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发酵香肠中产生物胺的微生物及其检测方法研究

2015-04-01卿丹丹李跃文

食品工业科技 2015年12期
关键词:腐胺脱羧酶香肠

孙 霞,杨 勇,巩 洋,杨 敏,卿丹丹,李跃文,李 静,何 利,李 诚,胡 滨

(四川农业大学食品学院,四川雅安625014)

发酵香肠中产生物胺的微生物及其检测方法研究

孙霞,杨勇*,巩洋,杨敏,卿丹丹,李跃文,李静,何利,李诚,胡滨

(四川农业大学食品学院,四川雅安625014)

发酵香肠中过量的生物胺不仅会降低产品的品质,而且会对机体健康造成不良影响,具有氨基酸脱羧酶活性的微生物会导致生物胺的大量积累,准确全面地检测产生物胺的微生物对保障香肠的安全具有重要意义。本文综述了发酵香肠中生物胺的形成途径并重点介绍了产生物胺的微生物及其检测方法,以期为研发安全的发酵剂和保障发酵香肠的品质提供参考。

发酵香肠,生物胺,微生物,检测方法

发酵香肠是指将绞碎的肉和动物脂肪同盐、糖、发酵剂和香辛料等混合后灌进肠衣,经过微生物发酵制成的具有典型发酵风味特性的肉制品。生物胺是由氨基酸脱羧或醛和酮氨基化形成的小分子量含氮化合物。根据化学结构可将生物胺分为:脂肪族(尸胺、腐胺、精胺和亚精胺等),芳香族(酪胺和苯乙胺等),杂环族(组胺和色胺等)[1]。发酵香肠中的生物胺是由微生物产生的蛋白酶作用于蛋白质形成游离的氨基酸,而后经过某些微生物分泌的氨基酸脱羧酶对氨基酸脱羧而形成,具有氨基酸脱羧酶活性的微生物对生物胺的形成具有重要作用[2]。多种氨基酸脱羧酶在乳杆菌属、片球菌属、乳球菌属、明串珠菌属中均已有报道[3]。目前发酵剂广泛应用于发酵香肠,发酵香肠中生物胺含量与发酵剂密切相关,接种没有氨基酸脱羧酶活性的发酵剂对保障发酵香肠的品质具有重要意义。目前,国内外学者主要研究接种发酵剂对生物胺含量的影响。卢士玲等[4]发现接种短乳杆菌和阴沟肠杆菌的香肠中酪胺和尸胺含量有所增加。Landeta等[5]研究了从西班牙干腌香肠中分离的乳酸菌的安全性,发现屎肠球菌和清酒乳杆菌能产生酪胺,因此未经过检测生物胺产生能力的发酵剂使发酵香肠存在一定的安全隐患。本文综述了发酵香肠中生物胺的形成途径并重点介绍了产生物胺的微生物及其检测方法,以期为研发安全的发酵剂和保障发酵香肠的品质提供参考。

1 发酵香肠中生物胺的形成途径

发酵香肠中生物胺的形成途径有两种[6]:第一种是由醛或酮的转氨作用生成属于脂肪族的生物胺;第二种是由氨基酸脱羧产生,在微生物的氨基酸脱羧酶作用下,使游离氨基酸脱羧,生成相应的生物胺,并伴随二氧化碳的产生。发酵香肠中生物胺的形成以第二种途径为主,该途径需要三个条件:充足的生物胺前体物质(氨基酸),具有氨基酸脱羧酶活性的微生物和适宜这些微生物生长和分泌氨基酸脱羧酶的环境条件[7]。

2 产生物胺的微生物

常见的生物胺产生菌株主要来源于乳酸菌、肠细菌、葡萄球菌及其他微生物[8-10]。发酵香肠中的生物胺呈现出明显的菌株效应,张志伟等[11]研究了生物胺生成量的菌株效应,结果表明乳杆菌(Lactobacillus)和片球菌(Staphylococcus aureus)均能产生不等量的组胺、尸胺、腐胺、酪胺、亚精胺和精胺,但都不产生色胺,发酵香肠中的生物胺生成量表现出明显的菌株效应。

