Ets-1在不同Banff分级慢性肾脏病肾组织中的表达

赵家璧，狄 佳

Ets-1在不同Banff分级慢性肾脏病肾组织中的表达

赵家璧1，狄 佳2

目的 探讨不同Banff分级慢性肾脏病患者肾脏中Ets-1(V-ets erythroblastosis virus E26 oncogene homolog 1)表达的差异。方法 选取在本院进行肾穿刺活检的患者60例，根据患者肾脏纤维化程度，分为Banff分级正常、轻度、中度及重度4组，每组各15例。对4组患者的性别、年龄、生化指标及病理特征进行分析，并通过免疫组化方法检测肾组织中Ets-1的表达。结果 Banff分级轻度组的BUN、UA、iPTH、尿β2-MG较正常组增高；Banff分级中度组的BUN、SCr、UA、iPTH及尿β2-MG较正常组增高；Banff重度组的MABP、BUN、SCr、UA、血磷、iPTH、尿β2-MG均较正常组明显升高，而Hb降低。Banff轻度、中度及重度组患者球性硬化、小管萎缩、间质炎性细胞浸润及间质纤维化比例均显著高于正常组。免疫组化显示Banff分级正常组、轻度组、中度组及重度组Ets-1的 A值分别为0.10±0.01、0.15±0.08、0.32±0.07、0.54±0.12，中度组、重度组较正常组升高。结论 肾间质纤维化患者Ets-1表达升高且随Banff分级程度加重而增高。

转录因子；肾间质纤维化

慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)是世界性公共健康问题，许多患者最终进展为慢性肾衰竭，其共同的病理特征为小管间质纤维化和肾小球硬化。其中，肾小管间质纤维化是决定慢性肾脏病肾组织病变程度和肾功能进行性衰竭速度的关键因素。Ets-1属于ETS家族成员之一，该家族是一类具有高度保守DNA结合域的转录因子的总称，因最早在鸟类成红细胞增多症病毒内被发现而得名[1]。在多种肾脏疾病模型中均发现Ets-1表达的上调，然而，有关其在人体肾脏标本中的研究很少。本研究拟通过观察不同Banff分级慢性肾脏病患者肾脏Ets-1表达，探讨其与肾脏纤维化的相关性。

1 对象与方法

1.1 对象 选择2013-05至2015-05在常州市第一人民医院进行肾穿刺活检的慢性肾脏病患者60例。排除继发性肾小球疾病，肾活检病理肾小球总数<10个及临床病理资料不全者。根据病理结果，将患者以Banff分级分为正常及轻度、中度、重度4组(即无纤维化为正常组，肾间质纤维化累及间质面积<25%为轻度组，25%～50%中度组，>50%重度组)，每组各15例。

1.2 方法

1.2.1 记录临床资料 (1)记录患者年龄、性别、体质量指数(BMI)和平均动脉压(MABP)=舒张压+1/3(收缩压-舒张压)；(2)检测血红蛋白(Hb)、血白蛋白(ALB)、血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr)、尿酸(UA)、血清钙、血清磷、全段甲状旁腺激素(iPTH)、尿蛋白定量、尿N乙酰βD氨基葡萄糖苷酶(NAG)等。所有临床指标均为入院后肾活检前最近一次清晨空腹检查结果。

1.2.2 收集病理资料 计数光镜下肾小球球性硬化、节段硬化个数及其相应比例、小管间质损伤(小管萎缩、间质炎性细胞浸润、间质纤维化)的程度。小管间质损伤程度的定义：小灶性(<总面积的25%)、多灶性(25%～49%)、大片状(50%～74%)和弥漫性(≥75%)。

1.2.3 免疫组化 石蜡切片(2 μm)常规二甲苯脱蜡和梯度乙醇水化，滴加3%去离子水孵育10 min，阻断内源性过氧化物酶，PBS冲洗。加入适当比例稀释的一抗，37 ℃孵育1 h；加入二抗，37 ℃孵育30 min，PBS冲洗，DAB显色。蒸馏水及时终止反应，自来水冲洗5 min；苏木素淡染细胞核，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。用PBS代替一抗作为阴性对照，阳性反应物部位呈棕色，细胞核呈淡蓝色。在200倍的显微镜视野下，每张切片取5个不重复的视野，由摄像系统提取数据化病理图像，输入图像分析系统Motic Images Advanced进行吸光度(A)计算，取其平均值进行统计分析。

2 结 果

2.1 临床特征及生化指标 Banff分级轻度组的BUN、UA、iPTH、尿β2-MG较正常组增高(P<0.05)；Banff分级中度组的BUN、SCr、UA、iPTH及尿β2-MG较正常组增高(P<0.05)；Banff分级重度组患者的MABP、BUN、SCr、UA、血磷、iPTH、尿β2-MG均明显升高(P<0.05)，而Hb明显降低(P<0.05，表1)。

