上海地区体检者中筛查M2型抗线粒体抗体的阳性率分析

蔡逸婷，黄盛，谢松业

(上海交通大学附属第一人民医院检验科，上海200080)

上海地区体检者中筛查M2型抗线粒体抗体的阳性率分析

蔡逸婷，黄盛，谢松业

(上海交通大学附属第一人民医院检验科，上海200080)

目的通过分析成年体检者M2型抗线粒体抗体(AMA－M2)的阳性率情况，评价AMA－M2对原发性胆汁性肝硬化(PBC)早期筛查的价值。方法收集健康体检人群血清样本6 658例，其中男3 845例，女2 813例，男女比例为1.37∶1，年龄(46±13)岁。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)定量检测AMA－M2，并与血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)和γ－谷氨酰基转移酶(GGT)检测结果同时分析。结果在6 658名健康体检者中AMA－M2阳性97例(1.46%)，其中男性和女性分别为44例(1.14%)和53例(1.88%)，男女之比为1∶1.2;≥46岁的女性AMA－M2阳性率高于＜46岁的女性(P＜0.01)，97例AMA－M2阳性且无任何疾病包括PBC相关临床症状者中有8例伴ALP升高，GGT也升高。结论对健康体检者应高度重视AMA－M2与ALP/GGT甚至ALT与AST的关联分析，AMA－M2筛查是高危人群早期发现PBC的有效途径，按照美国肝脏病学会(AASLD)PBC诊疗指南的诊断标准监测AMA－M2阳性体检者的AMA－M2和肝脏血清酶水平有助于提高PBC的早诊率。

M2型抗线粒体抗体;原发性胆汁性肝硬化;健康体检;阳性率;自身免疫性疾病

原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis，PBC)是一种原因不明的由自身免疫介导的慢性进展性、肝内小胆管进行性破坏伴门脉炎症性改变和肝内胆汁淤积的疾病，最终导致肝纤维化和肝硬化[1]。PBC早期症状轻微，临床表现不典型，极易误诊为病毒性肝炎而使病情迁延发展，造成严重后果。M2型抗线粒体抗体(M2 anti－mitochondrial antibody，AMA－M2)是PBC高度特异的血清学指标[2]。有研究报道，在PBC无相关临床症状和生化指标异常的隐匿期，可检测到AMA－M2呈阳性[3]。因此，监测血清AMA－M2成为发现早期PBC的重要指标。根据PBC的以上特点，本研究对健康体检者的AMA－M2筛查结果和其它相关肝功能生化指标进行了统计汇总，旨在分析AMA－M2筛查对早期发现PBC的作用。

材料和方法

一、材料

1.样本选择随机收集上海交通大学附属第一人民医院体检中心2012年2月至2013年2月体检血清样本6 658例，受检者年龄(46.1±12.7)岁，其中男3 845例，女2 813例，以每10年为一个年龄分布区间分为7组。同时收集受检者丙氨酸氨基转移酶(alanine aminotransferase，ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase，AST)、γ－谷氨酰基转移酶(gamma glutamyltrasferase，GGT)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)等血清酶学检测数据。

2.PBC诊断标准参照2009年美国肝脏病学会(American Association for the Study of Liver Disease，AASLD)推荐的PBC诊断指南:(1)存在胆汁淤积的生化学证据，主要是ALP升高;(2) AMA/AMA－M2阳性;(3)组织学上存在非化脓性胆管炎以及小叶间胆管损伤的表现。当满足以上3项标准中的2项时即可诊断PBC，肝脏穿刺活检不是必须的[4]。

3.试剂AMA－M2酶联免疫吸附试验(enzyme－linked immunosorbent assay，ELISA)试剂盒，其包被靶抗原为克隆表达AMA－M2的3个靶抗原侧链，即二氧酸脱氢酶复合体E2 (branched－chain oxo acid dehydrogenase complex E2，BCOADC－E2)、丙酮酸脱氢酶复合体E2 (pyruvate dehydrogenase complex E2，PDC－E2)、2－氧戊二酸脱氢酶复合体E2(oxoglutarate dehydrogenase complex，OGDC－E2)及其连接形成的三联体BPO－E2融合蛋白。该试剂盒由上海科新生物技术股份有限公司提供。

二、方法

1.样本采集真空采血管采集受检者清晨空腹静脉血，离心后分离血清，部分样本用于即时检测，部分样本分装、标记并－20℃保存。

2.AMA－M2检测使用ELISA，检测时复温冻存样本。严格按照试剂和说明书操作。反应完毕在Thermo Multiskan MK3型酶标仪(芬兰Thermo－Fisher公司)上读取主波长450 nm和参考波长630 nm处的吸光度(A)值，根据标准曲线，用四参数回归计算出待测样本浓度值，浓度值≥25 RU/mL为阳性。