2.1乳酸菌

乳酸菌代谢产生生物胺是机体应激机制在相对低酸和营养匮乏的条件下,乳酸菌为了维持自身生长,受胁迫机制调控而代谢产生碱性生物胺。刘畅等[12]发现产生物胺的乳酸菌主要有片球菌(Pedicoccus sp)、酒球菌(Oenococcus oeni)和乳杆菌(Lactobacillus)等。Danilovic等[13]发现从发酵香肠中分离出来的乳杆菌(Lactobacillus)中能检测到组氨酸脱羧酶活性,乳球菌(Galactococcus)和明串珠菌(Leuconostoc)属有产生酪胺的能力。Landeta等[5]发现从西班牙干腌香肠中分离的乳酸菌中的屎肠球菌(Enterococcus faecium)和清酒乳杆菌(Lactobacillus sake)具有产生酪胺的能力。Dapkevicius等[14]发现乳酸链球菌和瑞士乳杆菌也能将组氨酸转化为组胺,这是造成组胺积累的重要原因。Masson等[15]发现从发酵香肠中分离出来的保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)菌株中能检测到组氨酸脱羧酶活性。

孟甜等[16]从61株益生乳酸菌中检测出23株菌可不同程度地产生酪胺,在脱羧酶培养基中最大产生量为248.08mg/L,这些益生乳酸菌包括瑞士乳杆菌(Lactobacillus helveticus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、双歧乳杆菌(Bifidobacterium bifidum)等。酪胺是乳酸菌形成的主要生物胺,尤其弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus)、短乳杆菌(Lactobacillus brevis)、布氏乳杆菌(Lactobacillus buchneri)是最主要的形成酪胺的微生物,乳酸菌中的短乳杆菌(Lactobacillus brevis),消化乳杆菌(Lactobacillus alimentarius),弯曲乳杆菌(Lactobacillus curvatus),植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),香肠乳杆菌(Lactobacillus farciminis)、清酒乳杆菌(Lactobacillus sake)等被证实有产生物胺的能力,尤其是产酪胺的能力较强[9]。李超等[17]发现25株乳酸菌都不产组胺,40.91%的乳酸菌能产生酪胺,有些菌可使赖氨酸脱羧产生尸胺,有些菌株可使精氨酸脱羧产生精胺或亚精胺。

2.2肠细菌

肠细菌是发酵香肠中经常被检测出来的一类具有较强的产氨基酸脱羧酶能力的细菌,是发酵香肠中产尸胺与腐胺的主要细菌[10]。Kalac等[18]研究发现肠杆菌中的阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)和沙雷氏菌(Serratia marcescens)具有较高的产尸胺和腐胺的能力,而弗氏梓檬酸菌(Citrobacter)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)则具有极强的产腐胺和尸胺的能力。Min等[19]在对16种细菌的产生物胺能力的研究中发现阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)的产腐胺能力最强,而产尸胺能力相对较弱。Bover-cid等[20]研究发现大多数肠杆菌都具有产尸胺或腐胺的能力,其中阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产酸克雷伯菌(Klebsiella oxytoca)以及沙雷氏菌(Serratia marcescens)可大量的产生二元胺类。体外研究表明阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)和沙雷氏菌(Serratia marcescens)等种属可产生大量的尸胺和腐胺,弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)菌株在体外分别会产生大量的尸胺和腐胺,许多肠杆菌也能产生相当数量的组胺[21]。李彬等[22]发现产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)和阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)是发酵香肠中产尸胺和腐胺的主要肠杆菌,产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)有较强的产尸胺能力,而阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)的产腐胺能力则相对较强;两者混合接种培养时,在产尸胺方面存在明显的协同作用,几乎所用混合体系的尸胺产量都高于两个纯菌体系。Hortensia等[23]研究从西班牙发酵香肠中分离的肠杆菌发现36株产气肠杆菌均具有赖氨酸脱羧酶活性、鸟氨酸脱羧酶活性以及组氨酸脱羧酶活;30株大肠杆菌均具有赖氨酸脱羧酶活性和鸟氨酸脱羧酶活性,70%的大肠杆菌(Escherichia Coli)还具有组氨酸大肠杆菌活性;16株沙雷氏菌(Serratia marcescens)和假单胞菌(Pseudomonadaceae)均同时具有酪氨酸脱羧酶活性、鸟氨酸脱羧酶活性和赖氨酸脱羧酶活性。

