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肌细胞增强因子2A基因P279L变异与冠心病的关系*

2015-03-22西安市中心医院心内科西安710003

陕西医学杂志 2015年2期
关键词:肌细胞等位基因多态性

西安市中心医院心内科(西安710003)

张 涛 慕玉东△ 马前峰

肌细胞增强因子2A基因P279L变异与冠心病的关系*

西安市中心医院心内科(西安710003)

张 涛 慕玉东△马前峰

目的:探讨肌细胞增强因子2A基因P279L变异是否与冠心病相关。方法:选择西北地区汉族人385例,采用酚氯法提取全基因组DNA,应用聚合酶链式反应、限制性内切酶反应体系结合测序的方法检测MEF2A基因多态性。结果:冠心病组L、P等位基因的频率分别为16.53%和83.47%;对照组L、P等位基因的频率分别为5.48%和94.52%,MEF2A-P279L基因型在冠心病组和对照组的分布存在显著性的差异(P<0.01),而且L等位基因的分布频率在冠心病组显著高于对照组(P<0.01)。结论:MEF2A-P279L基因型在冠心病组和对照组的分布有显著性差异,与冠状动脉病变的严重程度显著相关,L等位基因的携带者冠心病发病率显著高于非携带者,而且冠脉的病变更为严重。

2003年Wang等[1]发现了人类肌细胞增强因子2(Myocyte enhancer factor 2A,MEF2A)编码的基因存在突变,目前国内对MEF2A-P279L的研究报道较少,为了明确MEF2A-P279L基因多态性对我国人群冠心病的影响,及MEF2A-P279L基因多态性的种族差异。本研究采用酚氯法提取全基因组DNA,应用聚合酶链式反应、限制性内切酶反应体系结合测序的方法检测385例西北地区汉族人的MEF2A基因多态性。

对象与方法

1 对 象 收集我科2011年1月至2012年12月期间行冠状动脉造影的住院患者,共385例。根据结果分为冠心病组239例,男152例,女87例,年龄55.6±10.3岁;对照组146例,男83例,女63例,年龄52.6±11.2岁;均为汉族人。两组在性别和年龄之间的差异无统计学意义;入选的研究病例均排除肝肾功能不全、肿瘤等疾病,而且所研究的病例之间无血缘关系。

2 方 法 ①标本收集:于入院次日清晨空腹采取20ml静脉血,离心后将上清液及血细胞分装于血浆试管和血细胞试管,于-80℃低温冰箱保存备用。②DNA的提取:采用酚氯法提取DNA,即血细胞经蛋白酶消化、采用苯酚和氯仿提取,然后采用异丙醇沉淀提取物等方法。③DNA的标本分析:采用分光光度计和琼脂糖电泳对已提取的DNA标本进行纯度和浓度的检测。用OD260(nm)和OD280(nm)分别来表示DNA和蛋白质的吸光度,用OD260/OD280的比值来表示DNA纯度。对于DNA片段是否降解可以采用琼脂糖电泳的方法进行识别。④PCR扩增MEF2A目的基因:PCR条件:反应体系总体积15μl,循环参数:94℃预变性4min,94℃变性1min,62℃退火30s,72℃延伸45s,共35个循环,最后72℃延伸7min。由陕西博森生物公司合成引物,引物如下:上游5’CACTTTATTGAATGATATTTTTCCCC 3’;下游5’AGGCATCATGCCCTTGCTTTA 3’。⑤RFLP检测MEF2A-P279L基因多态性:Dra I限制性内切酶1 μl(2.5 u/μl),内切酶10×NEbuffer 2μl,PCR产物8-10μl,加去离子水致反应体系20μl。将反应体系置于37℃水浴箱过夜16~24h。采用非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色对酶切产物进行分型。

3 统计学处理 所有数据经SPSS 13.0统计软件进行统计分析。计数和计量资料分别用频数值及均数±标准差表示。采用χ2检验对等位基因频率及基因型频率进行差异性比较,P<0.05为差异有显著性。

结 果

1 MEF2A-P279L基因多态性的分布 见表1、2。冠心病组L、P等位基因的频率分别为16.53%和83.47%,对照组的L、P等位基因的频率分别为5.48%和94.52%,两组间等位基因分布频率存在显著性差异,冠心病组的L等位基因分布频率显著高于对照组(P<0.01)

