HPLC法测定香菊片中没食子酸的含量

魏红立 刘俊霞 吕勤芝

香菊片为中药复方制剂，是国家基本药物，处方由化香树果序(除去种子)、夏枯草、野菊花、生黄芪、辛夷、防风、白芷、甘草、川芎水煎煮提取加工制成，方中化香树果序为君药，在香菊片现行质量标准中没有对化香树果序进行专属性检验项目［1］，文献未见对香菊片中没食子酸含量进行报道。化香树果序是化香树的干燥果序，具有清热解毒活血化瘀清肿排脓通窍止痛的功效民间用其治疗鼻炎鼻塞，其汤剂治疗鼻炎鼻窦炎，效果显著，的有效成分为总酚、总黄酮、萜类、萘醌等［2－6］，抑制细菌作用较强可用于治疗鼻炎、鼻窦炎等［5－7］，根据香菊片质量标准检验项目设置，主要检测黄芪中黄芪甲苷作为质量控制指标，而处方中黄芪并非君药且临床主要功效为补气固表，与香菊片辛散祛风清热通窍的作用不相符［4］，不能正确体现该药品确切疗效，而没食子酸为化香树果序所含主要多酚类成分，因此本研究选择没食子酸为目标成分，选专属性好准确度高的检验方法提高香菊片的质量可控性，以期完善该品的质量标准。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪(Waters e2695)2998型二极管阵列检测器。没食子酸对照品(110831-200302)购于中国药品生物制品鉴定研究院，甲醇为色谱纯，水为纯化水，其他试剂均为分析纯。香菊片(规格:每片重0.32 g)由陕西白云制药有限公司生产。

1.2 溶液制备

1.2.1 对照品溶液制备:取没食子酸对照品适量，精密称定，10.88 mg置50 ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取5 ml置50 ml量瓶中，用水稀释至刻度，即得(每 1毫升含没食子酸0.02176 mg/ml)。

1.2.2 供试品溶液制备:取香菊片30片，除去包衣，精密称定，研细，精密称取1.5 g，置100 ml锥形瓶中，精密加水100 ml，称定重量，超声处理(360 W，50 Hz，40℃)45 min，取出，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量。滤过，取续滤液，即得。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱中采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(250 mm ×4.6 mm，5 μm)。流动相:甲醇 －0.035% 磷酸溶液(5:95)，流速 1.0 ml/min，柱温30℃，进样量 10 μl，检测波长 270 nm。

2.2 专属性 在上述色谱条件下，分别取对照品溶液，香菊片供试品溶液用0.45 μm滤膜过滤，分别进样10 μl，记录色谱图，结果供试品色谱中，在与没食子酸对照品相同的保留时间处有吸收峰，并与光谱库进行匹配。见图1。

图1 自动标尺色谱图;A为对照品，B为样品

2.3 线性关系 分别精密吸取对照品溶液2、5、10、15、20 μl按2.1 项下的色谱条件进行测定，以峰面积积分值为纵坐标(Y)以进样量为横坐标(X)线性回归，回归方程为:Y=3000000X+2249.5Y=1.3346X+5.9293，r=1，在 0.04352 ～0.4352 μg 范围内进样量的与峰面积线性关系良好。见表1，图2。

表1 香菊片中没食子酸线性关系测定结果

图2 线性关系

2.4 稳定性考察 取同供试品溶液，分别在室温放置0、1、2、4、8、12 h 后精密吸取 10 μl进样，测定峰面积值，RSD为0.90%。结果表明，供试品溶液在12 h内基本稳定。见表2。