Ozkaya等[24]指出肠细菌是发酵香肠中产生组胺、酪胺、尸胺和腐胺最主要的细菌。Lorenzo等[25]对79株肠细菌进行了产生物胺能力的调查,结果发现75株都有鸟氨酸脱羧和赖氨酸脱羧能力,并且发现蜂窝哈夫尼亚菌(Hafnia alvei)、沙雷氏菌(Serratia marcescens)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、克雷伯氏菌(Klebsiella)以及大肠杆菌(Escherichia Coli)都具有产尸胺和腐胺的能力。卢士玲等[26]建立了单层培养,双层显色分离产生物胺肠细菌的方法,并从传统中式香肠中分离到96株产生物胺肠细菌,经DNA测序,5种产生物胺优势菌分别为:屎肠球菌(Enterococcus faecium)、粪肠球菌(Enterococcus faecalis)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、大肠埃希杆菌(Escherichia coli)和产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)。苯乙胺主要是由肠细菌产生,而肠细菌主要在发酵的前期产生物胺[27]。

2.3葡萄球菌

Montel等[28]从西班牙香肠中分离到的76%的木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)发现有产组胺能力,肉葡萄球菌(Staphylococcus carnosus)有高氨基酸脱羧酶活性,并且能够产生尸胺、苯乙胺、腐胺和组胺。Martuscelli等[29]从香肠中分离到51种木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)菌株,发现其中的21种有体外氨基酸脱羧酶的活性,有7种产生酪胺、亚精胺和精胺的量超过100mg/kg。Masson等[15]研究发现凝固酶阴性葡萄球菌(Coagulase negative staphylococcus)可以作为安全的发酵剂,从香肠中分离到的23个菌株都具有弱酪胺生成能力。李蕊婷等[30]从新疆熏马肠分离产胺优势菌株,发现木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)产苯乙胺量最高为3831.50μg/mL。

2.4其他微生物

Montel等[28]发现从发酵香肠中分离到的德巴利氏酵母菌(Debaryomyces hansenii)和念珠菌(Candida Albicans)有组氨酸脱羧酶活性,而且其活性比保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)和木糖葡萄球菌(Staphylococcus xylosus)的要高,未鉴定的酵母菌株可产生大量的苯乙胺和酪胺。Ganna等[31]发现酵母具有产生物胺的能力。Caruso等[32]发现酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)具有产色胺、苯乙胺、腐胺和组胺能力,柠檬形克勒克酵母(Kloechera apiculata)具有产色胺、苯乙胺、腐胺、尸胺和组胺能力,美极梅奇酵母(Metschnikowia pulcherrima)具有产苯乙胺、腐胺和尸胺能力。

3 产生物胺微生物的检测方法

目前,产生物胺微生物的检测方法有三种[3]:微生物培养显色法、化学检测法和分子检测法。

3.1微生物培养显色法

微生物培养显色法是根据产生物胺菌株的生理特征及其在生长过程中所引起的周围环境pH的变化,采用特异性添加了适当酸碱指示剂的选择培养基来进行筛选鉴别,主要是利用一种低酸和营养贫瘠的环境,诱导氨基酸脱羧酶,使微生物在大量的底物氨基酸存在的情况下,将氨基酸脱羧成为相应的生物胺。常用溴甲酚紫作为显色剂。

1954年Moller首次运用颜色指示的脱羧酶培养基检测了肠球菌的脱羧酶活性。Bover-Cid等[20]改进了脱羧酶检测培养基,加入缓冲溶液磷酸盐和碳酸钙来中和产生的酸。Maijala等[33]在此基础上加入了肉汤,并且除去了NaCl和葡萄糖,有效阻止了培养基在培养过程中的pH下降,发现其能很好的检测发酵香肠中产生物胺乳酸菌。刘畅等[12]利用添加了前体氨基酸的氨基酸脱羧酶筛选培养基对各菌株的产胺能力进行初筛,发现检测的39株菌中,8株菌具有产酪胺的能力,7株菌具有产精胺的能力,1株菌具有产组胺的能力,1株菌具有产腐胺的能力。Zhihua等[34]发现一种快速检测组胺产生菌的琼脂培养基,先使用双层膜过滤样品后,将下层膜放置于海水琼脂培养基(pH5.8)组胺(0.5%)作为碳源,溴甲酚蓝为指示剂,培养24h后,通过颜色变化(由蓝到红)来检测组胺产生菌。孟甜[35]使用氨基酸脱羧酶培养基初步筛查61株乳酸菌产生物胺情况。经此法初步检测到2株乳酸菌有组氨酸脱羧酶活性,16株乳酸菌有酪氨酸脱羧酶活性,61株乳酸菌均没有检测到鸟氨酸、赖氨酸脱羧酶活性。王长远等[36]经双层培养基培养表明植物乳杆菌菌株在倒入上层培养基后,很快就会发现产生物胺菌的菌落变成紫色,说明植物乳杆菌能产生生物胺。李超[37]为了防止氧气的影响,在Bover-cid的方法基础上,采用了双层培养方法。卢士玲等[23]建立了单层培养,双层显色分离产生物胺乳酸菌和肠细菌的方法,采用单层培养双层显色法,克服了产生物胺菌和不产生物胺菌之间的交互影响。