表1 MEF2A-P279L多态性的分布

表2 MEF2A-P279L等位基因频数的分布

2 MEF2A-P279L与冠脉病变支数的相关性 见表3、4。MEF2A-P279L不同基因型与显著性冠脉病变以及严重程度存在显著性差异(P<0.01);携带L等位基因的冠脉病变程度显著较P等位基因的严重(P<0.01)。

表3 MEF2A-P279L基因型与冠脉病变支数的相关性

表4 MEF2A-P279L等位基因频数与冠脉病变支数的相关性

讨 论

自2003年研究发现人类肌细胞增强因子2基因的突变影响并降低了MEF2A因子的转录以及蛋白质的合成,从而对血管内皮进行破坏,促进血管内皮脂质的沉积以及血管炎性介质的聚集,最终启动了动脉粥样硬化的病理生理过程。因此,MEF2A被认为是第一个被发现的冠心病的致病基因[1]。

本研究结果显示:MEF2A-P279L基因型的分布在冠心病组和对照组存在显著性差异(P<0.01)。说明MEF2A-P279L在我国西北地区汉族人群中分布存在多态性,而且是增加冠心病易患的遗传因素。文献报道[2]:P279L等位基因在西班牙人群中存在突变情况,病例组中P279L突变基因携带者的频率明显高于对照组,在西班牙人群中该突变型可能与冠心病、心肌梗死升高的发病风险相关,这与我们的研究结果相一致。但Kajimoto等[3]以及Weng等[4]研究未发现在病例组中P279L存在缺失突变,从而提出MEF2A基因的这种变异应该是一种极罕见的多态,而不是所谓的致病缺失突变。李婧等[5]对冠心病组和对照组人群中的MEF2A基因外显子进行扫描时,未发现P279L碱基突变。这些研究结果与我们的研究结果不一致,这些差异可能与不同地域、不同种群的MEF2A基因多态性分布不同以及对冠脉病变严重程度的影响也不同。

本研究结果揭示了MEF2A-279P/L基因型在西北地区汉族人群中的分布情况、及其与冠心病和冠脉病变严重程度的关系,从基因水平对冠心病进行早期预防、早期诊断,为治疗冠心病提供新的依据。

[1] Wang Q,Fan C,Topol SE,etal.Mutation of MEF2A in an inherited disorder with features of coronary artery disease[J].Science,2003,302(5650):1578-1581.

[2] Gonzalez P,Garcia-Castro M,Reguero JR,etal.The Pr0279Leu variant in the transcription factor MEF2A is associated with myocardial infarction[J].Med Genet,2006,43(2):167-169.

[3] Kajimoto K,Shioji K,Tago N,etal.Assessment of MEF2A mutations in Myocardial infarction in Japanese patient[J].Circ,2005,69:1192-1195.

[4] Weng L,Kavaslar N,Ustaszewska A,etal.Lack of MEF2A mutations in coronary artery disease[J].Clin Invest,2005,115(4):1016-1020.

[5] 李 婧,杨钧国,陈汉想,等.冠状动脉粥样硬化性心脏病新致病基因MEF2A第7外显子突变的检测[J].中国临床康复杂志,2006,10(24):72-74.

(收稿:2014-09-16)

Association of MEF2A-P279L single nucleotide polymorphism (SNP) with CHD

The Central Hospital of Xi’an (Xi’an 710003)

Zhang Tao Mu Yudong Ma Qianfeng

Objectives:To investigate the relationship between the distribution of Myocyte enhancer factor 2A (MEF2A) gene P279L polymorphism and CHD in Han nationality in Chinese North -Western area. Methods:Three hundred and eighty five Han ethnic subjects .DNA was extracted by proteinase K digestion , phenol and chloroform extraction as well as isopropanol precipitation. The polymerase chain reaction(PCR)-restriction fragment length polymorphisms (RFLP) in conjunction with sequencing were employed to test the single nucleotide polymorphisms (SNPs) in Myocyte enhancer factor 2A (MEF2A). Results:Lallelic frequency was significantly higher that in CHD group than that in control group,CHD group 16.53%,control group 5.48% (P<0.01),Lallele was related with more severity of atherosclerosis in the coronary artery than P allele(P<0.01).Conclusion:There is significantly statistical difference of distribution frequency and severity of atherosclerosis in the coronary artery of three genotypes of MEF2A-P279L polymorphism in CHD and control group, but also L allele is related with more morbility of CHD and severity of atherosclerosis in the coronary artery.

Coronary disease Gene expression @MEF2A-P279L

*西安市科技计划基金项目(2011HM1115)

△陕西省肿瘤医院检验科

冠状动脉疾病 基因表达 @肌细胞增强因子2A基因

R589.2

A

10.3969/j.issn.1000-7377.2015.02.011

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