三叶青高效快繁技术体系的建立

邵骏骅，邵卫平，刘永立

(浙江大学农业与生物技术学院，浙江杭州 310012)



三叶青高效快繁技术体系的建立

邵骏骅，邵卫平，刘永立*

(浙江大学农业与生物技术学院，浙江杭州 310012)

[目的]研究三叶青快繁技术。[方法]以药用植物三叶青组培苗的节部为外植体，研究了植物生长调节剂对三叶青增殖和生根的影响。[结果]在含有6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L的MS培养基中，三叶青增殖倍数最大；而三叶青的最佳生根培养基为MS+IBA 0.5 mg/L。生根的三叶青经过驯化后移栽到含有蛭石、草炭、珍珠岩(3∶6∶1)的混合基质中，一个月后成长为健康植株。[结论]该研究建立的三叶青高效快繁体系，为解决三叶青的人工栽培所需种苗提供了技术支撑。

三叶青；组织培养；增殖；生根；移栽驯化

三叶青是我国特有植物，含黄酮类、三萜类化合物及蒲公英萜醇等，为用途广泛的珍稀名贵中药材[1]。具有清热解毒、祛风化痰、活血止痛、抗肿瘤、保肝、抗炎、调节免疫等药理作用，基本无毒[2-3]。三叶青对于生长环境要求严苛，自然条件下生长速度缓慢[4]。因对野生三叶青资源的过度利用及自然环境恶化，致使其野生资源已濒临灭绝，因此开展三叶青组织培养及人工栽培十分重要，并有人已进行了初步研究[5-7]。笔者以药用植物三叶青组培苗的节部为外植体，研究了植物生长调节剂对三叶青增殖和生根的影响，通过对三叶青开展组培快繁技术研究，不仅能提供大量医药原材料，也有保护已濒临灭绝的三叶青野生资源的作用。

1 材料与方法

1.1 材料

以三叶青组培苗的幼嫩带腋芽茎段为外植体，该材料原产于浙江省台州地区。

1.2 方法

1.2.1 增殖培养试验。切取带腋芽茎段接种到20个不同激素浓度组合6-BA(0.1、0.2、0.5、1.0、2.0 mg/L )、NAA(0.02、0.10、0.20、0.50 mg/L )的MS培养基中。附加30 g/L 蔗糖、7 g/L 琼脂粉，pH=5.7。组织培养室中光强为30 μmol/(m2·s)，温度为(25±2)℃。培养8周后，分别统计每个处理的增殖倍数和株高。

1.2.2 生根培养试验。切取带腋芽茎段接种到含不同浓度IBA的MS培养基中，研究4个不同浓度IBA(0、0.1、0.5、1.0 mg/L )对三叶青生根的影响。培养4、6周后，分别统计每个处理的根数、根长。

1.2.3 品种和光照试验。研究品种(原始品种、“早生”品种)、光照(不遮光、遮光50%)对三叶青组培苗生长发育的影响，切取带腋芽茎段接种到含6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L的MS培养基中培养4周后，分别统计每个处理的出芽率、增殖倍数、株高和节数。

1.2.4 驯化移栽试验。选取生长情况良好的三叶青试管苗，炼苗后洗去根部的培养基，栽植于装有蛭石、草炭、珍珠岩(3∶6∶1)混合基质的塑料盆中。第1周浇足水后覆盖塑料薄膜，置于阴凉处，3 d以后逐渐揭开塑料薄膜至1周后完全去除。

2 结果与分析

2.1 增殖培养试验结果

由表1～2可知，生长调节剂对植株的增殖倍数和株高均有显著影响。在6-BA浓度<1.0 mg/L 时，增殖倍数随着6-BA浓度的升高而升高，植株较高，但当6-BA浓度≥1.0 mg/L 时，密集的丛生芽开始增多，少许出现愈伤组织，植株较矮，因此6-BA浓度以0.5 mg/L为宜。加0.5 mg/L 6-BA时，增殖倍数随NAA浓度的增大而减小，株高随NAA浓度的增大而增大，且0.10和0.02 mg/L NAA时增殖倍数差异不显著，0.10、0.20、0.50 mg/L NAA时株高差异不显著，所以NAA浓度以0.10 mg/L为宜。因此6-BA 0.5 mg/L +NAA 0.1 mg/L 为三叶青增殖培养中最佳激素组合。

2.2 生根培养试验结果

从表3可看出，平均根数随着IBA浓度升高而升高，当IBA浓度达0.5 mg/L后，趋于平缓，当IBA为0.5 mg/L时为最大值4.04；平均根长受IBA影响不大，低浓度时(<0.5 mg/L)的平均根长略大于高浓度时的平均根长。因此 0.5 mg/L为生根试验最佳IBA浓度。此外，试验数据显示4个处理的生根率均为100%。由此可见IBA(吲哚丁酸)促进三叶青生根的效果显著。