3.血清酶活性测定血清样本2 h内在RocheMP800型全自动生化分析仪(美国Roche公司产品)并用配套试剂测定ALT、AST、GGT和ALP活性。参考范围根据《全国临床检验操作规程》(第3版)设定，ALT 5～40 IU/L，AST 8～40 IU/L，GGT 7～50 IU/L，ALP 35～120 IU/L。

三、临床分类

根据ALT、AST、GGT和ALP正常与否，将AMA－M2阳性的体检人群分为“肝功能正常组”和“肝功能异常组”，即转氨酶和ALP均正常者为肝功能正常组，转氨酶和/或ALP升高者为肝功能异常组。

四、统计学方法

全部数据输入SPSS 13.0软件进行统计学分析，定性资料采用χ2检验进行分析，非正态定量资料以中位数(四分位数)表示，采用秩和检验进行分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

一、AMA－M2阳性率

在筛查的6 658例受检者中AMA－M2阳性97例，阳性率为1.46%;其中男性44例，阳性率为1.14%;女性53例，阳性率为1.88%;男女之比为1∶1.2，差异有统计学意义(χ2=6.19，P＜0.05);≥46岁人群的AMA－M2阳性率明显高于46岁以下人群(χ2=3.91，P＜0.05)，见表1。男性≥46岁人群AMA－M2阳性率与＜46岁人群比较差异无统计学意义(χ2=0，P＞0.05);女性≥46岁人群AMA－M2阳性率与＜46岁人群比较差异有统计学意义(χ2=8.41，P＜0.01)。

二、AMA－M2阳性者的肝脏酶学相关变化指标

97例AMA－M2阳性的受检者中ALP升高8例，见表2。这8例ALP升高者GGT均升高，其中4例ALT和AST均升高。这8例体检者均无PBC相关临床表现，也无其他疾病相关表现，影像学或病理学方面研究有待进一步的补充。

三、AMA－M2浓度与肝脏酶的相关性

将97例AMA－M2阳性者以150 RU/mL为界分为低浓度(AMA－A2＜150 RU/mL)和高浓度(AMA－A2≥150 RU/mL)两组[5]，AMA－M2高浓度组ALT、AST、ALP和GGT的阳性率均高于AMA－M2低浓度组(P＜0.01)。AMA－M2高浓度组和低浓度组GGT阳性率明显高于其它3项指标(P＜0.01)。AMA－M2高浓度组各肝功能指标平均浓度亦稍高于AMA－M2低浓度组，但差异无统计学意义(P均＞0.05)。见表3。

四、其它指标

97例AMA－M2阳性的受检者未发现乙型肝炎病毒检测和其他免疫性检测异常。

讨论

PBC在世界各地均有分布，西方国家患病率较高，约为(1.9～40.2)/10万，年发病率约为(0.39～1.5)/10万，且随着疾病重视度的提高和新型高特异性自身抗体(AMA－M2)的推广使用，报道的PBC患病率呈逐年增加趋势[6－8]。英国研究机构报道PBC的患病率从1987年的23.0/10万提高到1994年的32.2/10万，女性发病率为94.0/10万[9];美国的发病率则由2.7/10万提高到40.2/10万，女性发病率为65.4/10万[6]。LIU等[10]对8 000余例中国南方体检人群筛查发现，中国人群中PBC的总体患病率达49.2/10万，而40岁以上的女性患病率达155.8/10万，约是普通人群的3倍。

AMA－M2是PBC特异的早期诊断指标，SHIBATA和MATTALIA等[11－12]分别用间接免疫荧光法和ELISA筛查了健康体检员工的AMA和AMA－M2，结果二者的阳性率分别为0.64%和0.5%，他们认为健康体检人群监测AMA－M2有助于早期发现PBC。本研究97例AMA－M2阳性者中女性有53例(1.88%)，男性有44例(1.14%)，男、女比例差异有统计学意义(P＜0.05)。本研究把46岁以下人群分为一组，主要是因为统计下来这一年龄段人群发病率无明显差异，而46岁以上年龄每10年分为一组，可以看到尤其是女性的发病率呈增加的趋势比较明显。男性≥46岁人群AMA－M2阳性率与＜46岁人群比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，而女性≥46岁人群与＜46岁人群比较，差异有统计学意义(P＜0.01)，且共有36例46岁以上的女性AMA－M2阳性，该人群的阳性率达2.66%，约为全人群的2倍，符合中老年女性是PBC高危人群的现有流行病学特性。在LIU等[10]研究的8 000余名健康体检人群中，AMA(间接免疫荧光法检测)筛查的阳性率为0.43%，低于本研究。除与样本量、检测方法有关外，人群间的差异可能是阳性率差异的主要原因，更大样本量的调查、分析将有助于揭示AMA－M2在高危健康人群中检测的本质意义。