由于微生物代谢的复杂性,导致检测存在假阳性和假阴性的结果。培养过程中产生其他碱性物质,造成假阳性的结果,有些菌在培养过程中产酸造成假阴性的结果[27]。通过传统的微生物学培养的方法检测生物胺产生菌过程繁琐而且不可靠,有周期长、低敏感性等缺点,因此此方法只能作为产生物胺菌株的粗筛方法。

3.2化学检测法

将采用微生物学粗筛出来的微生物接种于添加了氨基酸前体的液体培养基中培养,采用化学方法对培养基中生物胺含量进行测定,从而判断该微生物菌株是否具有产生物胺能力的方法即为化学检测法。该方法弥补了微生物学检测可能引起的假阴性或假阳性结果。化学方法不仅可以定性判定产生物胺的微生物菌株,而且可以对微生物所产生物胺进行准确的定量分析。较为常用的化学检测手段包括:薄层色谱、毛细管电泳、生物传感器和高效液相色谱法等,其中高效液相色谱法应用最为广泛。化学方法的不足是需要较为昂贵的仪器和试剂。

薄层色谱准确性和特异性与很多方法相比存在不足,但作为一种简单快速的方法,不需要复杂的设备,常用于多胺的定量检测。Costantini等[38]检测133株分离自酒和葡萄汁中的乳酸菌产组胺、酪胺和腐胺的情况,利用薄层色谱和液相色谱验证了PCR的结果。

毛细管电泳有灵敏度高、分离速度快、仪器简单、成本低、无环境污染等优点。Jastrzebska等[39]应用毛细管等速电泳,采用两个简单程序不经衍生反应检测猪肉、牛肉和家禽肉中的生物胺,两个电解质系统具有满意的分离参数,生物胺标准品以及混合品的平均回收率在99%~100%和95%~105%。

生物传感器检测生物胺具有简便、快速、成本低等优点。在生物胺分析方法中,主要研究的是电化学生物传感器。其原理是:生物胺在单胺氧化酶或二胺氧化酶的催化下脱去氨基生成醛、氨和过氧化氢。Calvo-Pérez等[40]研究利用含有血浆胺氧化酶的石墨电极来检测酪胺,使用戊二醛,通过与牛血清蛋白交叉偶联的方式,其线性范围为2~164μmol/L,检测限为(2.0±0.18)μmol/L。Pospiskova等[41]采用光学氧传感器作为换能器,利用来自豌豆的二胺氧化酶并将之固定在覆盖甲壳素的磁性微粒和铁磁流体修饰的净微粒上,酶催化生物胺氧化消耗氧气,通过检测消耗氧气的量,对生物胺进行检测,腐胺和尸胺的检测限是25~30μmol/L。

高效液相色谱法具有应用的固定相颗粒极细,柱效能高,流动相流速快,分析周期短等优点。生物胺的定性定量检测多采用反相高效液相色谱。李志军[42]用高效液相测定109株乳酸菌培养液产生物胺的能力,发现109株乳酸菌培养液中均检出微量腐胺(<20mg/L)和含量不等的酪胺(2.92~1823.17)mg/L,109株乳酸菌培养液中均未检出组胺。孟甜等[16]利用脱羧酶培养基初步筛查61株乳酸菌产生物胺情况,再通过RT-HPLC法测定其在发酵液中的生物胺含量,结果表明61株乳酸菌中23株乳酸菌为酪胺产生菌,只有3株为组胺产生菌。王长远等[36]利用高效液相色谱法对植物乳杆菌产生物胺量进行测定,量取5mL植物乳杆菌发酵液,经浓度0.4mol/L高氯酸提取,结果表明植物乳杆菌产组胺和酪胺的浓度分别为211.03μg/mL和144.43μg/mL。

