齐多拉米双夫定片微生物检查方法研究

吴中华

(安徽省生物研究所， 合肥 230088)

齐多拉米双夫定片微生物检查方法研究

吴中华

(安徽省生物研究所， 合肥 230088)

建立齐多拉米双夫定片微生物检查方法。方法取齐多拉米双夫定片，按《中国药典》2010版二部附录所载的“微生物限度检查法”项下方法试验，结果表明：采用薄膜过滤法测定细菌数，平皿法测定霉菌和酵母菌数，薄膜过滤法检查控制菌大肠埃希菌。

齐多拉米双夫定片；微生物限度检查法

齐多拉米双夫定片为复方制剂，主要成分为齐多夫定和拉米夫定，该制剂有协同抑菌作用，抗菌作用较单一成分增强，是治疗HIV感染较为理想药物。因药品的处方、剂型、生产工艺的不同，其微生物检验方法也不尽相同，本试验按照《中国药品检验标准操作规程》[1]和《中国药典》2010版二部附录要求，通过加入大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉5种试验菌，建立该产品的微生物检查方法。

1 试验材料

1.1 供试品

齐多拉米双夫定片(安徽贝克生物制药有限公司生产，批号110501、110502、110503，规格：拉米夫定150 mg/片和齐多夫定300 mg/片)。

1.2 培养基

玫瑰红钠琼脂培养基、营养琼脂培养基、胆盐乳糖培养基、改良马丁培养基、营养肉汤培养基均由北京三药科技开发公司生产，稀释剂为pH值7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲液；以上均参照产品说明书和《中国药典》2010年版配制。采用湿热灭菌法[2]灭菌。

1.3 菌种

金黄色葡萄糖球菌(Staphylococcusaureus)[CMCC(B)26003] 、大肠埃希菌(Escherichiacoli)[CMCC(B)44102]、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)[CMCC(B)63501]、白色念珠菌(Candidaalbicans)[CMCC(F)98001]、黑曲霉(Aspergillusniger)[CMCC(F)98003]均来自中国食品药品检定院。

2 方法与结果

2.1 菌液制备[3]按《中国药典》2010年版二部附录“微生物限度检查法”项下制备，制成50～100cfu/mL的菌悬液。菌株培养物均为第3代培养物。

2.2 供试液制备 取供试品10 g，加稀释液至100 mL，混匀，制成1∶10供试液，薄膜过滤法取1∶10供试液50 mL，离心3 min(500 r/min)，取上清液薄膜过滤。

2.3 回收率计算

试验组：取供试液，参照2.4和2.5方法计数。

菌液组：取各试验菌，与试验组相同操作(不加供试液)测定所加的试验菌数。

供试品对照组：取供试液，与试验组相同操作(不加试验菌)测定供试液本底菌数。

试验组菌落回收率(%)=(试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数)/菌液组平均菌落数×100%

2.4 细菌计数方法验证试验

平皿法取1∶10供试液1 mL加入无菌平皿，培养基稀释法取1∶10供试液1 mL分别等量分注[4]2个平皿和5个平皿，以上平皿分别加入大肠埃希菌、金黄色葡萄糖球菌 、枯草芽孢杆菌50～100 cfu，立即倾注营养琼脂培养基，各制备2个平行培养[3]计数；薄膜过滤法取离心上清液1 mL加入无菌薄膜过滤器(微孔滤膜直径50 mm，孔径不大于0.45 μm)中，加稀释剂300 mL(50 mL/次)进行冲洗过滤。在最后一次冲洗液中加入50～100 cfu上述试验菌，取出薄膜，正面朝上贴于营养琼脂培养基上培养，结果见表1。

表1 试验菌平均回收率

2.5 霉菌及酵母菌计数验证试验

取1∶10供试液1 mL加入无菌平皿，分别加入白色念珠菌、黑曲霉50～100 cfu，立即倾注玫瑰红钠琼脂培养基，各制备2个平行培养计数，结果见表1。

2.6 薄膜过滤法检查控制菌大肠埃希菌

取离心上清液10 mL，参照2.4薄膜过滤，取出薄膜，加入100 mL胆盐乳糖培养基中，按控制菌大肠埃希菌检查方法检查[3]，结果见表2。

以上试验独立平行3次。

表2 控制菌大肠埃希菌测试结果

表中“+”表示检出控制菌；“-”表示未检出控制菌。

3 讨论

从表1可以看出：在细菌、霉菌和酵母菌数检查方法试验中，平皿法对白色念珠菌和黑曲霉的回收率均高于70%[3]；薄膜过滤法对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的回收率高于70%[3]。从表2可以看出控制菌大肠埃希菌采用薄膜过滤法试验组和阳性对照组检出，阴性对照组未检出，符合《中国药典》要求。

试验结论：齐多拉米双夫定片微生物限度检查方法，细菌和控制菌大肠埃希菌可采用薄膜过滤法检查，而霉菌和酵母菌则应采用平皿法检查。

[1]中国药品生物制品检定所，微生物限度检查法[M] 《中国药品检验标准操作规程》，北京，中国医药科技出版社，2010，356-358.

[2]国家药典委员会， 灭菌法[M]，中华人民共和国药典(二部)，北京，中国医药科技出版社，2010，附录190.

[3]国家药典委员会， 微生物限度检查法[M]，中华人民共和国药典(二部)，北京，中国医药科技出版社，2010，附录 107-113.

[4]国家食品药品监督管理局药品认证中心， 微生物检查[M]//质量控制实验室与物料系统，北京，中国医药科技出版社， 2011： 244.

Methodological study on microbial limit test of Zidovudine and Lamivudine tablets

WU Zhong-hua

(Biological Institute of Anhui Province， Hefei 230088， China)

According to the Chinese pharmacopieia(2010 Edition), an accurate method for microbial limit test of Zidovudine and Lamivudine tablets was established in this study. Membrane filtration and/or direct plate culture were taken for counting bacteria, mold and yeast usingE.colias the controls.

Zidovudine and Lamivudine tablets; microbial limit test

2015-01-14；

2015-02-16

吴中华，执业药师，主要从事药品开发，E-mail:1291139562@qq.com。

R96

B

2095-1736(2015)05-0099-02

doi∶10.3969/j.issn.2095-1736.2015.05.099