关于动物疫病检测的探讨和分析

李 斌

（广州市从化区无规定马属动物疫病区管理中心，广东广州 510920）

关于动物疫病检测的探讨和分析

李 斌

（广州市从化区无规定马属动物疫病区管理中心，广东广州 510920）

对于动物养殖而言，疾病是无法避免的，如何有效做好动物常见疫病的诊断与治疗是摆在我们面前的首要难题。随着技术的进步与发展，关于动物常见疫病的检测更是备受大家的关注。为此，文章以“动物疫病监测”为主要研究对象，展开探讨和分析，希望能为进一步做好动物常见疫病的检测工作提供一定的依据和参考。

动物疫病；检测；探讨；分析

1 前言

要想做好动物疫病的治疗，首要的是要准确识别疫病，进而采取准确、合理的治疗措施。为此，文章就猪瘟、蓝耳、Elisa检测以及布鲁氏菌虎红平板检测等展开探讨。

2 关于几种动物常见疫病检测的探讨和分析

2.1 猪瘟病毒抗体阻断ELISA检测方法

2.1.1 目的

这种方法的主要原理就是通过待检测抗体与单克隆抗体和猪瘟病毒抗原的竞争结合，根据最终的显色程度来进行判别。本方法是用于检测猪血清或血浆中猪瘟病毒抗体的一种阻断ELISA方法，通过待测抗体和单克隆抗体与猪瘟病毒抗原的竞争结合，采用辣根过氧化物酶与底物的显色程度来进行判定。

2.1.2 步骤

首先要保证实验所需要的试剂盒组必须恢复到室温18～25℃，至少要在使用1h之前将其置于室温条件下。

具体操作时，分别于检测孔和对照孔中各加入50µl的样品稀溶液；紧接着在相应的对照孔中分别加入阳性对照液和阴性对照液体，剂量为50µl，但是需要注意的是，及时更换洗头，以防造成污染，并最终影响到实验的结果；最后，于剩下的检测孔中加入50µl的被检测样品。待轻轻弹动微量反应板，直至反应板中的溶液摇晃均匀后，封条封闭，放置于温度大约在25℃左右的湿箱中，孵育2h之后，将反应孔中的液体吸出后，洗涤三次。

之后，于反应孔中加入抗CSFV酶标二抗100µl，再次封条封闭反应板，置于室温条件下孵育30min。洗板后，于反应空中加入底物溶液100µl，放置于避光的室温条件下10min，需要注意的是，在第一反应孔加满之后，计时开始。

10min后将终止液100µl按照加酶标二抗的顺序分别加入每一个反应孔中，在450nm处测定样本以及对照的吸光值，也可用450nm和620nm的双波长测定样本以及对照的吸光度值，空气调零。

待上述步骤完成后，按公式计算出样本和对照的平均吸光度值，如果被检样本的阻断率大于或等于40%，该样本被判定为阳性（有CSFV抗体存在）。如果被检样本的阻断率小于或等于30%，该样本被判定为阴性，即没有抗体的存在。

2.2 布鲁氏菌病虎红平板凝集试验

2.2.1 目的

虎红平板凝集实验的主要目的就是为了检测布鲁氏菌病。

2.2.2 步骤

该实验需要抗原、标准的阳性血清和阴性血清。另外，为了保证实验结果的准确性，还需要准备干净的玻璃板，保证被检测的血液务必要新鲜，没有明显的蛋白凝块，更没有溶血现象，没有腐败的气味。

在实验开始前，要在干净的玻璃板上画上方格，准备好吸管或者分装器以及牙签、火柴杆等。

该实验的具体操作方法是对待检测的血清进行编号后，加入0.03ml的相应血清，然后再滴加0.03ml的抗原于待检测血清旁，之后用牙签或者火柴杆慢慢搅动血清，使其与抗原结合，然后采用阴性、阳性对照的方法进行试验。

关于实验结果的判定，如果4min内被检测的血清肉眼可见凝集现象，则呈阳性，如果未见凝集，而是均匀粉红色，则为阴性。

2.3 家禽的禽流感HA、HI凝集试验

2.3.1 目的

HA-HI凝集试验主要是为了检测流感。

2.3.2 步骤

首先要配置浓度为1%的红细胞悬液，红细胞必须是SPF公鸡或无禽流感和新城疫等抗体的健康公鸡。应特别关注所测病原的抗体是否存在于鸡体内。鸡血液的采集应规范，保证无菌操作，避免杂菌污染，因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗原血清发生非特异性反应，同时采血时应避免溶血和凝血现象发生。建议使用与血清来源相同的禽种红细胞。

另外，血细胞应根据所需确定所取，血细胞的洗涤应保证上清液为透明状为准，洗涤过程中注意轻柔吹打和混匀，同时应注意每次洗涤时更换吸管，尤其在吸取血细胞时。

1%红细胞悬液制备中最后一次洗涤为3 000 r/min或2 000 g离心10 min进行红细胞压积。

洗涤后的血细胞加入PBS配制成的1%红细胞悬液应放置 4℃环境中 60 min 左右进行观察，无溶血等异常后再置室温中进行试验。

事实上，除鸡外有些禽的血清可能对鸡红细胞产生非特异性的凝集。当确认这种特性时，用鸡红细胞对试验血清进行吸附，可以去除非特异凝集素、非特异性凝集抑制素，或者选用在调查研究中的禽种红细胞。吸附方法是在每0.5 ml的抗血清中加入0.025 ml的鸡红细胞，轻摇后静置至少30 min；800 g 离心 2～5 min，收集上清，即为处理后的血清。亦可用被检禽种的红细胞。

建议使用 90 度 V 型一次性优质塑料反应板进行HA-HI试验。反应试剂应按规定保存和使用。冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。为避免反复冻融和细菌污染，建议以无菌操作将试剂分装成小包装，因为反复冻融比4 ℃放置更易降低反应试剂的效价。

HA试验时，最好同时进行2排病毒抗原的测定，判定结果时取平均值作为血凝终点滴度。

3 结语

从上文的论述中，我们不难看出一些先进的技术方法在疫病的检测方面的确有着诸多无法比拟的优势，但每一种检测方法往往都存在一定的局限性与缺陷，在实际应用的过程中一定要尤为注意，否则势必会在某种程度上影响到实验的效果。为此，在实际应用的过程中，一定要了解并掌握相关的注意事项，保证实验结果的准确性，从而为进一步做好常见疫病的检测提供有力的依据和参考。

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