同型半胱氨酸不同检测方法结果分析

赵彦，康凤凤，王薇，何法霖，钟堃，王治国

(北京医院卫生部临床检验中心，北京100730)

同型半胱氨酸不同检测方法结果分析

赵彦，康凤凤，王薇，何法霖，钟堃，王治国

(北京医院卫生部临床检验中心，北京100730)

目的评价并分析同型半胱氨酸(Hcy)项目不同检测方法的结果。方法采用卫生部临床检验中心(NCCL)的室内质量控制(IQC)监测系统调查分析全国110家实验室Hcy检测项目的不精密度水平[即变异系数(CV)]。再利用NCCL基于Web的室间质量评价(EQA)系统评估2012年全国110家实验室Hcy检测的偏倚(Bias)。引入我国目前的EQA评价标准(TEa=20%)进行评价，并通过公式西格玛(σ)=(TEa－Bias)/CV计算项目的σ度量值。同时评价各方法组实验室的及格率和实验室间CV。结果从σ水平、实验室间的不精密度水平以及EQA及格率三方面对Hcy不同检测方法的结果进行分析，化学发光法σ＞6、3＜σ≤6、0＜σ≤3、σ≤0的比例分别为0%、7.69%、30.77%、61.54%，免疫比浊法分别为9.09%、0%、63.64%、27.27%，循环酶法分别为11.63%、31.40%、47.67%、9.30%。化学发光法、免疫比浊法、循环酶法5个批号质控品的实验室间CV分别为33.66%～43.77%、19.54%～25.24%、10.46%～14.21%，及格率分别为53.3%、53.3%～80.0%、85.9%～92.3%。结论我国Hcy的检测水平还有待提高。

同型半胱氨酸;六西格玛;西格玛度量;不精密度;偏倚

同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是一种含硫氨基酸。临床及实验研究均表明高水平的Hcy是冠状动脉粥样硬化和心肌梗死的危险指标，其水平高低与疾病的危险程度成正比，因此越来越受到广泛的重视和关注。为了保障Hcy检测结果的质量，需建立完善的质量保证体系[1]。卫生部临检中心已于2007年正式在全国范围内开展Hcy的室间质量评价(external quality assessment，EQA)工作，同时也对室内质量控制(internal quality control，IQC)水平进行调查研究。我们将EQA及IQC情况结合六西格玛(6σ)理论对其不同检测方法的结果进行分析。

材料和方法

一、研究对象

卫生部临床检验中心在2012年要求参加卫生部临床检验中心Hcy室间质评项目的所有单位同时上报2月份的室内质控数据，室内质控品为各临床实验室内部使用的相应配套质控品或者自制质控品。EQA所用质控品由美国伯乐(Bio－Rad)公司提供的5个批号的血清基质质控品。

二、方法

1.西格玛(σ)度量值的估计对IQC数据进行统计，得到每个实验室IQC的变异系数(coefficient of variation，CV)。采用基于Web方式的EQA软件系统调查2012年参加卫生部临床检验中心Hcy的EQA回报结果，按照检测方法分组，将各实验室检测结果与各组靶值比较，求5个批号质评物的平均偏差作为各实验室方法的偏倚(Bias)估计。利用公式:σ=(TEa－Bias)/CV[2]，结合IQC评价标准(TEa=20%)，得到各实验室的σ度量值。σ≥3为实验室的最低水平，σ＞6称为一流水平[3]。将各实验室的σ度量值按照σ≤0、0＜σ≤3、3＜σ≤6和σ＞6分成4组，计算各组的构成比。

2.实验室间CV将3倍标准差(s)之外的检测结果视为离群值抛除后，计算各组的实验室间CV。

3.及格率实验室80%以上(含80%)结果在允许范围内为成绩合格。评价标准为靶值± 2.5 μmol/L或靶值±20%(取大者)。

结果

参加全国Hcy调查的187家实验室中有15家实验室未回报检测方法或者选择其它检测方法，对余下的172家实验室按照检测方法分组并进行统计分析。回报的IQC结果仅有110家为有效数据，因此将110家实验室的σ度量值进行分组。循环酶法仅有37家实验室达到3σ水平，另外两种检测方法组的结果更不理想，均只有1家实验室达到3σ水平。见表1。