李蕊婷等[30]从新疆熏马肠分离产胺优势菌,利用高效液相色谱检测菌液产物,验证其产生物胺的能力,发现4号菌株(沙雷氏菌)产生物胺总量最高为985.14μg/mL,且组胺生成量最高为7259.64μg/mL;17号菌株(阴沟肠杆菌)产生物胺总量次高为737.78μg/mL,且色胺生成量最高为4507.81μg/mL;11号菌株(克雷伯氏菌)产腐胺的量最高为2550.54μg/mL。

3.3分子检测法

分子检测法是根据产生物胺微生物的氨基酸脱羧酶的氨基酸或核酸序列的保守区设计特异性引物,通过PCR技术进行特异性扩增,然后进行凝胶电泳,分析检测微生物是否含有氨基酸脱羧酶基因,是否具有产生物胺的能力。分子检测法检测生物胺产生菌更快速,更可靠,不依赖于培养基,而且分子检测法可以在生物胺形成之前,检测出潜在的危险。

目前,对产生物胺细菌的分子检测方法主要集中在产组胺、产酪胺、产腐胺和产尸胺菌株。组胺是由组氨酸脱羧酶催化组氨酸脱羧形成的,Lucas等[43]采用实时定量PCR的方法对酒中产组胺乳酸菌进行检测和计数,引物对组氨酸脱羧酶基因扩增出84bp的基因片段。Ruiz等[44]研究了8株酒酒球菌携带组氨酸脱羧酶基因的情况,结果显示检测的8株酒酒球菌都不携带组氨酸脱羧酶基因。

酪胺是由酪氨酸酸脱羧酶催化酪氨酸脱羧形成的,Costantini等[45]根据短乳杆菌和肠球菌基因序列设计了新的引物对Pt3/Pt4,检测133株乳酸菌的酪氨酸脱酸酶基因。Coton等[46]设计了特异性引物对TD2/ TD5,其有效检测出酪胺产生菌,扩增片段长度为1100bp。

腐胺是由鸟氨酸脱羧酶催化鸟氨酸脱羧产生的,Costantini等[47]利用引物对检测到乳酸菌不携带鸟氨酸脱羧酶基因。Ruiz等[44]使用特异性引物对检测酒酒球菌中的鸟氨酸脱羧酶基因,结果显示检测的酒酒球菌都不携带鸟氨酸脱羧酶基因。徐文娟等[48]利用聚合酶链式反应(PCR)技术确定菌体基因组中是否存在鸟氨基酸脱羧酶基因,结果发现菌株基因组携带有鸟氨酸脱羧酶基因,精氨酸脱羧酶基因等参与精胺和腐胺相互转化的相关酶基因并未检测出。

尸胺是由赖氨酸在赖氨酸脱羧酶的催化下脱羧形成的,李彬[49]采用荧光定量PCR方法检测发现产气肠杆菌具有较强产尸胺的能力和相对较弱的产腐胺的能力,阴沟肠杆菌则均有较强的产腐胺的能力和相对较弱的产尸胺的能力。

还有学者研究了多种氨基酸脱羧酶基因,采用多重PCR技术同时检测复杂样品中的产酪胺、组胺、尸胺和腐胺的菌株。孟甜[34]通过比对已报道的组氨酸脱羧酶和酪氨酸脱羧酶基因序列,以61株乳酸菌基因组DNA为模板,经聚合酶链式反应(PCR),扩增出3株乳酸菌具有组氨酸脱羧酶基因,22株乳酸菌具有酪氨酸脱羧酶基因。朱成龙等[50]利用单重PCR和多重PCR方法,采用3对特异的引物检测40株酒酒球菌基因组中是否含有组氨酸脱羧酶基因、酪氨酸脱羧酶基因和鸟氨酸脱羧酶基因。结果显示建立的PCR方法可作为快捷、高度特异检测含有组氨酸脱羧酶基因、酪氨酸脱羧酶基因和鸟氨酸脱羧酶基因微生物的方法。

