甲状腺癌患者血清Hpa、uPA检测及其临床意义

李建业，鲁 凯，姚壮凯，耿 强，张哲雄，孙志超

(连云港市第二人民医院 蚌埠医学院附属连云港医院普外科，江苏 连云港 222023)

甲状腺癌患者血清Hpa、uPA检测及其临床意义

李建业，鲁 凯，姚壮凯，耿 强，张哲雄，孙志超

(连云港市第二人民医院 蚌埠医学院附属连云港医院普外科，江苏 连云港 222023)

目的检测甲状腺癌患者血清乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)含量，探讨其在甲状腺癌诊断中的价值。方法采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）测定38例甲状腺癌患者，37例良性甲状腺结节患者和30例健康人对照组的血清Hpa和uPA水平，并比较各组之间的差异。结果甲状腺癌组Hpa、uPA浓度水平明显高于其他两组，其差异均有显著统计学意义(P＜0.01)，而良性甲状腺结节组与正常对照组比较则差异无统计学意义(P＞0.05)。血清中Hpa浓度与淋巴结转移与否差异无统计学意义(P＞0.05)，而淋巴结转移组血清中的uPA浓度明显高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P＜0.05)。Hpa/uPA的曲线下面积为0.812，联合检测对甲状腺癌的诊断价值大于Hpa和uPA单独检测(P＜0.05)。结论血清Hpa和uPA联合检测在甲状腺良恶性肿瘤的鉴别和预测是否有淋巴结转移方面有一定的临床价值。

甲状腺恶性肿瘤；良性甲状腺结节；乙酰肝素酶；尿激酶纤溶酶原激活物

研究显示乙酰肝素酶(Heparanase，Hpa)、尿激酶纤溶酶原激活物(Urokinase-type plasminogen activator，uPA)与肿瘤的发生发展、侵袭转移以及预后有密切关系[1-3]，但是探讨血清中Hpa和uPA联合检测与甲状腺肿瘤关系方面研究未见报道。本研究应用酶联免疫法(ELISA)检测甲状腺癌患者术前血清中Hpa、uPA的表达，探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2012年1月至2014年1月两年间我院普外科甲状腺结节手术患者75例，乳头状甲状腺癌38例，平均年龄46.11岁，其中有淋巴结转移者18例，无淋巴结转移者20例。甲状腺良性结节37例，平均年龄50.33岁，其中甲状腺囊腺瘤17例，结节性甲状腺肿20例。选取健康志愿者30例作为对照组，平均年龄37.01岁。

1.2 纳入标准 (1)因甲状腺结节入院行甲状腺结节手术的患者。(2)根据血促甲状腺激素(Thyroid stimulating hormone，TSH)、三碘甲状腺原氨酸(Triio-dothyronine，T3)、四碘甲状腺原氨酸(Tetraiodothyronine，T4)、甲状腺球蛋白抗体(Thyroglobulin antibody，TGAb)甲状腺球蛋白抗体、甲状腺球蛋白(Thyroglobulin，TG)等排除患有甲状腺功能亢进症、甲状腺功能减退症、毒性弥漫性甲状腺肿及桥本甲状腺炎等自身免疫性甲状腺疾病者。(3)无肝肾疾病、心脑血管疾病、胃肠道疾病等重大疾病史，无其他系统恶性肿瘤。(4)术前未接受手术、放疗、化疗等抗肿瘤治疗。(5)排除甲状腺癌微小癌。

1.3 标本采集 血清标本均于术前收集。所有受试者空腹8 h以上，采集实验组与对照组新鲜外周血6ml，3 000 r/min离心15min，取上清液1ml分装后标本储存于-80℃深低温冰箱冻存备用至测定。标本采集、贮存受本院科学技术委员会监督、指导。

1.4 实验试剂及检测方法 人乙酰肝素酶(Hpa)ELISA试剂盒(BYS10425B)购自博研生物科技有限公司上海分公司；尿激酶型纤溶酶原激活物uPA ELISA试剂盒(EK0535)购自武汉博士德生物工程有限公司；酶标仪(AP-960)为日本协和蓝怡。采用双抗体夹心ELISA法测定Hpa及uPA表达水平，实验步骤按照试剂盒说明操作，酶标仪测定OD值，根据标准曲线换算出血清Hpa与uPA含量。

