告

郭路生1李建路2李 姣1

目的探讨自身抗体合并同种抗体鉴定的简便方法。方法采集自身抗体合并同种抗体患者血清，使用生理盐水将待检血清倍比稀释，分别与抗体鉴定谱细胞反应，观察谱细胞反应格局变化，分析反应结果。结果随着待检血清稀释倍数的增加，各谱细胞凝集强度逐渐减弱至消失。待检血清原液与谱细胞反应，10个谱细胞均凝集，凝集强度无差异；随着待检血清稀释倍数的增加，谱细胞凝集强度减弱程度出现差异，自身抗体致凝集消失，同种抗体致谱细胞凝集格局呈现，对照谱细胞格局表可进行同种抗体鉴定。结论血清倍比稀释法，较以往自身抗体吸收法更加简便、快速，但有可能造成低效价同种抗体漏检，须谨慎使用。

倍比稀释法；自身抗体；同种抗体；抗体鉴定

自身抗体合并同种抗体，常发生于多次输血治疗的患者，同时患有自身免疫性疾病，内外科患者均可出现。由于患者血清中游离自身抗体的存在，导致不规则抗体筛查3个筛查细胞均呈阳性；且由于自身抗体的掩盖，在进行抗体鉴定时，抗体鉴定10个谱细胞均呈阳性，凝集强度往往无强弱之分，无法根据反应格局判断合并同种抗体的特异性。以往在实验室中，通常使用自身细胞吸收自身抗体后，再进行同种抗体鉴定。但这种方法耗费时间较长，对抢救急重患者不适用［1］。本研究旨在探讨血清倍比稀释法在自身抗体合并同种抗体中的应用。

1 材料方法

1.1 研究对象

贺某，男性，40岁。2014年末在外院，因外伤致截肢，术中及术后多次输注红细胞制剂。近日，为行钢板取出术，来我院住院治疗。术前备血时，发现不规则抗体筛查3个筛查细胞均阳性，凝集强度无强弱区分，与多袋ABO同型供血者配血，主次侧均不相合。为了查清原因，决定进行不规则抗体鉴定。

1.2 试剂与仪器

不规则抗体筛选细胞（3谱，长春博迅生物技术有限责任公司，批号：20141001）；抗体鉴定谱细胞（10谱，上海血液生物医药有限责任公司，批号：20145705）；抗球蛋白检测卡（长春博迅生物技术有限责任公司，批号：20140201）；Rh分型抗体（上海血液生物医药有限责任公司，批号：20140217）。以上所有试剂均在效期内使用。FYQ型免疫微柱孵育器、TD-3A型血型血清学用离心机（长春博研医学生物仪器公司）。

1.3 标本处理

EDTA-K2抗凝管采集患者静脉血，1 000 g离心5 min，取上清，待检。

1.4 不规则抗体筛查

血清标本，使用抗人球蛋白检测卡进行不规则抗体筛查，按厂家使用说明书进行操作和判读并记录。

1.5 不规则抗体鉴定

将待检血清，用生理盐水稀释2，4，6，8，16，32，64，128倍，使用微柱凝胶抗人球蛋白卡，分别和抗体鉴定谱细胞进行反应。观察比较不同稀释倍数下，待检血清和10个谱细胞反应的凝集强度变化情况。当某一稀释倍数下，部分谱细胞凝集强度减弱或凝集消失，将剩余仍存在凝集的谱细胞与谱细胞格局表进行比对，鉴定抗体特异性。如抗体鉴定为Rh系统抗体，使用Rh分型抗体鉴定受血者Rh血型抗原，确定抗体相应抗原阴性，以验证抗体鉴定结果，并需找相应抗原阴性红细胞进行交叉配血。

2 结果

待检血清原液与谱细胞反应，10个谱细胞均凝集，凝集强度均达3+～4+，无差异；待检血清稀释4倍后，部分谱细胞凝集强度减弱明显，另外一部分谱细胞凝集强度减弱不明显，反应格局初步呈现；当待检血清继续稀释至8倍时，凝集强度减弱的谱细胞凝集消失，呈阴性，余谱细胞凝集强度由原来的3+S降至2+w，根据谱细胞反应格局表，鉴定为抗cE，见表1。