PCR反应可以检测潜在的产生物胺菌株,检测结果可以和微生物培养显色法相比较,以确定菌株是否具有产生物胺的能力。PCR方法可以在生物胺产生之前检测出潜在的产生物胺的危险,但不能预示出产品中最终的生物胺含量。

4 总结与展望

发酵香肠中产生物胺的微生物种类繁多,各个菌种间存在一定的协同或拮抗作用,不同菌种产生物胺的能力各不相同,在不同的环境条件下对生物胺含量有不同的影响,因此系统地研究产生物胺的微生物显得尤为重要。此外微生物代谢机制复杂,传统的微生物显色法虽然操作简单,但检测结果存在假阳性和假阴性、低敏感性等缺点,它只能作为一种产生物胺菌株的粗筛方法;化学检测方法可以对生物胺进行准确的定量分析,但前处理时间较长并且需要昂贵的仪器和试剂;分子检测法可以在生物胺产生之前检测出潜在的产生物胺的危险,但对产品最终的生物胺含量不能定量分析。因此,在传统微生物显色法的基础上运用化学和分子检测方法相结合不仅能够检测具有潜在产生物胺的菌株,而且可以对微生物所产生物胺进行准确的定量分析。目前已有少数学者利用双层培养基显色法初步分离产胺优势菌,再采用PCR-DGGE技术,剔除重复菌株并通过同源性比对确认产胺菌,最后利用高效液相色谱检测菌液产物,验证菌株产生物胺的能力,发现此三种方法结合不仅能准确判断产生物胺菌株,而且可以定量分析菌株所产生物胺含量。因此在传统微生物显色法的基础上采用多重PCR技术同时检测复杂样品中的产生物胺的菌株和利用高效液相验证菌株产生物胺的能力,值得更深入的研究。发酵香肠中过量的生物胺会对机体产生不良影响,为保障发酵香肠的安全,积极加强对发酵香肠中产生物胺微生物的系统研究、快速检测生物胺产生菌的方法建立,研发安全的发酵剂和建立有效的发酵香肠安全评价体系将会成为今后研究的重点。

[1]Ruiz C,Jiménez F.Biogenic amines in meat and meat products[J].Critical Reviews in Food Science and Nutrition,2004,44(2):489-499.

[2]Silla Santos M H.Biogenic amines:their importance in foods[J].International Journal of Food Microbiology,1996,29(2):213-231.

[3]邓红梅.传统中式香肠中产生物胺氧化酶菌对生物胺影响的研究[D].石河子:石河子大学,2012.

[4]卢士玲,樊庆鲁,李开雄,等.猪肉自然发酵香肠中细菌和乳酸菌对生物胺积累的作用[J].食品研究与开发,2006,27(2):37-40.

[5]Landeta G,Curiel J A,Carrascosa A V,et al.Technological and safety properties of lactic acid bacteria isolated from Spanish dry-cured sausages[J].Meat Science,2013,95(2):272-280.

[6]Kim M K,Mah J H,Hwang H J.Biogenic amine formation and bacterial contribution in fish squid and shellfish[J].Food Chemistry,2009,116(1):87-95.

[7]Linares D M,Matrtin M,Ladero V,et al.Biogenic amines in dairy products[J].Critical Reviews in Food Science and Nutrition,2011,51(7):691-703.

[8]Delasrivas B,Marcobal A,Carrascosa A,et al.PCR detection of food borne bacteria producing the biogenic amines histamine,tyramine,putrescine and cadaverine[J].Food Protect,2006,69(10):2509-2514.

[9]Crespo M T,Pereira C I,Romao M V S.Evidence for proteolytic activity and biogenicamminesproductioninLactobacillus curvatus and L.homohiochii[J].International Journal of Food Microbiology,2001,68(1):211-216.

[10]Pircher A,Bauer F,Paulsen P.Formation of cadaverine,histamine,putrescine and tyramine by bacteria isolated from meat,fermented sausages and cheeses[J].European Food Research and Technology,2007,22(6):225-231.

[11]张志伟,谢华,纽广安,等.发酵香肠中生物胺生成量的菌株效应分析[J].肉类研究,2005,1(1):28-30.

[12]刘畅,张灼阳,郭晓奎.产生物胺乳酸菌的筛查与检测[J].中国微生态学杂志,2009,21(5):427-429.

