微生物标本培养前涂片革兰染色镜检的临床意义

张国英，夏学红

(南京中医药大学附属南京市中西医结合医院检验科，江苏南京210014)

微生物标本培养前涂片革兰染色镜检的临床意义

张国英，夏学红

(南京中医药大学附属南京市中西医结合医院检验科，江苏南京210014)

目的探讨临床上微生物送检标本在培养前进行涂片镜检的临床意义。方法对365例临床送检的不同类型的微生物标本先进行涂片染色检查，再接种进行培养，分析二者的符合率。结果365例送检标本中，有痰液标本211例，尿液标本40例，分泌物标本76例，其他标本(主要是脓液及胸腹水标本)38例，其中有不合格标本17例。348例合格标本中培养阳性93例，其中痰液标本、尿液标本、分泌物标本和其它标本的涂片与培养结果间差异无统计学意义(P均＞0.05)，符合率分别为76.6%、62.5%、87.1%和80.0%。结论微生物标本培养前的涂片镜检不仅可以检查送检标本的质量，而且可以减少培养结果的误差，有效提高标本培养的阳性检出率，在实际微生物检验工作中具有十分重要的意义。

涂片;镜检;培养;微生物标本

随着国家抗菌药物整治工作的深入，临床对微生物检验结果的依赖程度越来越高，微生物培养及药物敏感性结果逐渐成为指导临床感染性疾病诊断和治疗的重要依据。检验结果是否准确可靠直接关系到临床医生合理用药是否有效[1]。而微生物送检标本质量的好坏，病原微生物能否被及时、有效地检出，均关系到药物敏感性结果的准确与否。如何及时筛除临床不合格的送检标本，如何尽早发现有意义的致病菌，对送检标本进行培养前的涂片染色镜检应该是行之有效的方法和手段。

材料和方法

一、材料

1.标本来源收集2013年从南京市中西医结合医院病区和门诊送检的微生物标本365例，其中痰液标本211例、尿液标本40例、分泌物标本76例、其它标本(主要是脓液及胸腹水标本) 38例。标准菌株[金黄色葡萄球菌(ATCC 25923)、大肠埃希菌(ATCC 25922)、铜绿假单胞菌(ATCC 27853)]购自江苏省临床检验中心。

2.试剂和仪器快速革兰染色液(珠海贝索生物技术有限公司)，ATB微生物鉴定仪及其配套的鉴定板条(法国生物梅里埃公司)。

二、方法

1.涂片染色镜检用无菌棉签挑取痰液、分泌物及脓液标本中脓性、黏液或血性的部位，制成均匀薄片。尿液及胸腹水:取新鲜标本5～8 mL，置于无菌试管1500×g离心30 min，取沉渣涂片。待涂片自然干燥后做革兰染色、镜检。

2.合格标本及阳性结果判定标准痰液标本:外观为脓性或血性，鳞状上皮细胞＜10个/低倍镜视野，白细胞＞25个/低倍镜视野[2]，另外有些标本白细胞数量上没有＞25个/低倍镜视野，但见到了明显形态、染色特征的致病菌，如流感嗜血杆菌、肺炎克雷伯菌等，应进行培养并向临床回报涂片检查结果。尿液标本:观察10个以上油镜视野，平均每个视野有1个以上细菌者，说明感染的可能性大，作进一步培养;还要观察细菌的种类，如果有3种以上细菌同时存在，则标本可能被污染，应重新留取。分泌物、脓液及胸腹水标本:无菌采集，涂片如有大量鳞状上皮细胞存在则说明标本留取过程中被污染，或培养见到2种或2种以上细菌即疑为标本被污染[3]。培养结果与涂片的符合情况:培养检出的致病菌与涂片镜检中疑似致病菌形态特点相符[4]。疑似致病菌的确认指标:首先区分致病菌和污染菌(了解标本取材部位附近的常居菌丛的分布情况)，其次在镜下找到细菌或真菌被炎性细胞吞噬或伴行，或被炎性细胞所包裹的现象[5]。