目前，PBC的诊断主要参照2009年AASLD推荐的PBC诊断指南[4]。在本研究中，共有8例受检者ALP升高，且GGT均升高，其中4例ALT和AST均升高，但8例受检者均主诉无PBC相关临床症状，在后续的研究中，需结合影像学和/或病理学等检查最终确诊是否为PBC。

AMA－M2阳性是诊断PBC的重要依据之一，但AMA－M2阳性也可在慢性肝炎、药物性肝损伤和其他自身免疫性疾病中出现，对于可指示PBC的AMA－M2滴度临界值仍然存在争议[13－15]。本研究显示，AMA－M2高浓度(≥150 RU/mL)组中，ALT、AST、ALP和GGT的阳性率均高于AMA－M2低浓度(＜150 RU/mL)组(P＜0.05)。值得注意的是GGT的阳性率明显高于其它3项指标(P＜0.01)。一般认为肝硬化时血清GGT的改变取决于肝内病变有无活动及其病因。在非活动期多属正常，若伴有炎症和进行性纤维化则往往上升。原发性或继发性胆汁性肝硬化则往往早期有GGT升高。通过本研究也显示，虽然GGT并不是PBC的诊断指标，但确与PBC密切相关，是肝脏受损的重要指标。但并非无临床表现或肝功能异常的AMA－M2低滴度阳性者可排除PBC的诊断。METCALF等[3]对AMA－M2阳性的健康体检者进行10余年的随访发现，有76%无症状的AMA－M2阳性体检者10年内最终出现PBC的临床表现，83%肝功能异常显示存在持续性的胆汁淤积，且临床分期均属于第Ⅰ～Ⅲ期。因此，在健康体检中心筛查AMA－M2是早期发现PBC的重要途径。

[1]SELMI C，BOWLUS CL，GERSHWIN ME，et al.Primary biliary cirrhosis[J].Lancet，2011，377 (9777):1600－1609.

[2]姜小华，仲人前，孔宪涛，等.原发性胆汁性肝硬化发病机制研究进展[J].中国免疫学杂志，2002，18(8):586－589.

[3]METCALF JV，MITCHISON HC，PALMER JM，et al.Natural history of early primary biliary cirrhosis[J].Lancet，1996，348(9039):1399－1402.

[4]LINDOR KD，GERSHWIN ME，POUON R，et al.Primary biliary cirrhosis[J].Hepatology，2009，50: 291－308.

[5]杨国香，李丽君，董小娟，等.抗线粒体抗体阳性患者的AMA－M2亚型检测及ANA核型分析[J].国际检验医学杂志，2010，31(1):39－41.

[6]KIM WR，LINDOR KD，LOCKE GR 3RD，et al.Epidemiology and natural history of primary biliary cirrhosis in a US community[J].Gastroenterology，2000，119(6):1631－1636.

[7]SOOD S，GOWPJ，CHRISTIE JM，et al.Epidemiology of primary biliary cirrhosis in Victoria，Australia:high prevalence in migrant populations[J].Gastroenterology，2004，127(2):470－475.

[8]PRINCE MI，JAMES OF.The epidemiology of primary biliary cirrhosis[J].Clin Liver Dis，2003，7(4): 795－819.

[9]JAMES OF，BHOPAL R，HOWEL D，et al.Primary biliary cirrhosis once rare，now common in the United Kingdom[J].Hepatology，1999，30(2):390－394.

[10]LIU H，LIU Y，WANG L，et al.Prevalence of primary biliary cirrhosis in adults referring hospital for annual health check－up in SouthernChina[J].BMC Gastroenterol，2010，10:100.

[11]SHIBATA M，ONOZUKA Y，MORIZANE T，et al.Prevalence of antimitochondrial antibody in Japanese corporate workers in Kanagawa prefecture[J].J Gastroenterol，2004，39(3):255－259.

[12]MATTALIA A，QUARANTA S，LEUNG PS，et al.Characterization of antimitochondrial antibodies in healthy adults[J].Hepatology，1998，27(3):656－661.

[13]李晓良，杨大国，林巧，等.1 335例慢性乙肝肝炎患者血清自身抗体检测分析[J].中西医结合肝病杂志，2006，16(3):162－163.

[14]杨建轩，闫惠平，檀玉芬，等.药物性肝损伤患者的自身抗体分析[J].临床荟萃，2008，23(14): 992－995.