[13]Danilovicb,Jokovicn,Petrovicl,et al.The characterisation of lactic acid bacteria during the fermentation of an artisan Serbian sausage(Petrovská Klobása)[J].Meat Science,2011,88(4):668-674.

[14]Dapkevicius M,Noutm J R,RomboutsF M,et al.Biogenic amine formation and degradation by potential fish silage starter microorganisms[J].International Journal of Food Microbiology,2000,57(1-2):107-114.

[15]Masson F,Talon R,Montel M C.Histamine and tyramnie production by bacteria from meat products[J].International Journal of Food Microbiology,1996,32(1):199-207.

[16]孟甜,田丰伟,陈卫,等.一种利用RT-HPLC分析乳酸菌产生物胺的方法[J].微生物学通报,2010,37(1):141-146.

[17]李超,董明盛.一种改进的产生物胺乳酸菌的检测方法[J].食品科学,2005,26(6):193-196.

[18]Kalac P.Biologically active polyamines in beef,pork and meat products:A review[J].Meat Science,2006,73(2):1-11.

[19]Min J S,Lee S O,Jang A,et al.Production of biogenic amines by microflora inoculated in meats[J].Asian-Australian Journal of Animal Sciences,2004,17(1):1472-1478.

[20]Bover-Cid S,Wilhelm H H.Improved screening procedure forbiogenicamineproductionbylacticacidbacteria[J]. International Journal of Food Microbiology,1999,53(3):33-41.

[21]Zaman M Z,Bakar F A,Selama T J,et al.Occurrence of biogenic amines and amines degrading bacteria in fish sauce[J]. Czech Journal of Food Sciences,2010,28(5):440-449.

[22]李彬,舒蕊华,徐幸莲,等.液体培养条件下产气肠杆菌与阴沟肠杆菌产生物胺交互作用研究[J].食品科学,2012,33(5):160-164.

[23]Hortensia S M.Amino acid decarboxylase capability of microorganisms isolated in Spanish fermented meat products[J]. International Journal of Food Microbiology,1998,39:227-230.

[24]Ozkaya F,Ayhan K,Vural N.Biogenic amines produced by Enterobacteriaceae isolated from meat products[J].Meat Science,2001,58(2):163-166.

[25]Lorenzo J M,Cachaldora A,Fonseca S,et al.Production of biogenic amines“in vitro”in relation to the growth phase by Enterobacteriaceae species isolated from traditional sausages[J]. Meat Science,2010,86(3):684-691.

[26]卢士玲,李开雄,徐幸莲,等.传统香肠中产生物胺肠细菌和乳酸菌分离方法的研究[J].食品与发酵工业,2012,38(8):47-52.

[27]Roig-Sagués A X,Hernández,Herrero,et al.Microbiological events during the elaboration of“fuet”,a spanish ripened sausage. Relationship between the development of histidine and tyrosine decarboxilase containing bacteria and pH and water activity[J]. European Food Research and Technology,2009,12(2):108-112.

[28]Montel M C,Masson F,Talon R.Comparison of biogenic amine content in traditional and industrial French dry sausages[J].Sciences des Aliments,1999,19(2):247-254.

[29]Martuscelli M,Crudele M A,Gardini F,et al.Biogenic amine formation and oxidation by Staphylococcus xylosus strains from artisanal fermented sausages[J].Letters in Applied Microbiology,2000,31(3):228-232.

[30]李蕊婷,卢士玲,李开雄,等.新疆熏马肠中产氨基酸脱羧酶优势细菌的分离及鉴定[J].现代食品科技,2014,9(1):52-65.

[31]Ganna V,Mark R Bleackley.Oxidation of organic and biogenic amines by recombinant human hephaestin expressed in pichia pastoris[J].Archives of Biochemistry and Biophysics,2011,514(3):50-56.

[32]Caruso M,Fiore C,Contursi M,et al.Formation of biogenic amines as criteria for the selection of wine yeasts[J].World Journal of Microbiology&Biotechnology,2002,18(2):159-163.

[33]Maijala R L.Formation of histamine and tyramine by some lactic acid bacteria in MRS broth and modified decarboxylation agar[J].Letters in Applied Microbiology 2003,17(3):40-43.

[34]Zhihua Tao,Minoru,Sato,et al.Simple and rapid detection of histamine forming bacteria by differential agar medium[J].Food Control,2009,20(2):903-906.