表1 各组慢性肾脏病患者临床资料及生化指标比较 (n=15；±s)

注：与正常组比较，①P<0.05

2.2 病理特征 Banff分级轻度、中度及重度组患者球性硬化、小管萎缩、间质炎性细胞浸润及间质纤维化比例均显著高于正常组(P<0.05，表2)。

2.3 肾组织Ets-1表达 免疫组化结果显示，Ets-1蛋白呈棕黄色颗粒状，分布于肾小球和肾小管。半

定量分析结果显示，Banff分级正常组、轻度组、中度组及重度组患者肾组织Ets-1的 A值分别为0.10±0.01、0.15±0.08、0.32±0.07、0.54±0.12，中度组、重度组较正常组显著升高(P<0.05，图1)。

表2 各组慢性肾脏病肾组织病理特征 (例；n=15；%)

注：数据描述为频数(频率)或M(1/4,3/4)，与正常组比较，①P<0.05

图1 不同Banff分级患者肾组织Ets-1的表达(免疫组化×200)

3 讨 论

肾间质纤维化是导致终末期肾衰竭的主要病因。本研究显示，Banff分级轻度、中度及重度组患者的BUN、UA、尿β2-MG均较正常组增高，且随着Banff分级的加重，患者的MABP、BUN、SCr、UA、尿β2-MG逐渐升高，而血红蛋白明显降低，提示患者肾间质纤维化、贫血程度加重，且肾功能、小管功能下降。研究显示，在肾小球滤过率(GFR)<60 ml/min或更低的患者，可出现钙磷代谢紊乱及iPTH升高[2]。本研究结果提示，Banff轻度组患者即开始出现iPTH的增高，Banff重度组除iPTH升高外还伴有血磷的升高。虽然该组患者血钙值较正常组及Banff轻、中度组下降，但差异无统计学意义，可能与患者口服补充钙剂及样本数量过少有关，Banff分级与钙磷代谢紊乱的相关性尚待进一步证实。患者尿蛋白定量在各组之间无统计学差异，提示尿蛋白程度与肾衰竭程度并不相关。

肾间质纤维化常伴有肾小管萎缩、间质炎性细胞浸润、成纤维细胞聚积及间质基质沉积等特征性病理改变。本研究通过肾穿刺病理检查发现肾间质纤维化的患者其球性硬化、小管萎缩、间质炎性细胞浸润程度均显著高于正常组，且小管间质病变较小球病变差异更为显著，与既往研究证实肾间质纤维化较肾小球病变更能反映肾功能下降严重程度和判断预后相一致[2]。

Ets-1属于Ets转录因子家族成员之一，调控多种靶基因如MMP1、MMP3、TIMP-1的表达并与人类疾病密切相关[3-7]，它在肾脏病中的作用尚存在争议。虽然研究证实其在肾脏发育及系膜基质重塑中具有重要的作用[8，9]，但更多的研究认为，Ets-1参与了多种肾脏疾病的进展。在多种肾脏疾病模型中均发现Ets-1表达的上调[10-13]。Ets-1在肾脏纤维化中的作用及机制存在争议，研究认为激活某些信号途径可能对肾脏纤维化起促进作用，而激活另一些途径则可抑制肾脏纤维化[14]。本研究观察了不同程度肾间质纤维化肾穿刺标本中Ets-1的表达情况，发现Banff中、重度组较正常组显著升高，提示Ets-1参与肾脏纤维化的进展。其可能作用机制为：(1)上调MMP的活性和基因表达，影响细胞外基质的合成降解或细胞转分化[8]；(2)作为Ang II的重要下游调节因子促进成纤维细胞激活和细胞外基质的沉积[15]；(3)在缺氧导致的肾损伤后修复阶段发挥重要作用[16]。但是目前关于Ets-1在肾脏纤维化中的具体信号通路及相关靶基因还有待于进一步研究，从分子水平深入研究Ets-1在肾脏纤维化中的作用可能为慢性肾脏纤维化治疗新策略提供实验依据和理论基础。

[1] Oettgen P.Regulation of Vascular Inflammation and Remodeling by ETS Factors[J] .Circ Res, 2006,99(11):1159-1166.

[2] Boor P, Ostendorf T, Floege J. Renal fibrosis: Novel insights into mechanisms and therapeutic targets[J]. Nat Rev Nephrol, 2010,6(11):643-656.

[3] Hahne J C,Okudueu A F,Sahin A,etal.The transcription factor ETS-1：its role in tumour development and strategies for its inhibition[J].Mini Rev Med Chem, 2008,8(11):1095-1105.

[4] Naito T, Razzaque M S, Nazneen A,etal.Renal expression of the ets-1 proto-oncogene during progression of rat crescentic glomerulonephritis[J]. J Am Soc Nephrol, 2000,11(12):2243-2255.

