高效液相色谱法测定硅水凝胶软性角膜接触镜中乳酸环丙沙星滴眼液的载药量

李洁 李翔

环丙沙星是喹诺酮类新一代抗菌素药物，它比第二代喹诺酮类具有更强、更广的抗菌谱，对大肠杆菌、克雷伯菌和其他肠杆菌科阴性杆菌以及流感杆菌、痢疾杆菌、伤寒杆菌、淋球菌具有较强抗菌活性，对绿脓杆菌、不动杆菌、金黄色葡萄球菌以及肺炎双球菌、甲型溶血链球菌、乙型溶血链球菌等的抗菌作用亦优于氟哌酸、甲磺酸培养沙星。本品的抗菌作用机制为抑制细菌DNA螺旋酶，抗菌作用为杀菌型，明显优于其他同类药物以及头孢菌素、氨基糖苷类等抗生素，与其他抗生素无交叉耐药性。因其具有广谱、高效而且安全的特点，临床上已广泛地用于治疗敏感性细菌所致的角、结膜炎等眼部感染［1］。目前，使用乳酸环丙沙星滴眼液后在软性角膜接触镜中的载药量还未见文献报道，提供相应的试验数据，可以为患者使用抗菌药物治疗提供帮助。本试验中将滴入足量乳酸环丙沙星滴眼液的软性角膜接触镜与义眼接触，以模拟软性角膜接触镜的配戴过程，可以较科学的考察软性角膜接触镜中乳酸环丙沙星滴眼液的载药量，期望可以评价配戴硅水凝胶软性角膜接触镜时使用乳酸环丙沙星滴眼液的安全有效性，并为药物的合理使用提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪(包括四元泵，VWD检测器，自动进样器，ChemStation化学工作站);Mettler AE240电子天平(梅特勒公司)。

1.2 试药 乳酸环丙沙星对照品(中国食品药品检定研究院，批号:130451-201203);乳酸环丙沙星滴眼液(江苏远恒药业有限公司，批号:13090901，规格:8 ml:24 mg);软性角膜接触镜(强生欧舒适，强生视力健商贸有限公司)。甲醇为色谱纯，三乙胺、磷酸为分析纯，水为重蒸馏水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱:Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm ×150 mm，5 μm);流动相:三乙胺溶液(取三乙胺7.5 ml，加水稀释至1 000 ml，用磷酸调节pH值至3.5)－甲醇(75∶25);流速:1.0 ml/min;检测波长:294 nm;柱温:25℃。

2.2 对照品溶液制备 精密称取乳酸环丙沙星对照品45.50 mg，置于50 ml量瓶中，用 0.1 mol/L 盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得对照品储备溶液。取上述溶液1 ml，置于100 ml量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，即得9.100 μg/ml对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备 取软性角膜接触镜，滴入足量乳酸环丙沙星滴眼液，将软性角膜接触镜轻轻靠近义眼，与义眼充分接触后，取下软性角膜接触镜，分数次用0.1 mol/L盐酸溶液洗涤软性角膜接触镜，洗涤液置于10 ml量瓶中，用0.1 mol/L盐酸溶液定容至刻度，摇匀，0.22 μm滤膜滤过，取续滤液，即得。精密吸取10 μl注入液相色谱仪，测定，即得液相色谱图。见图1。

2.4 线性关系考察 精密量取混合对照品储备液0.1、0.2、0.5、1.0、1.5、2.0 ml，置于 100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得不同浓度的系列对照品溶液。按“2.1”项下色谱条件分别进样，测定峰面积。以乳酸环丙沙星(g/ml)为横坐标(X)，以其峰面积积分值为纵坐标(Y)，绘制标准曲线。得回归方程Y=34.94X －2.088(r=0.999 9，n=6)。结果表明，乳酸环丙沙星在0.9100～18.20 g/ml范围内与其各自的峰面积线性关系良好。