3.培养及鉴定痰液标本分别接种在血平板、巧克力平板、麦康凯平板、科玛嘉平板[5%CO2浓度，(35±2)℃]，孵育24～48 h;分泌物、尿液和脓液标本接种在血平板、麦康凯平板;胸腹水标本接种在血平板、麦康凯平板及肉汤增菌液中，放置于(35±2)℃恒温箱孵育24～48 h。观察纯培养菌或优势致病菌并挑取菌落涂片进行革兰染色、分离，用ATB微生物鉴定仪鉴定。

三、统计学方法

应用SPSS 13.0软件进行统计分析，组间比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

一、不合格标本的筛除

按照合格标本的判定标准，365例送检标本中有不合格标本17例，其中痰液标本12例，尿液标本5例，培养后菌落生长情况与镜检相符(痰液标本为唾液痰，菌落生长较少，或见到3种以上细菌，多为正常菌群;尿液标本被污染，见到3种以上细菌生长)。见表1。

二、涂片镜检与培养的阳性符合率比较

348例合格标本中检出致病菌93株，其中痰液标本检出47株，尿液标本检出7株，分泌物标本检出30株，其它标本检出9株。各菌株检出情况见表1。348例合格标本中，痰液、尿液、分泌物和其它标本涂片镜检与培养结果间差异无统计学意义(P＞0.05)，阳性符合率分别为76.6%、62.5%、87.1%和80.0%。见表2。

三、涂片镜检与培养检出微生物类型的符合率比较

348例合格标本中，痰液标本涂片镜检与培养检出微生物类型的符合率分别为阳性球菌50.0%、阴性杆菌70.0%、真菌93.3%;尿液标本分别为66.7%、50.0%、100.0%;分泌物标本分别为75.0%、88.5%、100.0%;其它标本则分别为66.7%、85.7%、0.0%。在348例合格标本中，2种方法均未见到具有明显致病性的阳性杆菌、阴性球菌和其它类型的微生物。见表3。

讨论

目前，临床上涂片镜检主要是将临床送来作微生物检验的各类标本涂成薄片进行革兰染色，在显微镜下直接观察微生物的有无及其形态，其功能主要有以下几点:(1)鉴别细菌;(2)选择药物敏感性纸片;(3)早期诊断;(4)判定合格标本; (5)确定主要病原菌;(6)病原菌半定量;(7)查腹泻菌群失调;(8)提示需补充检查项目;(9)解释培养结果;(10)有利于细菌鉴定[6]。

本研究分析的365例送检标本中不合格标本17例。从镜检情况看，12例不合格痰标本均满足白细胞＜10个/低倍视野，而鳞状上皮细胞＞25个/低倍视野要求，从性状观察均为唾液，培养结果均为正常菌群;尿液标本有5例不合格，涂片镜检沉渣发现革兰阳性球菌、革兰阴性杆菌、革兰阳性杆菌，培养结果与镜检相符，故判定为“标本污染”。所以培养前标本涂片镜检可以及时排除不合格标本，纠正标本采集错误，提高检验结果的正确性和及时性[4－5]。这样既减少了患者的经济损失，同时也避免了由于标本的不合格所导致的错误培养结果给临床造成的误诊、误治[1]。

348例合格标本经培养共检出致病菌93株，而经涂片镜检阳性79例，两者经统计学分析，差异无统计学意义，有较好的符合率。对其不符合的病例进行分析发现，其中涂片阴性而培养阳性13例，分析原因，可能有以下几种:(1)涂片太薄或取材不当，不能如实反映标本的真实性;(2)涂片经革兰染色后，背景为红色，而革兰阴性杆菌也为红色，容易漏检，这一现象在痰液标本中较多见;(3)有些细菌如不动杆菌属，其镜下形态呈革兰阴性球杆菌，与奈瑟菌相似，易混淆;(4)不排除标本在接种过程中的污染。涂片阳性而培养阴性3例，原因可能有以下几种:(1)涂片中看到的细菌被脓细胞吞噬后，白细胞及死亡后的尸体释放出某些物质抑制了细菌的繁殖;(2)标本中有厌氧菌，用常规需氧条件培养，不会生长;(3)标本中有苛氧菌、缓慢生长菌或L型菌，用常规条件培养，可能会因为培养基营养不够、培养时间短、培养环境不适宜等因素而不生长;(4)标本采集前未停用抗菌药物，患者体内残存的抗菌药物抑制了细菌的生长[6－7]。但由于本研究标本较少，具体原因还需扩大标本量进一步研究。

