癌组织中EpCAM、CD44v6的表达与早期低危子宫内膜腺癌远处转移及预后的关系

癌组织中EpCAM、CD44v6的表达与早期低危子宫内膜腺癌远处转移及预后的关系

陈金龙1，2，刘乃富1

(1山东省肿瘤医院，济南250117；2济南大学·山东省医学科学院医学与生命科学学院)

摘要：目的探讨癌组织中上皮细胞黏附分子(EpCAM)、CD44v6的表达与早期低危子宫内膜腺癌远处转移及预后的关系。方法病理检查确诊的早期低危子宫内膜腺癌患者共118例，根据随访中是否发生远处转移分为两组：A组72例为无远处转移者，B组46例为有远处转移者；选取同期行诊断性刮宫或手术治疗且术后病理检查证实为正常子宫内膜的患者30例作对照(C组)。取A、B两组手术中切除的癌组织及C组手术中切除的正常子宫内膜，采用免疫组化法检测各种组织中的EpCAM、CD44v6，并进行分析。结果A组EpCAM阳性表达率为30.6%(22/72)、CD44v6阳性表达率为15.3%(11/72)，B组EpCAM阳性表达率为60.8%(28/46)、CD44v6阳性表达率为39.1%(18/46)，C组EpCAM阳性表达率为26.7%(8/30)、CD44v6阳性表达率为6.7%(2/30)；A组与B组及B组与C组EpCAM、CD44v6阳性表达率相比，P均<0.05；B组EpCAM阳性表达者的中位生存时间为35个月，阴性表达者为43个月，两者相比，P<0.05，B组CD44v6阳性表达者的中位生存时间为38个月，阴性表达者为48个月，两者相比，P均<0.05。结论 早期低危子宫内膜腺癌患者癌组织中EpCAM、CD44v6阳性表达者容易发生远处转移，生存时间较短。

关键词：子宫内膜癌；子宫内膜腺癌；低危子宫内膜腺癌；黏附分子；上皮细胞黏附分子；跨膜糖蛋白；肿瘤转移；疾病预后

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.43.024

中图分类号：R737.33文献标志码：B

收稿日期：(2015-08-14)

通信作者：刘乃富

早期低危子宫内膜癌预后较好，一般术后无需辅助治疗，但仍有部分患者术后发生远处转移，预后较差。寻找预测早期低危子宫内膜癌未来发生远处转移可能性的生物学指标成为近年来研究的热点。上皮细胞黏附分子(EpCAM)和CD44v6在乳腺癌、结直肠癌及甲状腺癌等腺癌组织中的表达变化及临床意义已有文献报道[1～3]。本研究采用免疫组化方法对早期低危子宫内癌患者癌组织中的EpCAM、CD44v6进行了检测，探讨其表达变化与早期低危子宫内膜腺癌远处转移及预后的关系。

1资料与方法

1.1临床资料2000年1月～2010年12月于山东省肿瘤医院接受全面分期手术治疗的早期低危子宫内膜腺癌患者共118例，按照随访中(随访至2014年12月，随访中的相关检查包括妇科检查、超声、胸部X线片、阴道残端细胞学检查及血清CA125检测等)是否发生远处转移(发生远处转移者FIGO分期均为Ⅳ期)分为两组：A组72例为无远处转移者，B组46例为有远处转移者。纳入标准：①初次治疗；②根据FIGO制定的子宫内膜癌病理分期标准分为ⅠA期；③年龄≤60岁；④病理类型为子宫内膜样腺癌，高分化、高中分化及中分化；⑤无脉管癌栓。排除标准：①未行全面分期手术治疗；②术前行抗肿瘤治疗(化疗、放疗、激素治疗等)；③合并其他恶性肿瘤；④临床资料不完整。选取同期行诊断性刮宫或手术治疗且术后病理检查证实为正常子宫内膜的患者30例作对照(C组)。

1.2EpCAM、CD44v6检测方法采用免疫组化SP法。对118例早期低危子宫内膜腺癌患者的癌组织及C组的正常子宫内膜组织进行石蜡包块，4 μm厚连续切片，每例切4张，防脱片处理后分别进行HE染色和免疫组化染色。HE染色后由两名病理医师查看进一步确定诊断。免疫组化SP染色方法参照试剂盒相关说明书进行,主要操作步骤如下：将组织切片在二甲苯溶液、乙醇中脱蜡，蒸馏水洗净；0.3%过氧化氢溶液室温孵育封闭内源性过氧化物酶，PBS洗净；抗原修复液(枸椽酸缓冲液)中修复抗原，蒸馏水、PBS洗净；滴加胎牛血清室温孵育10 min，倾去血清，勿洗；滴加稀释的一抗，置湿盒中4 ℃冰箱过夜(约12 h)，PBS冲洗；滴加二抗，恒温培养箱中孵育30 min，PBS冲洗；滴加辣根酶标记链霉卵白素工作液，37 ℃孵育，PBS冲洗；DAB显色，苏木素复染，流水冲洗，脱水，透明，封片。在高倍显微镜下观察组织染色情况并进行照相。用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。EpCAM定位于细胞膜，呈棕黄色颗粒；CD44v6定位于细胞质和细胞膜，呈棕黄色；细胞无着色或与背景颜色一致为阴性。免疫组化染色结果判定参照Form-witz 评分方法[2]：400倍镜下连续观察5个高倍视野，以阳性细胞数所占比例小于<20%为阴性、≥20%为阳性。