表1 植物生长调节剂对三叶青增殖倍数的影响

注：数据后不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05)。

表2 植物生长调节剂对三叶青株高的影响 cm

注：数据后不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05)。

表3 IBA对三叶青生根数量和根长的影响

注：同列数据后不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05)。

2.3 品种和光照试验结果

由表4可见，遮光会降低“早生”品种的出芽率、增殖倍数和株高，对于原始品种影响较小；当不做遮光处理时，“早生”品种的株高和节数均高于原始品种，其中株高比原始品种高约25%。因此，若生产环境光照条件良好，可以选用“早生”品种，生长速度较快，生产周期短，株高和节数均优于原始品种；若生产环境光照条件不良，则应当选用原始品种，能够适应阴暗的环境，各项数值比较稳定，受光照影响较小。

表4 品种和光照对三叶青生长发育的影响

注：同列数据后不同小写字母表示处理间差异显著(P<0.05)。

2.4 驯化移栽试验结果

从图1可以明显看出，4周的移栽苗比2周的移栽苗枝叶发达，茎干粗壮，生长势旺盛。移栽2周时，三叶青还未完全适应驯化地的环境，不能及时地吸收水分，叶片不饱满；等到4周以后，移栽苗已经完全适应驯化地的环境，生长势旺盛。

3 小结

为了保护野生资源，维持生物多样性，建立珍贵药用植物三叶青的人工繁殖与栽培体系是有效的方法。综合考虑增殖试验的增殖倍数和株高因素，最后判定最佳增殖培养基为MS+6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L，比较不同浓度IBA对于生根试验的影响，最后判定最佳生根培养基为MS+IBA 0.5 mg/L，选择蛭石、草炭、珍珠岩(3∶6∶1)为移栽苗的混合基质。整个育苗过程周期较短，从带腋芽的茎段开始增殖培养到生根移栽仅需要10周时间，操作简单，管理方便，为三叶青的规模化生产提供了初步的规范化组织培养和栽培方案。

[1] 江华.三叶青的研究进展[J].中国保健营养，2013(6)：54-55.

[2] 杨王伟，叶俊英，周莹莹，等.中药资源三叶青应用基础研究进展[J].现代农业科技，2012(23)：79-81.

[3] 陈丽芸，郭素华.三叶青的化学成分及药理作用研究进展[J].浙江中医药大学学报，2012，36(12)：1368-1370.

[4] 杜苏瑞，向太和，李朦.生物技术在药用植物三叶青中的应用研究进展[J].杭州师范大学学报(自然科学版)，2012，11(2)：142-145.

[5] 吴浩，彭昕，林言娜，等.三叶青愈伤组织诱导及分化培养基筛选[J].现代农业科技，2011(21)：121-122，125.

[6] 钟毓倩.三叶青的组织培养与快速繁殖研究[J].浙江中医杂志，2007，42(6)：363.

[7] 符渊淼.药用植物三叶青的种质鉴定和组培快繁研究[D].杭州：浙江大学，2011.

Establishment of Efficient Micropropagation System ofTetrastigmahemsleyanum

SHAO Jun-hua, SHAO Wei-ping, LIU Yong-li*

(College of Agriculture & Biotechnology, Zhejiang University, Hangzhou, Zhejiang 310012)

[Objective] To study rapid propagation technique ofTetrastigmahemsleyanum. [Method] Using medicinal plantTetrastigmahemsleyanumas experimental material, the effects of plant growth regulators onTetrastigmahemsleyanum’s multiplication and rooting were studied. [Result] The results showed that in 6-BA 0.5 mg/L+NAA 0.1 mg/L medium,Tetrastigmahemsleyanum’s proliferation rate is the largest; Yet the best rooting medium is MS+IBA 0.5 mg/L. The plants with roots after domestication transplanted to mixed substrate containing vermiculite, peat, perlite (3∶6∶1). After a month, it grow into a healthy plant. [Conclusion] This study established an efficient micropropagation system ofTetrastigmahemsleyanum, providing the technical support to solveTetrastigmahemsleyanum’s needed for artificial cultivation of seedlings.

Tetrastigmahemsleyanum; Tissue culture; Multiplication; Rooting; Domesticated cultivation

玉环县科技局科技攻关项目“玉环植物种苗快繁技术及其产业化”。

邵骏骅(1990-)，男，浙江杭州人，硕士研究生，研究方向：植物生物技术。*通讯作者，教授，博士，硕士生导师，从事植物生物技术研究。

2015-11-13

S 567

A

0517-6611(2015)35-208-02