2 结果

2.1 不同组受试者血清中Hpa、uPA水平比较 采用方差分析比较三组Hpa、uPA浓度水平，甲状腺癌组Hpa、uPA浓度水平明显高于其他两组，差异均有统计学意义(P＜0.01)；良性甲状腺结节组与正常对照组比较差异无统计学意义(P＞0.05)。血清中Hpa浓度与淋巴结转移与否差异无统计学意义(P＞0.05)；血清中uPA浓度淋巴结转移组明显高于无淋巴结转移组，差异有统计学意义(P＜0.01)，见表1和表2。

表1 不同组血清中Hpa、uPA含量比较(±s)

表1 不同组血清中Hpa、uPA含量比较(±s)

组别 例数Hpa(U/ml)uPA(pg/ml)甲状腺癌组良性甲状腺结节组正常对照组F值P值38 37 30 89.36±7.21 41.23±4.36 40.81±5.17 2169.633 0.000 1678.63±413.27 858.13±127.39 891.59±113.21 280.421 0.000

表2 淋巴结是否转移与血清中Hpa、uPA含量的关系(±s)

表2 淋巴结是否转移与血清中Hpa、uPA含量的关系(±s)

组别 例数Hpa(U/ml)uPA(pg/ml)淋巴结转移组无淋巴结转移组t值P值18 20 90.23±6.21 88.79±7.31 0.625 0.538 1978.43±313.17 1384.15±213.27 10.458 0.000

2.2 Hpa与uPA诊断甲状腺癌效能比较 血清Hpa诊断的样本工作特性曲线(ROC)下AUC为0.694，与uPA的ROC曲线下AUC(0.713)之间差异无统计学意义(Z=1.413，P＞0.05)，而血清Hpa与uPA联合诊断的ROC曲线下AUC为0.812，明显高于Hpa或uPA(Z值分别为2.021、2.371，P均＜0.05)。

3 讨 论

目前临床上确诊甲状腺癌的方法主要是依靠术中冰冻或术后石蜡切片。针对甲状腺癌的诊断以及浸润转移方面，寻找特异性的甲状腺癌肿瘤标记物是近年来学者们所探讨的重点。研究显示Hpa、uPA与肿瘤的发生发展、侵袭转移以及预后有密切关系。

Hpa发现于1999年，是一个内源性葡萄糖醛酸酯酶，能特异性识别并剪切HS侧链。在正常组织中，Hpa mRNA在胎盘之外的成熟非免疫组织中均不表达，但在恶性肿瘤细胞中普遍高表达。通过检测肿瘤患者血清中乙酰肝素酶含量，探讨二者关系的文献较多，但是血清中Hpa检测与甲状腺癌关系的相关研究未见报道。涂祥俊[4]通过对72例非小细胞肺癌患者血清Hpa水平和MMP-9水平表达的检测，结果显示观察组患者的血清Hpa和MMP-9水平均明显高于对照组，且表达水平高低与肿瘤TNM分期呈正相关，提示Hpa和MMP-9对非小细胞肺癌的发生及发展有重要作用。Tang等[5]应用酶联免疫吸附法检测健康妇女、良性和恶性乳腺疾病患者血清MMP-9及HPSE表达水平，结果显示血清MMP-9及HPSE在乳腺癌患者明显高于乳腺良性疾病和健康对照组，提示MMP-9及HPSE可能进一步评估作为预测乳腺癌的进展及预后的生物标志物。在本研究首次应用酶联免疫吸附法对甲状腺癌组、良性甲状腺结节组、正常对照组血清中Hpa浓度进行检测，结果甲状腺癌组Hpa浓度水平明显高于其他两组，良性甲状腺结节组与正常对照组比较差异无统计学意义。提示患者血清中Hpa含量检测对甲状腺癌的诊断具有重要意义，为Hpa作为甲状腺癌新的肿瘤标志物提供理论依据。本研究试图探讨血清Hpa含量与有无淋巴结转移之间的关系。结果二者之间差异无明显统计学意义(P＞0.05)，提示术前血清Hpa含量尚不能用来预测甲状腺癌是否发生淋巴结转移。

uPA属于纤维蛋白溶解系统，是由肿瘤细胞分泌的一种丝氨酸蛋白酶，与肿瘤生长、浸润和转移有关[2-3]。沈倩雯等[6]通过测定结直肠癌患者血浆中uPA以及CEA浓度，发现作为早期诊断，uPA好于CEA，血浆UPA、CEA联合检测，诊断的准确性更好。丁峰[7]采用ELISA法检测血清中uPA含量显示正常乳腺细胞组、良性病变细胞组和乳腺癌细胞组中uPA值逐渐增高，uPA与肿瘤的分化程度相关。组织分化越差，uPA浓度越高，这也提示uPA的浓度变化可能在乳腺癌的诊断中发生着重要作用，其对乳腺癌的早期诊断和判断预后意义重大。在本研究显示，甲状腺癌组血清uPA浓度水平明显高于其他两组，良性甲状腺结节组与正常对照组比较差异无明显的统计学意义，提示患者血清中uPA含量检测对甲状腺癌的诊断具有重要意义。伴有淋巴结转移患者血清uPA浓度高于无淋巴结转移组，提示术前血清uPA含量可以用来预测甲状腺癌是否发生淋巴结转移。