通过比较分析，认为标本培养前的涂片镜检与培养结果具有很大的相关性，据此可以向临床提供一级报告，提前提供感染信息，这对指导预防用药有积极意义[6]。目前，临床上由于微生物检验的特殊性，从标本采集到给临床明确的检验结果，包括病原学诊断和抗菌药物敏感性试验结果一般需要2～3 d，有时需要更长的时间，而此时患者的病情可能已经发生了变化[4]。因此，在标本送达实验室后，对其先行染色镜检，并将镜检结果提前告知临床，可为临床医生试探性合理用药指明方向。同时又可以排除不合格标本，提高致病菌的检出率[5]，为确保检验结果的准确性和及时性提供有效帮助，从而提高患者治疗的有效率，缩短住院时间，节约医疗经费。所以，对我们从事微生物检验工作的人员来说，对临床送检的微生物标本进行涂片染色镜检有着十分重要的意义，大家在实际工作中应加强重视。

[1]蒋开龙，周波，杨志.送检细菌标本直接涂片染色镜检的意义[J].实用医技杂志，2011，18(5):505.

[2]倪语星，尚红.临床微生物学与检验[M].4版.北京:人民卫生出版社，2009:564－565.

[3]骆永年，梁捷.细菌培养标本涂片镜检的意义[J].中国医药指南，2010，8(20):70－71.

[4]袁飞，万莉，谢帮才.358例标本涂片镜检与培养结果的相关性分析[J].中国实验诊断学，2008，12 (6):771－773.

[5]杨朵，辛续丽，马东媛，等.痰培养标本合格性评估标准的比较[J].检验医学，2012，27(9):773－775.

[6]邓宁.培养前标本涂片检查在临床辅助诊断中的应用评价[J].甘肃医药，2012，31(3):179－181.

[7]陈险峰，周庭银.痰标本涂片革兰染色镜检的临床意义[J].检验医学，2013，28(6):499－502.

The clinical significance of smear and Gram staining for microscopy before microbial specimens being cultured

ZHANG Guoying，XIA Xuehong.(Department of Clinical Laboratory，Nanjing Hospital of Integrated Traditional and Western Medicine，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，Jiangsu Nanjing 210014，China)

ObjectiveTo investigate the clinical significance of microbial specimens being smeared and Gram stained for microscopy before they were cultured.MethodsA total of 365 clinical specimens with different types of microorganisms were firstly smeared and stained for microscopy，then were inoculated for culture.Finally，the coincidence rate was analyzed.ResultsAmong the 365 specimens，there were 211 sputum specimens，40 urine specimens，76 secretion specimens and 38 other－type specimens(mainly pus and pleural effusion specimens).Among them，there were 17 unqualified specimens.Of the 348 qualified specimens，93 cases were cultured positive.The detection results of sputum，urine，secretion and other－type specimens were no statistical significance by the smear microscopy and the culture method.The coincidence rates were 76.6%，62.5%，87.1%and 80.0%，respectively (P＞0.05).ConclusionsThe smear microscopy can not only check the quality of specimens，but also reduce the result errors of culture，so as to improve the positive rate of specimens by culture.Therefore，it is of great significance in the actual microbiological testing work.

Smear;Microscopy;Culture;Microbial specimen

1673－8640(2015)03－0258－04

R446.5

A

10.3969/j.issn.1673－8640.2015.03.014

2014－04－01)

(本文编辑:姜敏)

张国英，女，1978年生，硕士，副主任技师，主要从事微生物学和免疫学研究。