ELISA、TRUST 法行梅毒血清学检测效果比较

摘要:目的　比较酶联免疫吸附法(ELISA)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)、凝集法(TPPA法)法行梅毒血清学检验的效果。方法　分别用ELISA、TRUST、TPPA法检测1 468例梅毒疑似患者的血清学标本。以TPPA法检测结果为金标准，计算ELISA、TRUST法的检出率、灵敏度并进行比较。结果　本组1 468例标本中ELISA法检测结果阳性48例(3．27%)、TRUST法阳性23例(1．57%)、TPPA法阳性46例(3．13%)。ELISA法检出率与TPPA法相比差异无统计学意义，但均高于TURST法(P均＜0．05)。以TPPA法检测结果为金标准，ELISA法灵敏度97．83% (45/46)，TRUST法灵敏度45．65%(21/46);二者灵敏度相比，P＜0．05。结论　用ELISA行梅毒血清学检测效果优于TRUST法。

doi: 10．3969/j．issn．1002-266X．2015．38．025

文献标志码: B

文章编号: 1002-266X(2015)38-0062-02

近年来，梅毒发病率呈现逐渐高发的趋势 ［1］。目前，临床采用的梅毒临床血清学检测方法有酶联免疫吸附法(ELISA法)、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST法)和凝集法(TPPA法)。TPPA检测准确率高，但是费用昂贵; ELISA、TRUST法检测费用相对较低，但其检测效果孰优孰劣尚有争议 ［2，3］。2011年10月～2014年10月，我们分别用ELISA、TRUST、TPPA法检测1 468例梅毒疑似患者的血清学标本，并以TPPA法检测结果为金标准，比较ELISA、TRUST法的灵敏度。现报告如下。

1资料与方法

1．1　临床资料　1 468例梅毒疑似患者，其中男768例、女700例，年龄26～58(39．50±1．50)岁。均经患者及其家属知情同意，与患者及家属签订知情同意书，并报我院伦理委员会备案。

1．2梅毒血清学检测方法　患者入院第2天上午抽取5 mL静脉血，静置5 min，将血清分离后行ELISA、TRUST、TPPA检测，检验过程均严格按照试剂盒规定进行。ELISA试剂盒由上海科华生物技术发展有限公司生产，TRUST试剂盒由上海荣盛生物药业有限公司生产，TPPA试剂盒由富士瑞必欧株式会社公司生产。①ELISA:分别取待测样本50 μL，加入预包被板条孔内，并设阴性、阳性及空白对照，于37℃温度下温育60 min。分别取酶标记物50 μL，加入阴性、阳性及空白对照孔内，振荡混匀，于37℃温度下温育30 min。洗板完成后阴性、阳性及空白对照孔内分别加入终止液50 μL，混匀，察看酶标仪显示数据，判断样本性质。②TRUST:取待测样本50 μL，置于卡片圈中，并均匀涂布于整个卡片圈内。将抗原液轻轻摇匀后滴加于卡片圈内。把卡片放置在立体脱色摇床内，震荡摇匀(100 r/min，8 min)，立即观察检测结果。③TPPA:将标本稀释液加入U型反应板上，第1孔内加入100 μL，其他2～9孔均分别加入25 μL，。与第1孔内加入血清25 μL，混合均匀后取出25 μL加入到第2孔中，然后依次稀释，一直稀释到第9孔中，第9孔稀释后取出的25 μL液体丢弃。取未致敏粒子液25 μL加入第3孔内，取致敏粒子液25 μL加入4～9孔内，将微量反应板放置在振荡器中，震荡0．5 min，然后将微量反应板放置在有盖的湿盒内，室温下静置2 h，观察检测情况。检出率=阳性例数/1 468。ELISA、TRUST法灵敏度= TPPA法检测阳性者中ELISA、TRUST法检测阳性例数/TPPA法检测阳性例数。

1．3统计学方法　采用SPSS17．0统计软件。率的比较采用重复测量的方差分析。P＜0．05为差异有统计学意义。

2　结果

本组1 468例标本中ELISA法检测结果阳性48 例(3．27%)、TRUST法阳性23例(1．57%)、TPPA法阳性46例(3．13%)。ELISA法阳性检出率与TPPA法相比差异无统计学意义，但均高于TURST 法(P均＜0．05)。以TPPA法检测结果为金标准，ELISA法灵敏度97．83%(45/46)，TRUST法灵敏度45．65%(21/46)，二者灵敏度相比P＜0．05。

3　讨论

在梅毒临床检测方法中，血清学试验是临床使用最为广泛、效果最好的方法，目前临床上最常用来检验梅毒的方法有ELISA、TRUST、TPPA等多种检测方法 ［4］。研究发现，在梅毒侵入人体2周后，人体血清内即可产生特异性抗体IgM与IgG。ELISA主要是通过基因重组形成特异性抗原，对梅毒特异性抗体IgM与IgG进行检测，在早期既可对梅毒感染进行判断 ［5］。此外，ELISA还具有操作简单、成本较低等优点，且可应用半自动或全自动酶标仪，易于保存原始数据，是进行大批量检测梅毒的方法 ［6］。但是，由于ELISA检测的是梅毒特异性抗体IgM与IgG，IgG抗体在梅毒被治愈后较长的时间内可仍表现为阳性，部分患者甚至终身表现为阳性。因此，ELISA检测结果阳性并不代表梅毒病毒正在活动，在临床诊断梅毒的过程中必须结合患者临床表现，以避免误诊 ［7］。在本研究中，ELISA检测阳性率为3．27%，与TPPA检测阳性率(3．13%)较为接近。尽管如此，ELISA检测仍存在假阳性率。究其原因可能与血清内的纤维蛋白原存在一定的关系。资料显示，相当多的疾病以及免疫接种均能使ELISA检测表现为假阳性，某些基础性疾病能够促使机体产生诱导抗TP抗体或抗类脂抗体交叉抗原导致假阳性 ［8］。

TRUST也是血清学试验的重要方法，主要是对抗心磷脂抗体进行检测。对于一期梅毒、二期梅毒，其检出率可达96%以上，但对于晚期梅毒或者期梅毒潜伏期检出率却相对较低，约为58%～85%，故常不易用作梅毒晚期或早期辅助诊断 ［9］。临床数据显示，TRUST应用于梅毒检测，无论是假阳性率还是假阴性率均相对较高，易受类风湿性关节炎、疟疾、系统性红斑狼疮等疾病的影响，且易漏检 ［10］。但在观察患者临床疗效以及病程进展方面TRUST具有较高的应用价值，并且其价格相对较低，易被患者接受 ［11］。在本研究中，TRUST检测阳性率为1．57%，与TPPA检测阳性率(3．13%)差距较大，与上述研究结果较为一致。TPPA为包被明胶颗粒的梅毒特异性抗原，在梅毒检测上具有较好的特异性及敏感性，尤其是对于潜伏期梅毒，其特异性及敏感性更高 ［12］。

本研究结果显示，用ELISA法行梅毒血清学检查，灵敏度高于TRUST法。结合两种方法检出率的差异，笔者认为临床行梅毒血清学检查时，ELISA优于TRUST，可通过ELISA对梅毒患者进行筛查 ［12］。