关于罗氟司特质量标准的研究

刘昕 王金桃

(山西医科大学公共卫生学院 山西 太原 030001)

1.有关物质方法学研究

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器

Agilent 1260 DAD;Agilent 1260 VWD;PH 计:FE 20 型，METTLER TOLEDO 公司;电子分析天平:AB135 - S，METLER TOLERO 公司;电子天平:CP225D，Sartorius 水:纯净水，自制Milli-Q。

1.1.2 试剂

磷酸二氢钾，氢氧化钠，40%四丁基氢氧化铵水溶液，甲醇，4L，供试品:自制 罗氟司特对照品:罗氟司特。

1.2 实验方法

1.2.1 色谱条件

用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;以磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾0.65 g，加水900 ml，加40%四丁基氢氧化铵水溶液0.5 ml，用磷酸调pH 为3.2)-甲醇(90 :10)为流动相;检测波长为235 nm;理论板数按罗氟司特峰计算不低于2000［1］。

1.2.2 溶液的配制

(1)供试品溶液的配制

精密称取样品适量，加溶剂溶解并稀释制成浓度为0.5 mol·L-1的溶液，即得供试品溶液。

(2)对照品溶液的配制

精密量取供试品溶液1.0 ml，置100 ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度，即得。溶剂:水:乙腈=7:3。分别取对照溶液及供试品溶液各10 ul，注入色谱仪，记录色谱图。

1.2.3 方法与结果

(1)系统适用性试验

试验方法:称取对照品适量，加溶剂制成浓度为0.5 mol·L-1的溶液即得供试品溶液。取供试品溶液各10 ul 注入色谱仪，记录色谱图。相对保留时间(min)21.293，对称因子1.04，理论塔板数17321，分离度3.04/7.68。试验结论:该方法测定罗氟司特系统适用性良好。

(2)强降解试验

酸破坏:精密称取样品约25 mg，置50 ml 量瓶中，加入1 mol·L-1盐酸2.0 ml，在沸水浴中加热3 小时，放冷，用1 mol·L-1氢氧化钠中和，并加溶剂溶解并稀释至刻度，即得。碱破坏:精密称取样品约25 mg，置50 ml 量瓶中，加入1mol·L-1氢氧化钠2.0 ml，在沸水浴中加热3 小时，放冷，用1 mol·L-1盐酸中和，并加溶剂溶解并稀释至刻度，即得。氧化破坏:精密称取样品约25 mg，置50 ml 量瓶中，加入30%双氧水1.0 ml，在沸水浴中加热10 min，放冷，并加溶剂溶解并稀释至刻度，即得。高温破坏:精密称取样品约25 mg，置50 ml 量瓶中，溶剂适量溶解，在沸水浴中加热4 小时，放冷，并加溶剂稀释至刻度，即得。光照破坏:精密称取样品约25 mg，置50 ml 量瓶中，溶剂适量溶解，放入光照仪(4000lx)中5 h，加溶剂溶解并稀释至刻度，即得。分别取以上溶液各10 ul，注入色谱仪，记录色谱图。结果见表1。

表1 强降解试验结果

试验结论:罗氟司特色谱峰纯度，理论板数，与相邻杂质峰的分离度均达到要求。该方法测定罗氟司特有关物质专属性良好。

1.2.4 精密度试验(1)进样精密度试验

试验方法:取供试品溶液10 ul，连续进样6 针，记录色谱图色谱纯度(%)均 是99.95，峰 面 积 值 为2464621、2468759、2461813、2459206、2443194、2444719 和2457052，RSD(%)值为0.43。试验结论:该方法测定罗氟司特进样精密度良好。

(2)中间精密度试验

试验方法:分别在不同仪器，不同人对有关物质进行测定。比较有关物质测定的结果。单杂(%)为0.02，总杂为0.05 ，RSD(%)为0。试验结论:该方法测定罗氟司特中间精密度良好。

1.2.5 定量限及检测限

称取对照品适量，加溶剂稀释至适当的浓度，使信噪比达到10 ︰1，即为定量限;信噪比达到3 ︰1，即为检测限。试验结果:定量限为506 ng·ml-1。检测限为151·8ng·ml-1。

1.2.6 重复性试验

精密称取样品适量，加溶剂溶解并稀释至浓度为0.5 mg·ml -1，摇匀即得供试品溶液。精密量取供试品溶液1.0 ml，置100 ml 量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。试验结论:该方法测定罗氟司特有关物质重复性良好。

1.2.7 耐用性试验

通过对色谱条件中的波长、流速、流动相水相pH 值、有机相水相之间的比例、色谱柱、柱温等进行相应的变化，分别测定有关物质的含量。试验结果:该方法测定罗氟司特有关物质耐受性良好。

