急性淋巴细胞白血病患儿骨髓组织中miR-155表达变化及意义

刘卓琼，陈丽丽，杨斯博(哈尔滨医科大学附属第一医院，哈尔滨150001)

急性淋巴细胞白血病患儿骨髓组织中miR-155表达变化及意义

刘卓琼，陈丽丽，杨斯博
(哈尔滨医科大学附属第一医院，哈尔滨150001)

摘要:目的观察急性淋巴细胞白血病( ALL)患儿骨髓组织中miR-155表达变化，并探讨其临床意义。方法选择ALL患儿46例(观察组)，非血液病儿童17例(对照组)，采用qRT-PCR检测各组miR-155，并分析miR-155表达与ALL临床病理参数的关系。结果观察组及对照组miR-155相对表达量分别为( 26.8±10.1)×10－4、( 4.3 ±1.2)×10－4，两组比较，P＜0.05。观察组低危型、中危型、高危型者miR-155相对表达量分别为( 3.30±1.15)× 10－4、( 5.28±1.75)×10－4、( 7.30±2.15)×10－4，两两比较，P均＜0.05;治疗前及治疗第33天miR-155相对表达量分别为( 9.30±4.15)×10－4、( 3.30±0.15)×10－4，两者比较，P＜0.05。结论ALL患儿骨髓组织miR-155表达升高，miR-155高表达与儿童ALL的发生发展以及预后密切相关。

关键词:血液疾病;急性淋巴细胞白血病;微小核糖核酸155

急性淋巴细胞白血病( ALL)是儿童最常见的一种恶性肿瘤，是指一类以淋巴母细胞失调增生和分化异常或分化受阻，形成大量非成熟白细胞为特征的快速进展型白血病，约占急性白血病的70%［1］。随着近几十年来对白血病治疗的深入研究，儿童ALL的生存率有了一定程度的提高，ALL的治愈率已达80%，但仍有约25%的患儿在血液、生殖、神经等系统再次发生病变［2］。近年来更多研究表明，非编码的miRNA在白血病的发生、发展、临床表现和预后中均有影响。因此本研究观察了ALL患儿骨髓组织中miR-155表达变化，并探讨其临床意义。

1　资料与方法

1.1临床资料选择哈尔滨医科大学附属第一医院收治的ALL患儿46例(观察组)，男24例，女22 例;年龄5.2～14.8岁，中位年龄9.1岁;＜10岁20例，≥10岁26例。诊断均符合全国小儿白血病会议制定的ALL标准诊断［3］。病理分型为B淋巴细胞性38例，T淋巴细胞性8例;危险度分型［4，5］中低危型20例，中危型16例，高危型10例。另选17例非血液病儿童作为对照组，男9例，女8例;年龄2.8 ～10.3岁，中位年龄8岁。两组一般资料具有可比性。本研究得到哈尔滨医科大学附属医院医学伦理委员会的批准，且所有入组儿童家长均签署知情同意书。

1.2 miR-155检测ALL患儿于治疗前、治疗第33天采集骨髓各3 mL，对照组患儿于入院时采集骨髓3 mL，加入EDTA抗凝保存备用。TRIzol法提取总RNA，Nanodrop1000检测总RNA的浓度和纯度，将已制备的总RNA置于－80℃保存备用。取RNA 0.05 g，使用TaqMan MicroRNA逆转录试剂盒进行逆转录。每20 μL反应体系包括TaqMan MicroRNA Assay( 20×) 1.00 μL、Product from RT reaction 1.33 μL、

TaqMan 2×Universal PCR Master Mix 10.00 μL、Nuclease-free water 7.67 μL。将反应管编号，每个反应管中加入10.0 μL TaqMan 2×Universal PCR Master Mix和7.67 μL Nuclease-free water混匀;每个反应管中加入相应TaqMan MicroRNA Assay 1 μL;每个反应管中加入相应RT reaction product;将反应管密封，放入PCR反应仪，设置反应条件为95℃、10 min，95℃、15 s，60℃、60 s，共50个循环;每次检测均设立空白阴性对照、阳性对照，每个标本采用3个复孔。反应完成后，电脑自动得出熔解曲线。以GAPDH为内参，所测定的miR-155的相对表达量以2－ΔΔCt表示。1.3统计学方法采用SPSS18.0统计软件。计量资料以珋x±s表示，多组间比较采用Kruskal Wallis H秩和检验，两组间比较采用Wilcoxan秩和检验。P ＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