[35]孟甜.乳酸菌产生物胺的鉴定及食品中生物胺的检测[D].无锡:江南大学,2012.

[36]王长远,王云光,于长青,等.产生物胺乳酸菌的检测及产生物胺量的测定[J].农产品加工·学刊,2010,1(1):22-25.

[37]李超.产生物胺乳酸菌检测方法的建立其应用[D].南京:南京农业大学,2005.

[38]Costantini A,Cersosimo M,Prete V,et al.Production of biogenic amine by lactic acid bacteria,screening by PCR,thin layer chromatography,and high performance liquid chromatography of strains isolated from wine and must[J].Journal of Food Protection,2006,69(5):391-396.

[39]Jastrzebska A.A comparative study for determination of biogenic amines in meat samples by capillary isotachophoresis with two electrolyte systems[J].European food research and technology,2012,235(6):563-572.

[40]Calvo-Pérez A,Domínguez-Renedo O,Alonso-Lomillo M A,et al.Disposable amperometric biosensor for the determination of tyramine using plasma amino oxidase[J].Microchimica Acta,2013,180(2):253-259.

[41]Pospiskova K,Safarik I,Sebela M,et al.Magnetic particlesbased biosensor for biogenic amines using an optical oxygen sensor as a transducer[J].Microchim Acta,2013,180(6):311-318.

[42]李志军.食品中生物胺及其产生菌株检测方法研究[D].青岛:中国海洋大学,2007.

[43]Lucas P,Claisse O,Lonvaud-Funel A.High frequency of histamine-producing bacteria in the enological environment and instability of the histidine decarboxylase production phenotype[J].Applied and Environmental Microbiology,2008,74(3):811-817.

[44]Ruiz P,Izquierdo P M,Seseña S,et al.Selection of autochthonousOenococcusoenistrainsaccordingtotheir oenological properties and vinification results[J].International Journal of Food Microbiology,2010,137(5):230-235.

[45]Costantini A,Cersosimo M,Prete V,et al.Production of biogenic amine by lactic acid bacteria,screening by PCR,thin layer chromatography,and high performance liquid chromatography of strains isolated from wine and must[J].Journal of Food Protection,2006,69(3):391-396.

[46]Coton M,Coton E,Lucas P,et al.Identification of the gene encoding a putative tyrosine decarboxylase of Carnobacterium divergens 508 development of molecular tools for the detection of tyramine-producing bacteria[J].Food Microbiology,2004,21(1):125-130.

[47]Costantini A,Vaudano E,Petre V,et al.Biogenic amine production by contaminating bacteria found in starter preparations used in wine making[J].Journal of agricultural and food chemistry,2009,57(4):10664-10669.

[48]徐文娟,刘芳,王道营,等.大肠杆菌YSY1产腐胺特性及相关基因分析[J].食品科学,2013,34(17):136-142.

[49]李彬.产气肠杆菌和阴沟肠杆菌产生物胺作用的研究[D].南京:南京农业大学,2011.

[50]朱成龙,李凯,杨芮,等.聚合酶链式反应对酒酒球菌氨基酸脱羧酶基因的检测[J].食品科学,2013,6(4):42-56.

Review on microorganism of producing biogenic amine and detecting methods in fermented sausage

SUN Xia,YANG Yong*,GONG Yang,YANG Min,QING Dan-dan,LI Yue-wen,LI Jing,HE Li,LI Cheng,HU Bin
(College of Food Science,Sichuan Agricultural University,Ya’an 625014,China)

Excessive amount of biogenic amines in fermented sausage,not only influences quality and safety of fermented sausage,but also could cause adverse reactions on the body.Amino acid decarboxylase activity of microorganism lead to accumulate a lot of biogenic amines,accurate comprehensive detection of microorganism producing biogenic amine importance to ensure the safety of sausage.The way of formation and focus on the microorganism of producing biogenic amine and its detecting methods was introduced in the article,in order to develop safer starter cultures and guarantee for quality of fermented sausage provided some

.

fermented sausage;biogenic amine;microorganism;detection methods

TS251.65

A

1002-0306(2015)12-0379-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.12.072

2014-10-21

孙霞(1989-),女,硕士研究生,研究方向:肉品科学与技术。

杨勇(1969-),男,博士,教授,研究方向:肉品科学与技术。

四川省科技厅成果转化项目(2013NC0052)。

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