图1 乳酸环丙沙星HPLC色谱图

2.5 精密度试验 精密吸取9.100 g/ml对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积。结果乳酸环丙沙星峰面积RSD为0.93%(n=6)，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验 按“2.1”项下色谱条件，分别在0、2、4、8、12、24 h 取供试品溶液各进样 1 次，测定峰面积。结果乳酸环丙沙星峰面积的RSD为2.03%(n=6)，表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.7 回收率试验 按“2.3”项下方法，以0.9%氯化钠溶液替换乳酸环丙沙星滴眼液，将洗涤液置于10 ml量瓶后，加入4.550 μg/ml乳酸环丙沙星对照品溶液0.5 ml、0.6 ml和 0.7 ml，用 0.1 mol/L 盐酸溶液定容至刻度，每个浓度各分别制备3份供试品溶液，分别进样测定，记录峰面积，计算乳酸环丙沙星的含量回收率。见表1。

表1 加样回收率试验结果 n=6

2.8 样品测定 按“2.3”项下方法制备供试品溶液3份，按“2.1”项下色谱条件，分别进样测定，结果软性角膜接触镜中乳酸环丙沙星的载药量分别为2.895 μg、3.012 μg 和 2.933 μg，RSD 分别为 1.72%、1.33%和 0.86%。

3 讨论

目前，文献报道中分离乳酸环丙沙星常用的流动相体系主要包括磷酸盐溶液－乙腈、三乙胺溶液－甲醇、磷酸盐溶液－甲醇等［2－4］。本试验通过研究发现，文献报道中的流动相体系均可对样品中乳酸环丙沙星产生良好的分离效果，但是添加了缓冲盐的流动相体系的基线会产生一定的波动，且系统压力较高，对测定会产生一定的影响。然而，采用三乙胺溶液－甲醇的流动相体系可以避免其他流动相体系的不利情况，可以保证含量测定结果的准确可靠。

另外，本试验还比较了不同品牌，不同长度，不同填料类型的色谱柱对乳酸环丙沙星分离测定的影响，可以发现在不同色谱柱中乳酸环丙沙星均可以取得令人满意的分离效果，表明本试验确定的色谱条件均有较为广泛的适应性［5－7］。

本试验采用高效液相色谱法测定软性角膜接触镜中乳酸环丙沙星滴眼液的载药量，具有很好的实际应用价值，可以为眼科医生开具抗菌药物处方提供必要的参考和依据，有利于促进抗菌药物的合理使用。

强生欧舒适软性角膜接触镜是硅水凝胶材料类角膜接触镜的代表之一，其透氧系数为 103×10－11(cm2/s)［ml O2/(ml×mm Hg］，由senofilcon A 材料制成，可根据临床需要连续配戴(最长6夜7天)或作为绷带镜片使用。在临床治疗的过程中，由于病情需要患者常在配戴软性角膜接触镜的情况下点用抗生素滴眼液。本试验选用乳酸环丙沙星，旨在研究硅水凝胶材料类软性角膜接触镜的载药量，初步评价配戴软性角膜接触镜的患者使用乳酸环丙沙星滴眼液的安全性。但由于药物在软性角膜接触镜的吸收和释放是一个比较复杂的过程，研究硅水凝胶材料的载药量仅是其中的一个环节，在临床实践中应当权衡患者的风险及收益，慎重使用。

1 陈新谦，金有豫，汤光主编.新编药物学.第17版.北京:人民卫生出版社，2011.98.

2 国家药典委员会主编.中华人民共和国药典(一部).2010年版.北京:化学工业出版社，2010.412.

3 金燕琴.高效液相色谱法测定盐酸环丙沙星的含量.中国实用医药，2011，6:41-42.

4 王刚.高效液相色谱法测定盐酸环丙沙星乳膏的含量.中外医学研究，2011，9:160.

5 任峻青，赵秀花，王晓云，等.乳酸环丙沙星滴眼液的含量测定及稳定性试验.贵阳中医学院学报，2012，34:193-195.

6 刘海玲，曹晓云.HPLC法测定盐酸环丙沙星的有关物质.中国抗生素杂志，2010，35:588-592.

7 张震，毛艳华.HPLC法测定盐酸环丙沙星片含量的不确定度评定.中国中医药现代远程教育，2010，8:185-186.