观察组及对照组miR-155相对表达量分别为( 26.8±10.1)×10－4、( 4.3±1.2)×10－4，两组比较，P ＜0.05。观察组年龄≥10、＜10岁者miR-155相对表达量分别为( 3.2±0.5)×10－4、( 3.3±0.2)×10－4，男性、女性分别为( 3.8±0.5)×10－4、( 4.2±0.4)×10－4，B淋巴细胞性、T淋巴细胞性者分别为( 1.78±0.17)× 10－4、( 2.30±1.15)×10－4，两者比较，P均＞0.05。观察组低危型、中危型、高危型者miR-155相对表达量分别为( 3.30±1.15)×10－4、( 5.28±1.75)×10－4、( 7.30 ±2.15)×10－4，两两比较，P均＜0.05;治疗前及治疗第33天miR-155相对表达量分别为( 9.30±4.15)× 10－4、( 3.30±0.15)×10－4，两者比较，P＜0.05。

3　讨论

miRNA是一类进化上保守、在生命中起重要调控作用的分子［6］。miRNA是一类由内源基因编码的长度为19～25个核苷酸的非编码单链RNA分子，可以通过调节一些信号分子来调控细胞死亡、增殖、分化、发育等。miRNA可以调节造血功能来影响白血病患者的白细胞数量、染色体形态等［7，8］，促进或抑制病情发展，判断治疗效果［9］。有文献［10］表明，白血病患者miR-128、miR-146a、miR-155、miR-181a和miR-195表达异常，但6个月治疗后表达均有显著改变。然而，在儿童ALL中有关miR-155的研究不多。

miRNA可直接调控细胞的增殖分化或者凋亡，影响着肿瘤的发生、发展与转归［11］。越来越多的研究表明，miR-155在许多肿瘤中过表达，在致癌过程中起重要作用。在甲状腺癌、乳腺癌、结肠癌、宫颈癌、胰腺癌、肺癌等实体瘤中，miR-155高表达预示预后不良。Nikiforava等［12］发现乳头状型、滤泡状癌型、末分化癌型甲状腺癌miR-155表达分别上调9.5、5.5和13.2倍。Habbe等［13］发现非侵袭性胰腺癌癌前病变-胰管内乳头状黏液性肿瘤组织中miRNA-155高表达。本研究显示，观察组miR-155相对表达量高于对照组，且随着危险程度的升高而增加，随着治疗时间的延长而降低，表明miR-155与儿童ALL危险度和预后密切相关。

可见，miRNA不仅可作为ALL等疾病的诊断工具，同时也可作为治疗疾病的靶点［14］。

参考文献:

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［9］He L，Thomson JM，Hemann MT，et al.A microRNA polycistron as a potential human oncogene［J］.Nature，2005，435( 7043) :828-833.

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［12］Nikiforova MN，Tseng GC，Steward D，et al.MicroRNA expression profiling of thyroid tumors: biological signifi-cance and diagnostic utility［J］.J Clin Endocrinol Metab，2008，93( 5) :1600-1608.

［13］Habbe N，Koomtra JB，Mendell JT，et al.MicroRNA miR-155 is abiomarker of early pancreatic neoplasia［J］.Cancer Biol Ther，2009，8( 4) : 340-346.

［14］Mian YA，Zeleznik-Le NJ.MicroRNAs in leckemias : emerging diagnostic tools and therapeutic targets［J］.Curr Drug Targets，2010，11( 7) : 801-811.

收稿日期:( 2015-04-20)

文章编号:1002-266X( 2015) 31-0056-02

文献标志码:B

中图分类号:R720.5

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2015.31.022