万源粗榧中高三尖杉酯碱的含量测定

2015-04-14刘丹陈安银杨莉贺正涛

应用化工 2015年10期

刘丹，陈安银，杨莉，贺正涛

(四川文理学院化学化工学院，四川达州 635000)

高三尖杉酯碱是从粗榧属植物中提取出具有抗癌作用的生物活性酯碱，是一种天然来源的抗肿瘤药物［1］。基于天然抗肿瘤药物高三尖杉酯碱副作用相对较小的优势，广泛用于恶性肿瘤，其中对白血病的缓解率高达82%，对淋巴肉瘤、肺癌等有较好的疗效，而且安全有效［2］。进入新世纪以来许多抗肿瘤药物如顺铂、卡铂等都是人工合成的［3］，其他一些是人工半合成药物，极少数天然来源的抗肿瘤药物一般都是中药，如人参皂苷Rh2 等，天然的确定结构的西药抗肿瘤药物是非常少见的，因此开发高三尖杉酯碱是当前研究热点。现有国标检测方法为紫外-可见分光光度法，面对天然提取物种类繁多的实际情况，其检测准确程度已不能满足现代医药企业测定要求［4］。建立高效液相色谱法对新发现的万源粗榧提取的高三尖杉酯碱含量进行测定，利于中药资源开发。

1 实验部分

1.1 材料与仪器

甲醇、醋酸铵(0.1 mol/L)均为色谱纯;乙醇、冰醋酸、氨水、氯仿、乙酸乙酯、丙酮均为分析纯;高山尖杉酯碱标准对照品(sigma 公司，含量99%);万源粗榧。

Agilent-1100 高效液相色谱仪，配二极管阵列检测器(检测波长290 nm);YQ-010 超声波清洗仪;TGL-16G-A 离心机;FA1204B 电子分析天平;0.45 μm 滤膜。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件色谱柱为Hypersil GOLD C18(150 mm × 4. 6 mm，5 μm)，流动相为醋酸铵(0.1 mol/L)和甲醇混合液体(体积比为47 ∶53)，用36%醋酸调pH 值7 ～8，流动相流速1.0 mL/min，高效液相色谱二极管阵列检测器，检测波长290 nm。

1.2.2 样品制备称定干燥粗榧树皮粉末10 g，置于250 mL 磨口三角瓶中，加入40% 浓度的氨水5 mL，摇匀，加氯仿50 mL，摇匀，超声辅助提取2 h［5］，室温静置2 h，过滤，氯仿15 mL 分3 次洗涤滤渣，合并滤液，减压蒸干［5］，甲醇溶解至1 mL，离心，清液过0.45 μm 滤膜，按1.2.1 节色谱条件测定，以外标法计算样品中高三尖杉酯碱的含量。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件分析

2.1.1 色谱柱的选择由于从粗榧中提取到的高三尖杉酯碱伴有大量碱性结构的杂质分子，其结构复杂，有相似性，故采用Hypersil GOLD C18(150 mm×3.9 mm，5 μm)反相色谱柱进行测定分析，结果表明，分离效果好、灵敏度较高。

2.1.2 流动相的选择用醋酸铵(0.1 mol/L)和甲醇混合液体体积比例为40 ∶60，45 ∶55，47 ∶53，50 ∶50，55 ∶45，60 ∶40 分别进行实验，综合考虑分离程度和保留时间，故选用醋酸铵(0.1 mol/L)和甲醇的比例为47 ∶53 作为此次实验的流动相。

2.1. 3 流速的选择用0. 5，0. 8，1. 0，1. 3，1.5 mL/min 5 种流速做实验，1.0 mL/min 流速保留时间适中，分离效果相对较好，能满足实验要求，故选用此流速。

2.2 高三尖杉酯碱标准曲线的绘制

准确称取50 mg 高三尖杉酯碱标准品，定容为50 mL，配制成1 mg/mL 的标准溶液，分别移取1.2，3.0，6.0，9.0，12.0 mL 标准溶液定容为10 mL，进样20 μL，按1.2.1 节色谱条件测定，得到高三尖杉酯碱的最佳相对保留时间为3.751 min，其对应浓度的峰面积积分见图1。

图1 高三尖杉酯碱的标准曲线Fig.1 Standard curve Homoharringtonine base

以高三尖杉酯碱浓度C(mg/L)，对峰面积A 进行回归计算，得回归方程式y = 0. 364 249x +1.661 89 及相关系数R2=0.999 94。结果表明，所测溶液高三尖杉酯碱溶液的浓度(x)与峰面积(y)的线性关系良好，R2＞0.999。

2.3 高三尖杉酯碱的样品测定

称定万源地区干燥粗榧树皮粉末10 g，按1.2.2节样品处理方法提取高三尖杉酯碱及其他活性混合物，清液过0.45 μm 滤膜后直接进样20 μL，按1.2.1节色谱条件测定，得到相对保留时间为3.751 min时峰面积积分为:378.856 4，带入回归方程式y =0.364 249x+1.661 89，可得高三尖杉酯碱含量为1 036 mg/L，树皮中含量为0.010 36%，高于文献［6］中大部分地区的高三尖杉酯碱含量。样品中回收率结果见表1，回收率为97.02% ～99.74%。