[15]MOURITSEN S，DEMANT E，PERMIN H，et al.Highprevalenceofanti－mitochondrialantibodies among patients with some well－defined connective tissue diseases[J].Clin Exp Immunol，1986，66(1): 68－76.

(本文编辑:姜敏)

欢迎订阅《检验医学》

《检验医学》(原《上海医学检验杂志》)为上海市卫生局主管、上海市临床检验中心主办的国内外公开发行的杂志。1986年3月创刊，至今已发行29年，从2009年起改为月刊。

本刊坚持以实用为主，理论与实践、普及与提高、检验与临床实现三结合，报道本专业领域中的最新科研成果、实用技术的新进展、各种检验的方法与试剂、仪器的性能和特点内容。既体现了检验医学界的学术水平，也为全国各级临床检验人员提供了他们所需要的基础知识和新理论、新技术。就检验医学的方法学而言，新颖的自动化仪器及试剂，各种技术的日臻完善，加之小型化、简单化和即时检验(POCT)的发展，不断满足对患者快速诊断和自我诊断的需求，检验医学的发展使之成为临床医学中不可或缺的重要学科。为了更广泛深入地传播检验医学新知识和现代信息，本刊于2004年起，将《上海医学检验杂志》更名为《检验医学》。本刊栏目现设有临床微生物学、临床生物化学、临床免疫学、临床血液与检验学、分子生物学、实验室管理等专业的论著、论著摘要、讲座、综述、会议(座谈)纪要、经验交流、国内外学术动态、教学园地、新技术和新方法等。从1999年起本刊开设“专题”栏目，其内容新，信息量大，深受国内医学检验同道的好评。

近年来，承蒙全国检验界同道关心和厚爱，在杂志编委会及编辑部全体同仁共同努力下，杂志面貌有了较大改观，内在质量也不断提高。自本刊不定期以专栏形式刊登读者关心的各检验专业的“热点”文章以来，全国同行评价颇高，为此今年将继续保留“专栏”特色，以增加刊物的学术性和可读性。同时为满足全国检验医学工作者充实基础理论知识、促进检验医学水平、提高教学和科研质量的需要，本刊2014年已开设继续教育(Ⅰ类学分)至今，请留意本刊杂志。

本刊为月刊，大16开本，刊号为CN31－1915/R，价格定为每册11元，全年订阅为132元。有意订阅者，请与本刊联系。

本刊地址:上海市洪山路528号《检验医学》编辑部;邮编:200126;电话:021－68316211、68316300－1102;传真:021－68315766。网址:http://www.shjyyx.com;E－mail:shjyyxzz@126.com。

《检验医学》编辑部

Analysis on the positive rate of M2 anti-mitochondrial antibodies in physical examine screening in Shanghai

CAI Yiting，HUANG Sheng，XIE Songye.(Department of Clinical Laboratory，Shanghai First People's Hospital，Shanghai Jiaotong University，Shanghai 200080，China)

ObjectiveTo investigate the early screening significance of M2 anti－mitochondrial antibodies(AMA－M2) for primary biliary cirrhosis(PBC)in physical examine，through analyzing the positive rate of AMA－M2.MethodsSerum samples were collected from 6 658 healthy subjects(3 845 males and2 813 females)，and the sex ratio was1.37∶1.Their age was46±13.AMA－M2 was quantitatively determined by enzyme－linked immunosorbent assay(ELISA).Serum alanine aminotransferase(ALT)，aspartate aminotransferase(AST)，alkaline phosphatase(ALP)and gamma glutamyltransferase (GGT)were determined，and the results were analyzed cemparatively.ResultsAMA－M2 were detected in 97 of 6 658 healthy subjects(1.46%)，including44 males(1.14%)and53 females(1.88%)，and the sex ratio was1∶1.2.AMAM2 positive rate of females above 46 years old was higher than those below 46 years old(P＜0.01).The 8 of 97 AMA－M2 positive cases without PBC clinical feature had increasing ALP and GGT.ConclusionsPhysical examination should pay attention to the correlation analysis of AMA－M2 with ALP/GGT and ALT with AST.AMA－M2 screening is an effective mean to high risk population in the early detection of PBC.According to American Association for the Study of Liver Disease (AASLD)PBC liver disease diagnostic criteria，positive AMA－M2 and serum liver enzyme help with improving the early detection rate of PBC.

M2 anti－mitochondrial antibody;Primary biliary cirrhosis;Physical examination;Positive rate; Autoimmunity disease

1673－8640(2015)03－0214－05

R446.1

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.002

2014－06－19)

蔡逸婷，女，1968年生，学士，副主任技师，主要从事肝炎、肿瘤标志物和病毒的实验室检查及自身免疫性疾病的实验室诊断工作。