泽丹冲剂对盆腔炎性大鼠子宫TGF-β1、Smad3的影响研究*

谷 风 陶红星 沈祖泓 曾远强 罗彩萍 张敏玲 苗久旺

广州中医药大学附属清远中医院(清远 511500)

泽丹冲剂对盆腔炎性大鼠子宫TGF-β1、Smad3的影响研究*

谷 风 陶红星△沈祖泓 曾远强 罗彩萍 张敏玲 苗久旺▲

广州中医药大学附属清远中医院(清远 511500)

目的：研究泽丹冲剂对慢性盆腔炎大鼠子宫组织TGF-β1、Smad3表达的影响，阐明以利湿化瘀法为主的泽丹冲剂作用机制。方法：大鼠双侧宫腔内注射大肠杆菌混悬液(浓度约为6×106)0.2mL建立慢性盆腔炎大鼠模型。造模成功后，随机分成泽丹冲剂高、中(8g·kg、4g·kg)剂量组，妇乐颗粒组(2.5 g·kg)，模型组和正常组。灌胃给药21d后，采用Western Blot法检测大鼠子宫组织TGF-β1、Smad3表达。结果：与模型组比较，泽中、高剂量组，妇乐组子宫组织TGF-β1、Smad3表达均明显降低(P<0.05)，但泽中、高剂量组优于妇乐组(P<0.05)。结论：泽丹冲剂通过降低TGF-β1、Smad3的异常高表达，减轻慢性盆腔炎大鼠子宫组织的纤维化及粘连，因而对慢性盆腔炎具有良好的治疗作用。

慢性盆腔炎易反复发作，迁延致包块形成、不孕、月经不调等，严重影响患者的生活质量[1]。前期的临床研究及部分实验研究表明[2-5]，以利湿化瘀法为的泽丹冲剂可调节慢性盆腔炎患者血清-CRP、SOD、MDA等异常表达，具有良好的临床疗效及抗组织氧化、改善局部血液循环等作用，因此，本研究旨在前期基础上，进一步探讨泽丹冲剂对慢性盆腔炎大鼠模型治疗作用的影响，以期为临床研究及新药的开发研制进一步提供更多的、更深层次的实验理论依据。

1 材料与方法

1.1 材 料 SD雌性大鼠55只、SPF级，体重(200±20)g，购自广州中医药大学动物实验中心 [许可证号SYKK(粤)2008-0092]。泽丹冲剂由泽泻、桃仁、丹参、当归等组成，上述药物按处方量投料，加10倍水煎煮，每次3h，共2次，煎煮液合并后，浓缩、真空干燥，得干浸膏备用(由清远市中医院制剂室提供)；妇乐颗粒(江西南昌济生制药厂生产，每袋6g)，用蒸馏水配成0.13mg/mL混悬液，40C下保存，使用时充分摇匀[6]。

1.2 方 法

1.2.1 造模方法：用浓度为10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠(0.3mL/100g)，无菌条件下取大鼠下腹正中切口约0.8～1.0cm，暴露子宫，用4号针头分别向双侧宫腔内注射大肠杆菌混悬液(浓度约为6×106)0.2mL，注毕，分层关腹，消毒术区，正常喂养[6]。

1.2.2 分组及处理：SD雌性大鼠55只适应性喂养1周，采用随机数字表法抽取10只为正常组，其余45只造模后随机分为模型组(15只、其中随机抽取5只做模型验证)、泽丹冲剂高剂量组(泽高组)(10只)、泽丹冲剂中剂量组(泽中组)(10只)、妇乐颗粒组(妇乐组)(10只)。造模成功后，第8d开始灌胃给药，药物剂量按照人与动物公斤体重的等效剂量比值进行折算给药[7]。泽高组、泽中组予泽丹冲剂(8g·kg、4g·kg)，妇乐组予妇乐颗粒混悬液(2.5 g·kg)，正常组和模型组予等体积生理盐水，1d1次 ，连续 21d[5]。

1.2.3 指标检测：给药后第22d早上禁食，用10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠，取大鼠子宫组织，采用Western blot法检测子宫组织TGF-β1、Smad3的表达。

1.2.4 病理判定标准[8-9]：无炎性细胞浸润，为0分(+)；内膜中见少量炎性细胞浸润，为1分(++)；内膜中见大量炎性细胞浸润，且腺上皮轻度增生、极性排列规则，为2分(+++)。采用双盲法，每张切片由两位病理医师分別记分。