3 讨论

自身抗体合并同种抗体，常常造成交叉配血和抗体鉴定困难，长期以来一直困扰着输血实验室工作人员。实验室中，技术人员常常将自身红细胞进行轻度热放散或氯喹放散或乙醚放散后，使用自身吸收方法去除自身抗体对同种抗体鉴定的干扰［2-4］。此种方法需要一定量的自身压积红细胞，增加自身免疫溶血性贫血的患者贫血负担；更主要是的，吸收放散耗费时间较长，结果常不理想，不适用于紧急用血［1］。按照台湾大学医院张志升教授的建议，针对自身抗体合并同种抗体的患者，采用血清倍比稀释法去除自身抗体的干扰，能够很容易的鉴定出同种抗体的特异性。此种方法根据抗体的免疫学特性设计。自身抗体大多是高亲和力，但低效价，稀释前与抗原红细胞结合能力较强，稀释后，结合红细胞能力大幅降低；反之同种抗体多低亲和力高效价，未稀释时，结合红细胞能力表现不佳，但稀释数倍后，仍有较强的结合红细胞的能力［5-6］。此种方法，简便，快速，经济，适用于自免溶贫合并同种抗体患者紧急输血时。但血清倍比稀释法，也能将低效价的同种抗体稀释掉，造成漏检。因此，如果条件允许，建议两种方法同时进行，互相验证，保证血型抗体鉴定准确。值得注意的是，患者血清中如果有游离的自身抗体，此时不管在试管中用什么方法去除自身抗体，配上血都是假象，因为患者体内的自身抗体并没有去除，输进体内的红细胞一样会凝集。因此，如何去除患者体内自身抗体的影响值得进一步研究。

表1 抗体鉴定反应格局表

［1］ 兰炯采，刘景汉，马红丽. 输血前试验中值得研讨的若干问题［J］.中国输血杂志，2013，26（1）: 1-2.

［2］ 余林，陈文珠，凤婧，等. 1例自身抗体合并抗-Fv～b的鉴定及输血治疗［J］. 中国输血杂志，2014，27（1）: 82-83.

［3］ 骆宏，张润青，罗广平，等. 混合抗体型自身免疫性溶血性贫血的血型定型和抗体鉴定［J］. 中山大学学报（医学科学版），2013，34（3）: 434-437.

［4］ 李健，董玉芳，吕文彬，等. 自身抗体合并抗-Mur、抗-C及其他同种抗体紧急情况下的配血处理［J］. 中外医学研究，2012，10（27）: 7-9.

［5］ 刘敬闪，田亚娟，赵倩，等. 自身抗体引起疑难配血的处理对策［J］. 临床血液学杂志，2013（5）: 669-670.

［6］ 向东，刘曦，王健莲，等. 红细胞温自身抗体的血清学特点分析及配血对策［J］. 中国输血杂志，2008，21（12）: 924-926.

Serum Levels of Double Dilution Method in the Identification of Autoantibodies Associated With the Same Kind of Antibody-A Report of One Case

GUO Lusheng1LI Jianlu2LI Jiao11 The Affiliated Hospital of Jilin Medical University，Jilin 132013，China，2 The Forty-fourth Unit of 93062 Armed in People's Liberation Army Forces China，Jilin 132000，China

ObjectiveA simple method to investigate the autoantibodies combined with isotype antibodys identification.MethodsThe serum of patients with autoantibodies combined with isotype antibodys，to dilute the serum with normal saline，to observe the changes of serum and lineage cells responses，and to analyze the results of the reaction.ResultsThere was no significant difference of the responses of primary test serum with all the 10 lineage cells. Along with the increase of the dilution ratio of the serum，the intensity of the lineage cells decreased，and the degree of the decrease was different，aggregation of the antibody caused by the autoantibodys disappeared，and the agglutination pattern caused by the isotype antibodys is more clear. Identification of the isotype antibodys can be achieved by the pattern of lineage cells.ConclusionSerum times dilution method，compared with the previous autoantibodies absorption method is more quick and simple， but may cause low titer of alloantibodies undetected. Must be cautious.

Times dilution method，Autoantibodys，Isotype antibodys，Antibody identification

R446

A

1674-9316（2015）31-0140-02

10.3969/j.issn.1674-9316.2015.31.104

1 132013 吉林，吉林医药学院附属医院

2 132000 吉林，中国人民解放军93062部队44分队