以上实验结果均提示血清Hpa、uPA检测与甲状腺癌诊断关系密切。在诊断效能方面，本研究用ROC曲线评估了血清Hpa和uPA水平作为早期诊断甲状腺癌的临床可行性，结果显示，两者联合检测诊断甲状腺癌优于单独检测，且具有更高的敏感性和特异性。当然，可能由于样本例数的关系，在血清Hpa水平与甲状腺癌是否存在淋巴结转移关系上存在偏差，术前血清Hpa含量能否用来预测甲状腺癌是否发生淋巴结转移，还需要进一步研究。

[1]Zheng L,Jiang G,Mei H,et al.Small RNA interference-mediated gene silencing of heparanase abolishes the invasion,metastasis and angiogenesis of gastric cancer cells[J].BMC Cancer,2010,5(10): 33.

[2]李建业,苗永昌,夏春咸,等.结直肠癌肝转移患者血清HGF、uPA检测及其临床意义[J].海南医学,2013,24(2):218-219.

[3]Wolff C,Malinowsky K,Berg D,et al.Signalling networks associated with urokinase-type plasminogen activator(uPA)and its inhibitor PAI-1 in breast cancer tissues:new insights from protein microarray analysis[J].J Pathol,2011,223(1):54-63.

[4]涂祥俊.非小细胞肺癌患者血清Hpa和MMP-9水平检测及临床意义[D].泸州:泸州医学院,2013.

[5]Tang D,Piao Y,Zhao S,et al.Expression and correlation of matrix metalloproteinase-9 and heparanase in patients with breast cancer [J].Med Oncol,2014,31(7):26.

[6]沈倩雯,金冶宁.UPA，PAI-1在结直肠癌血浆中的测定及其临床意义[J].现代肿瘤医学,2010,18(5):938-941.

[7]丁 峰.血清中尿激酶型纤溶酶原激活物(uPA)在女性乳腺癌诊断中的应用[D].济南:山东大学,2010.

Detection and clinical significance of serum Hpa and uPA in thyroid carcinoma.

LI Jian-ye,LU Kai,YAO Zhuang-kai,GENG Qiang,ZHANG Zhe-xiong,SUN Zhi-chao.Department of General Surgery,the Second People's Hospital of Lianyungang City,the Affiliated Lianyungang Hospital of Bengbu Medical College,Lianyungang 222023, Jiangsu,CHINA

ObjectiveTo explore the clinical significance of serum Hpa and uPA detection in patients with thyroid Carcinoma.MethodsEnzyme linked immunosorbent assay(ELISA)was applied to detect the expression of Hpa and uPA in serum of 38 cases of thyroid carcinoma(thyroid carcinoma group)and 37 cases of patients with benign thyroid nodules(benign thyroid nodules group),30 normal persons(the control group).ResultsHpa and uPA levels in thyroid carcinoma group were significantly higher than those in other two groups(P＜0.01),but there was no statistically significant difference between benign thyroid nodules group and the control group(P＞0.05).The expression of Hpa showed no significant difference between the patients with lymph node metastasis and those without lymph node metastasis(P＞0.05),but the expression of uPA in patients with lymph node metastasis was significantly higher than those without lymph node metastasis(P＜0.05).The area under curve(AUC)of the combination of Hpa/ uPA was 0.812,which was significantly higher than that of Hpa or uPA alone(bothP＜0.05).ConclusionThe combined detection of Hpa and uPAmay have certain application value for the early diagnosis of thyroid carcinoma.

Thyroid carcinoma;Benign thyroid nodules;Heparanase;Urokinase plasminogen activator

R736.1

A

1003—6350（2015）04—0532—03

2014-07-18)

10.3969/j.issn.1003-6350.2015.04.0192

连云港市“科教兴卫工程”青年科技项目（编号：Q1206）

李建业。E-mail：lijianye02101@sina.com