1.2.8 溶液稳定性试验

取供试品溶液，测定其12 小时内的稳定性。试验结论:有关物质供试品溶液12 小时内稳定。

2.溶剂残留方法学验证

2.1 实验部分

2.1.1 仪器与试剂

安捷伦7820A，乙醇，N、N 二甲基甲酰胺(DMF)，电子天平:Sartorius，CP225D，水:高纯水，自制，Milli-Q，供试品:自制 罗氟司特

2.1.2 溶液的配制

(1)供试品溶液的配制

取本品约0.2 g，精密称定，置顶空瓶中，加N、N 二甲基甲酰胺2 ml溶解，密封，摇匀即得。

(2)对照品溶液的配制

取乙醇适量，精密称定，用N、N 二甲基甲酰胺(DMF)制成乙醇0.5 mg·ml-1，即得。

2.1.3 色谱条件

试验依据:中国药典2010 年版二部附录VIII P。色谱柱:5% -苯基-95%甲基聚硅氧烷填料(DB-5，30 m×0.53 mm×1.5 μm)柱，柱温起始温度60 ℃，保持5 min，以20 ℃·min-1升温至200 ℃，保持5min。柱流速:1.5ml·min-1;进样口:200 ℃;检测器:50 ℃;分流比:10:1;顶空平衡温度:80 ℃;定量环平衡温度:95 ℃;传输线平衡温度:105 ℃。分别取对照品溶液及供试品溶液各2 ml 置顶空瓶，顶空进样，记录色谱图。

3.结果与结论

3.1 系统适用性试验

对照溶液:取乙醇适量，精密称定，用N、N 二甲基甲酰胺(DMF)制成乙醇浓度为0.5mg·ml-1，即得。分别取对照品溶液2 ml 置顶空瓶，注入气相色谱仪，记录色谱图。

试验结果及结论:乙醇保留时间:4.920 min;空白不干扰乙醇的测定;理论塔板数为66639 系统适用性良好。

3.2 进样精密度试验

精密称定乙醇约0.5 g，置100 ml 量瓶中，加DMF 稀释至刻度摇匀，即得对照品储备溶液，精密量取对照品储备溶液5 ml，置50 ml 量瓶中，加DMF 稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液;取对照品溶液2 ml，注入色谱仪，记录色谱图。试验结论:该仪器测定进样精密度良好。

3.3 线性与范围

精密量取进样精密度项下对照品储备溶液0.1 ml、0.5 ml、0.8 ml、1.0 ml、2.0 ml，分别置10 ml 量瓶中，加DMF 稀释至刻度，即得线性溶液1、2、3、4、5。分别取以上溶液2 ml，注入色谱仪，记录色谱图。试验结论:乙醇在浓度为0.051161 mg·ml -1 ～1.02322 mg·ml -1 范围内，与峰面积呈良好的线性关系。相关系数r=0.9998。

3.4 定量限及检测限

称取对照品适量，加溶剂稀释至适当的浓度，使信噪比达到8 ︰1 或10 ︰1，即为定量限;信噪比达到3 ︰1 或2 ︰1，即为检测限。

3.5 重复性试验

精密称取6 份样品，利用溶剂残留测定方法测定其残留溶剂的含量。平均(%)值为0.03 ，RSD(%)值为2.78。试验结论:该方法测定罗氟司特中乙醇残留重复性良好。

3.6 加样回收率

80%对照品溶液:精密量取精密度项下对照品储备溶液2.0 ml 置25 ml 量瓶中，加DMF 稀释至刻度，摇匀即得。100%对照品溶液:精密量取精密度项下对照品储备溶液2.5 ml 置25 ml 量瓶中，加DMF 稀释至刻度，摇匀即得。120%对照品溶液:精密量取精密度项下对照品储备溶液3.0 ml 置25 ml 量瓶中，加DMF 稀释至刻度，摇匀即得。供试品溶液:精密称取罗氟司特样品约0.2 g，置顶空瓶中，共称取9 份。分别加入80%、100%、120%对照品溶液2 ml，各三份，用DMF 溶解并稀释至刻度，摇匀，即得加样回收率供试品溶液。对照品溶液:取乙醇适量，精密称定，加DMF 制成乙醇浓度为0.5 mg·ml -1，即得。分别取对照品溶液及供试品溶液各2 ml 置顶空瓶，注入气相色谱仪，记录色谱图。试验结果:该方法测定乙醇加样回收率良好。

3.7 耐用性试验

通过对色谱条件中的起始柱温、柱流速、进样口温度、分流比等进行改变，测定罗氟司特的溶剂残留。试验结论:该方法测定罗氟司特的溶剂残留耐用性良好。

4.结论与讨论

检测波长的选择取罗氟司特供试品适量，分别加入流动相制成浓度为0.5 mg·ml-1 的供试品溶液，在DAD 上于190 -400 nm 波长范围内进行扫描［2］。结果对照品供试品溶液于271 nm 处有最大吸收，235 nm处有最小吸收但能检出杂质最多，且在235 nm 处无干扰，故检测波长选为235 nm。流动相的选择 发现采用以磷酸盐缓冲液(称取磷酸二氢钾0.65 g，加水900 ml，加40%四丁基氢氧化铵水溶液0.5 ml，用磷酸调pH3.2)-甲醇(90:10)为流动相时，罗氟司特的峰型对称，与其有关物质以及降解产物均能得到很好的分离，因此采用本方法可有效测定罗氟司特的有关物质。

［1］ 韩伟，周新.慢性阻塞性肺疾病的治疗新选择-罗氟司特.世界临床药物，2011，32(7):396 -399.

［2］ 吕亚光，安信生，吕昭云等.培美曲塞二钠原料中9 种残留溶剂测定方法研究［J］，中国药品标准，2009，10(6):427 -429.