表2为5个批号质评物在各分组中的实验室间CV。循环酶法的不精密度低于其他两种方法。各分组的EQA及格率见表3。

讨论

本研究结果显示我国Hcy检测水平与6σ水平还有很大差距。其中使用最多的是循环酶法，使用这种方法的实验室中有31.4%的σ值在3～6之间，仅有11.6%的实验室满足σ＞6。而化学发光法和免疫比浊法组中σ≥3的实验室分别为7.69%和9.09%。表2中循环酶法组的稳健CV范围为10.46%～14.21%，是3个方法组中最小的。再结合2012年参加EQA各参评实验室不同方法组的及格率，循环酶法的及格率均在85%以上。循环酶法的基本原理为Hcy经三(2－羧乙基)膦还原成游离型Hcy，通过与共价底物反应，循环放大，同时产生腺苷，腺苷立即被水解成氨和次黄嘌呤，氨在谷氨酸脱氢酶的作用下，使NADH转化为NAD+，样本中的Hcy浓度与NADH转化速率成正比。由于循环酶法具有良好的精密度、线性范围宽、抗干扰因素强、结果准确且能够满足大批量样本自动检测，是一种值得推广的方法[4－6]。同理分析，化学发光法的σ水平、CV以及及格率均较低，免疫比浊法居中。当然同一方法组的实验室可能使用的是不同厂家的仪器，各类型的仪器之间可能在精密度水平、系统误差方面也不尽相同，这也会造成同一方法组间实验室的结果差异较大。而且化学发光法和免疫免浊法这两个方法组的实验室数较少，出现离群值对整组的影响也较大。

EQA计划通过评价不同实验室的性能为检验医学的实践提供了重大的价值，分为6个类别(见表4，与计划设计有关EQA的评价能力)，最佳室间质评计划的目标是用第一类计划，能评价整个测量区间的偏倚和再现性、校准溯源性和实验室间的一致性。而现在的EQA还停留在第6阶段，无参考测量程序或有证参考物质的赋值[7]。本研究仅将2012年的172个EQA结果及110家实验室的IQC结果用规范的σ度量方法结合起来，对Hcy检测方法进行简单分析，更为科学合理的性能评估还需要长期、大量的数据。所以我们建议所有开展Hcy检测的实验室都积极参加全国Hcy的EQA计划，以便我们能够尽快掌握更多实验室的检测水平，并对方法学检测性能进行更全面的分析。

[1]王薇，王治国，李少男.全国同型半胱氨酸检测室间质量评价结果分析[J].现代检验医学杂志，2010，25(3):149－151.

[2]王薇，王治国，李少男.六西格玛在临床实验室的应用[J].中国医疗器械信息，2008，14(12):10－15.

[3]王治国.临床检验6σ质量设计与控制[M].北京:人民卫生出版社，2009:31－36.

[4]叶余辉.循环酶法测定血清同型半胱氨酸试剂盒的评价[J].中国医药指南，2013，11(8):465.

[5]常连刚，赵静，任峰，等.循环酶法测定血浆同型半胱氨酸[J].检验医学，2007，22(1):16－19.

[6]杨军，张红梅，朱元芳，等.自贡地区中老年人群循环酶法同型半胱氨酸水平调查[J].检验医学，2012，27(5):418.

[7]MILLER WG，JONES GR，HOROWITZ GL，et al.Proficiency testing/external quality assessment:current challenges and future directions[J].Clin Chem，2011，57(12):1670－1680.

Result analysis of various detection methods for homocysteine

ZHAO Yan，KANG Fengfeng，WANG Wei，HE Falin，ZHONG Kun，WANG Zhiguo.(National Center for Clinical Laboratory，Beijing Hospital，Ministry of Health，Beijing 100730，China)

ObjectiveTo evaluate the results of various detection methods for homocysteine(Hcy).MethodsThe internal quality control(IQC)information of 110 laboratories from National Center for Clinical Laboratory(NCCL) was collected.The imprecision[coefficient of variation(CV)]of Hcy was analyzed.Bias was estimated according to various detection methods in NCCL External Quality Assessment(EQA)in 2012 through online EQA platform.With current evaluation criteria for EQA(TEa=20%)，sigma(σ)value of each laboratory was calculated as the formula:σ =(TEa－bias)/CV.Furthermore，the passing rates and inter－laboratory CV for each group were evaluated.ResultsThe proportions of σ＞6，3＜σ≤6，0＜σ≤3 and σ≤0 by chemiluminescence，immunoturbidimetry and enzymatic cycling were 0%，7.69%，30.77%，61.54%;9.09%，0%，63.64%，27.27%and 11.63%，31.40%47.67%，9.30%，respectively.The inter－laboratory CV by the 3 methods for 5－run quality control materials were 33.66%－43.77%，19.54%－25.24%and 10.46%－14.21%，and the passing rates were 53.3%，53.3%－80.0%and 85.9%－92.3%.ConclusionsLaboratories in China need further efforts to improve the performance of Hcy detection.

Homocysteine;6 sigma;Sigma metric;Imprecision;Bias

1673－8640(2015)03－0284－03

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.020

2014－06－09)

(本文编辑:龚晓霖)

北京市自然科学基金资助项目(7143182)

赵彦，女，1988年生，学士，技师，主要从事医学检验实验室管理工作。

王治国，联系电话:010－58115055。