[5] Kanazawa A, Tsukada S, Sekine A,etal.Association of the gene encoding wingless-type mammary tumor virus integration-site family member 5b (wnt5b) with type 2 diabetes[J]. Am J Hum Genet, 2004,75(5):832-843.

[6] Puri S, Rodova M, Islam M R,etal.Ets factors regulate the polycystic kidney disease-1 promoter[J]. Biochem Biophys Res Commun, 2006,342(4):1005-1013.

[7] Liu D X, Liu X M, Su Y,etal.Renal expression of proto-oncogene ets-1 on matrix remodeling in experimental diabetic nephropathy[J].Acta Histochem, 2011,113(5):527-533.

[8] Mizui M, Isaka Y, Takabatake Y,etal.Transcription factor Ets-1 is essential formesangial matrix remodelin[J].Kidney Int, 2006,70(2):298-305.

[9] Naito T, Razzaque M S, Nazneen A,etal.Renal Expression of the Ets-1 Proto-oncogene during Progression of Rat Crescentic Glomerulonephritis[J].J Am Soc Nephrol, 2000,11(12):2243-2255.

[10] Raffetseder U, Wernert N, Ostendorf T,etal.Mesangial cell expression of proto-oncogene Ets-1 during progression of mesangioproliferative glomerulonephritis[J]. Kidney Int, 2004,66(2):622-632.

[11] Tanaka H, Terada Y, Kobayashi T,etal.Expression and function of Ets-1 during experimental acute renal failure in rats[J].J Am Soc Nephrol, 2004,15(12):3083-3092.

[12] Naito T, Razzaque M S, Nazneen A,etal.Renal expression of the Ets-1 proto-oncogene during progression of rat crescentic glomerulonephritis[J].J Am Soc Nephrol, 2000,11(12):2243-2255.

[13] Liu D X, Liu X M, Su Y,etal.Renal expression of proto-oncogene ets-1 on matrix remodeling in experimental diabetic nephropathy[J].Acta Histochem, 2011,113(5):527-533.

[14] 袁伟杰,王 轩.Ets-1在肾脏纤维化中的双向作用及其机制[J].中国中西医结合肾病杂志, 2011,12(12):1035-1037.

[15] Di J,Jiang L,Zhou Y,etal.Ets-1 targeted by microrna-221 regulates angiotensin II-induced renal fibroblast activation and fibrosis[J].Cell Physiol Biochem,2014,34(4):1063-1074.

[16] 陈亚坤,傅淑霞,蔡澎涛.E26转录因子1与肾间质纤维化[J].临床荟萃, 2009,24 (16 ):1468-1470.

(2015-07-07收稿 2015-08-24修回)

(责任编辑 尤伟杰)

Expression of Ets-1 in different banff classifying patients with chronic kidney disease

ZHAO Jiabi1and DI Jia2.

1.Department of Pathology, Changzhou No.2 People’s Hospital of Jiangsu Province, Changzhou 213003,China;2.Department of Nephrology, Changzhou No.1 People’s Hospital of Jiangsu Province, Changzhou 213003,China

Objective To investigate the expression of transcription factor Ets-1 in chronic renal fibrosis.Methods A total of 60 patients underwent renal biopsy from 1 May 2013 to 31 May 2015 at the Department of Nephrology in The Third Affiliated Hospital of Suzhow University were enrolled in the study and divided into four groups according to Banff scheme. Clinical and pathological characteristics of patients were investigated.The expression of transcription factor Ets-1 was assessed by immunohistochemical stainining.Results Compared with normal group,serum BUN, UA, iPTH and urineβ2-MG were significantly elevated in Banff Ⅰgroup. Serum BUN、SCr、UA、iPTH and urineβ2-MG were significantly elevated in Banff Ⅱgroup. MABP、BUN、SCr、UA、P、iPTH and urineβ2-MG were significantly elevated in Banff Ⅲgroup while Hb decreased. Percentages of global glomerulosclerosis,tubular atrophy, inflammatory cell infiltration and interstitial fibrosis significantly increased in Banff Ⅰ,Ⅱ,Ⅲgroups than in normal group. Immunohistochemical analysis showed that absorbance values of A were 0.05±0.01, 0.15±0.08, 0.32±0.07, and 0.54±0.12, respectively. Ets-1 were up-regulated in Banff Ⅱand Ⅲ groups.Conclusion Ets-1 is up-regulated in renal fibrosis and increases with Banff schems.

transcription factor；renal fibrosis

常州市卫生局指导性科技项目，WZ201009

赵家璧，本科学历，主治医师，E-mail:jiabizhao@sina.com

1.213003，江苏省常州市第二人民医院病理科；2.213003，江苏省常州市第一人民医院肾内科

狄 佳，E-mail:brightsea@163.com

R692.3