1.3统计学方法采用SPSS19.0统计软件。计数资料比较用χ2检验、Fisher确切概率法，生存分析用Kaplan-Meier生存分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1各组EpCAM表达比较EpCAM的阳性表达率A组为30.6%(22/72)、B组为60.8%(28/46)、C组为26.7%(8/30)；A、B组相比，P<均0.05；A、C组相比，P>均0.05；B、C组相比，P<均0.05。

2.2各组CD44v6表达比较CD44v6的阳性表达率A组为15.3%(11/72)、B组为39.1%(18/46)、C组为6.7%(2/30)；A、B组相比，P<均0.05；A、C组相比，P>均0.05；B、C组相比，P<均0.05。

2.3B组EpCAM与CD44v6表达的相关性在B组中，EpCAM与CD44v6同时阳性表达者13例，EpCAM阳性表达、CD44v6阴性表达者15例，EpCAM阴性表达、CD44v6阳性表达者5例，EpCAM与CD44v6同时阴性表达者13例；EpCAM与CD44v6的表达有关(χ2=4.05，P<0.05)。

2.4EpCAM 表达与早期低危子宫内膜腺癌患者术后发生远处转移的关系B组EpCAM阳性表达者的术后中位生存时间为35个月、阴性表达者的中位生存时间为43个月，两者相比，P<0.05。B组CD44v6阳性表达者的术后中位生存时间为38个月、阴性表达者的中位生存时间为40个月，两者相比，P<0.05。

3讨论

EpCAM是一种单次跨膜糖蛋白，由位于2p21染色体的肿瘤相关钙信号转导基因编码，属于黏附分子家族的单次跨膜Ⅰ型糖蛋白，几乎表达于所有的腺癌组织中，多数定位在细胞与细胞之间的紧密连接处，其功能主要是参与调节细胞间黏附，介导信号转导及细胞迁移、增殖、分化等[4]。Kurtz等[5，6]研究发现，EpCAM 可以通过参与β-连环蛋白依赖的Wnt 级联反应激活C-myc 等原癌基因的表达而具有致癌作用，同时发现细胞内EpCAM 蛋白的降解可激活EpCAM作为有丝分裂信号传导器的功能等。Wnt信号传导通路是一种多层次、多环节的复杂信号通路，该通路发生障碍与肿瘤的发生、发展、侵袭、转移等密切相关[7]。Du等[8]的研究发现，EpCAM在胃癌转移病灶中的阳性表达率明显高于原发灶，而通过siRNA下调 EpCAM的表达可以抑制胃癌细胞的侵袭和迁移能力，EpCAM可能在癌细胞的转移过程中起到了促进作用。Kunavisarut等[9]研究发现，EpCAM多数位于细胞与细胞之间的紧密连接处，提高了癌细胞的转移性。本研究发现，C组正常子宫内膜组织中EpCAM阳性表达率仅为26.7%(8/30)，远低于A、B组。B组即发生远处转移的早期低危子宫内膜腺癌组织中EpCAM 的阳性表达率为60.8%(28/46)，明显高于A组即无远处转移的早期低危子宫内膜腺癌组的阳性表达率30.6%(22/72)，且其染色强度亦明显高于A组。提示EpCAM可能是早期低危子宫内膜癌发生侵袭转移的相关分子之一。

CD44家族作为一类细胞表面跨膜糖蛋白黏附分子，具有高度异质性，其功能是通过与透明质酸酶或胶原结合，在细胞与细胞、细胞与基质之间的特异性黏附过程中发挥重要作用。CD44的表达由Wnt信号传导通路调控，在β-连环蛋白/Tcf-4信号传导通路控制下参与上皮细胞的增殖与更新[10]。根据CD44基因表达过程中剪切方式的不同, 可将其转录产物分为标准型CD44s和变异型CD44v。CD44v有多个亚型(v1～v6)，其中CD44v6表现出与肿瘤侵袭、转移的密切相关关系，其主要在上皮源性的肿瘤细胞中表达,可通过影响肿瘤细胞的结构和分布以及运动能力而促使细胞间黏附作用下降[11]。研究[12]发现，CD44v6的异常表达与许多人类恶性肿瘤的发生、发展和侵袭转移以及预后密切相关，甚至认为CD44v6可作为肿瘤独立的预后判断指标。本研究结果显示，C组正常子宫内膜组织中CD44v6阳性表达率为6.7%，远低于A、B组。B组即发生远处转移的子宫内膜癌组织中CD44v6的阳性表达率为39.1%，明显高于A组，染色强度亦明显高于A组。提示CD44v6在早期子宫内膜癌的远处转移中发挥了作用。

EpCAM及CD44v6均属于细胞黏附素家族，介导细胞间的相互黏附作用，促进癌细胞向基质侵袭，从而影响癌细胞的迁移和转移。目前尚未有证据表明二者之间在作用机制上存在明确的相关关系。但CD44家族中相关亚型CD44v4～v7与EpCAM直接相互作用，形成CD44v4～v7-EpCAM复合物，促进肿瘤细胞的转移[13]。本研究发现，EpCAM及CD44v6在早期低危子宫内膜腺癌中的表达呈正相关，两指标阳性表达的患者发生远处转移的几率较大，提示EpCAM可能与CD44v6之间存在相互作用，共同促进肿瘤的转移，但其具体作用机制有待进一步探究。

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