表2 香菊片中没食子酸稳定性测定结果 n=6

2.5 精密度考察 取对照品溶液重复进样5次，按2.1项下的色谱条件测定没食子酸的峰面积，RSD为0.79%。结果表明仪器精密度良好。见表3。

表3 香菊片中没食子酸精密度测定结果 n=5

2.6 重复性考察 取同一个批号样品，按上述方法制备6份供试品溶液，分别测定，结果的RSD为1.9%结果表明本方法具有较好的重复性。见表4。

表4 香菊片中没食子酸重复性测定结果 n=6

2.7 加样回收试验 取已知没食子酸含量(没食子酸0.7870 mg/ml)的同一批样品(批号:130504)适量，研细，取约0.5 g，精密称定，分别精密加入没食子酸对照品溶液(0.2176 mg/ml)5 ml。按照 1.2.2 项制备加标样供试液。精密吸取加标样供试液10 μl，按照上述测定方法测定其峰面积，计算回收率，平均回收率为91.99%，RSD为1.3%，结果表明本方法回收率良好。见表5。

表5 香菊片中没食子酸的回收率测定结果 n=6

2.8 耐用性试验 取同一批号的样品用三种不同厂家的同类型色谱柱按上述方法进行测定，RSD为1.5%，表明该方法耐用性较好，不同厂家色谱柱均可满足测定要求。见表6。

表6 香菊片中没食子酸耐用性测定结果

2.9 样品测定 取生产厂家为陕西白云制药有限公司的4批样品，按上述方法进行含量测定。见表7。

表7 香菊片中没食子酸含量测定结果

3 讨论

提取方法的选择，根据没食子酸的理化性质，没食子酸易溶于水、醇和醚;具有酚及羧酸的性质，比较了以稀乙醇、水和甲醇分别作为溶剂，超声、加热回流作为提取方法［8－10］，发现以水作为溶剂，超声 45 min，没食子酸提取效果较好，且提取物色谱峰形较好，杂质峰对其无干扰，因此确定上述提取方法。

没食子酸为多酚类成分，具有抗菌抗病毒的药理作用，而香菊片质量标准相对比较简单，专属性不强，也不够全面，未对其所含特征性生物活性成分进行色谱法鉴别，也未建立科学、准确、灵敏的光谱，色谱等方法对特征化学成分进行含量测定［11］。因此，测定香菊片中没食子酸酚含量并对其进行质量评价，为深入研究其药物作用机制具有重要意义。本文采用高效液相色谱测定香菊片中没食子酸的含量，方法简单快捷，重现性好，可作为香菊片没食子酸这一特征性化学成分或定量检测的一种方法，从而完善香菊片质量标准，加强香菊片的质量控制。

采用高效液相色谱法检测香菊片中没食子酸含量，并与光谱库进行匹配，结果显示，表明供试品溶液中相应色谱峰的光谱与没食子酸光谱库的光谱非常相似，可认为是同一物质［12］。

1 国家食品药品监督管理局标准(试行).YBZ12122004.香菊片.

2 杨文慧，赵平，高昂.化香属药学研究概况.安徽农业科学，2011，39:19084-19085，19092.

3 王茂义，刘俊田，侯宁.RP-HPLC测定化香树果序中没食子酸的含量.中国药师，2010，13:378-379.

4 梁刚，任红莉.必士通牌香菊片有效成分的检测方法CN201310578946.1 2014-03-26 CNKI

5 刘宇，龚汉明，叶吉明.香菊片对NIH小鼠抗炎、镇痛作用的实验研究.陕西中医，2006，27:634-635.

6 李亚萍，雷晓琳.化香树果序生药学研究.海峡药学，2009，21:73-75.7 石会丽，杨志峰.化香树果序薄层色谱鉴别及相关问题试验研究.西部中医药，2013，26:36-38

8 付煜荣，张万明，陈桂敏，等.景三七中没食子酸和总酚酸含量测定.中成药，2006，28:1016-1018.

9 范晓红，李志建，斯抗甫·艾白等.没食子酸含量测定及总鞣质提取方法的研究.时珍国医国药，2011，22:1119-1121.

10 郑玉忠，张振霞，董婷霞，等.余甘子药材HPLC指纹图谱及其没食子酸和鞣花酸含量.中国实验方剂学杂志，2013，19:94-99.

11 孙立立，江波，袁振海，等.HPLC测定地榆片中没食子酸的含量.中成药，2006，28:1144-1147.

12 银慧慧，刘伟，姜源明，等.桃金娘根中没食子酸和总多酚含量测定.中国医药导报，2015，12:96-99.