2 结 果

2.1 各组大鼠子宫组织病理变化 2.1.1大体观察：正常组：子宫大小、形态正常，浆膜无明显充血及水肿，与盆腔周围组织无粘连；模型组：子宫明显肿胀、粘膜充血及水肿，多数宫腔迂曲肿胀，末端球状膨大，切面管壁变薄，管腔内可见清亮液体；泽高组：子宫无明显充血，与盆腔组织粘连明显减轻，少数有轻度积液；泽中组：子宫肿胀、充血基本消失，无积液，与盆腔周围组织粘连显著减轻；妇乐组：子宫炎性充血部分消失，与周围组织轻度粘连，子宫形态部分恢复正常[6]。

2.1.2子宫组织HE染色病理评分：与模型组比较，泽中、高组，妇乐组子宫组织病理评分均有统计学意义(P<0.05)，其中泽中组具有显著统计学意义(P<0.01)。提示泽中、高组均能减轻大鼠子宫内膜炎症细胞浸润，减轻充血及肿胀[6](见表1)。

表1 慢性盆腔炎大鼠子宫组织形态学的改变

注：与模型组相比，△P<0.05，▲P<0.01

2.1.3 各组大鼠子宫组织含TGF-β1、Smad3的表达(见表2)。

表2 各组大鼠子宫组织TGF-β1、Smad3的表达结果±s)

注：与模型组比较，△P<0.05；与泽中组比较，◇P<0.05

结果显示：模型组TGF-β1表达显著高于其它各组(P<0.05)；泽中组与正常组比较，无显著性差异(P>0.05)；妇乐组与泽高组比较，无显著性差异(P>0.05)；与泽中组比较，有显著性差异(P<0.05)。

结果显示：模型组Smad3表达显著高于其它各组(P<0.05)；泽中组与正常组含量相当，无显著性差异(P>0.05)；妇乐组低于泽高组，但无显著性差异(P>0.05)；泽高组明显高于泽中组，有差异(P<0.05)。

3 讨 论 慢性盆腔炎易导致盆腔粘连或输卵管阻塞，对女性生殖健康造成严重影响。研究表明，转化生长因子β1(TGF-β1)及其信号通路分子Smad3在调控胶原代谢的细胞因子网络失衡中，具有非常重要的作用[10]，TGF-β1的促纤维化作用可能主要通过Smad3途径诱导结缔组织生长因子(CTGF)表达来完成[11]。

研究表明，TGF-β是调节组织炎症和修复的重要细胞因子。适量TGF-β1经局部或静脉给予，能够促进因糖皮质激素影响等原因难以愈合的伤口正常愈合[12]。而组织慢性损伤后修复过度的一种病理结局就是纤维化的形成。虽然TGF-β1在正常组织受损后修复中，具有非常重要的作用，但其合成与降解失衡或过多会导致组织纤维化。大鼠实验表明，连续被注射TGF-β1可导致肾、肝等器官及注射部位组织纤维化的发生。此外， TGF-β1的持续合成释放使ECM进行性沉积，从而致组织纤维化和瘢痕的形成[13-14]。而TGF-β1是目前已知的对胶原合成最直接和有效的刺激剂，其激活TGF-β/Smad信号传导通路，主要是通过与其靶细胞(主要是成纤维细胞)上的受体结合而使胶原过度沉积导致纤维化的发生发展[15]。

Smads 蛋白是 TGF-β 下游信号转导和调节分子，磷酸化的 Smad2 和 Smad3 与Smad4 形成 Co-Smads 入核调控靶基因转录，从而诱导纤维化改变[16]。而Smad3是TGF-β和激活素(Activin)信号转导通路中共同的关键信号蛋白[17]。特异性阻断Smad3蛋白表达，有可能同时解除 TGF-β和激活素的作用，起到高效抗肝纤维化作用。

以利湿化瘀为主的泽丹冲剂中蒲公英为君药，具有消散痈肿、清热解毒之功效；辅以败酱草，因其苦辛凉微寒而清热祛瘀、解毒止痛、排脓消肿；车前子、泽泻能淡渗利湿、化瘀止痛；丹参善调妇女经脉而具有活血祛瘀之功效；三棱、莪术乃破血行气之品；与丹参相伍治瘀滞腹痛；延胡索行气活血、化瘀止痛；柴胡配香附疏肝止痛、理气调经[15]。实验研究结果表明：与模型组比较，各治疗组大鼠子宫组织中的TGF-β1、Smad3表达明显降低，说明泽丹冲剂及妇乐颗粒均可有效地降低TGF-β1、Smad3的异常表达，但泽丹高、中剂量组疗效优于妇乐组(P<0.05)。

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(收稿2014-09-29；修回2014-10-17)

Effects of Zedan infusion on Smad3 and TGF-β1 in rats with chronic pelvic inflammatory disease

Qingyuan Hospital of TCM Affiliated to Guangzhou University of TCM(Qingyuan 511500)

Gu Feng Tao Hongxing Shen Zuhong et al

Objective: To observe the effects of Zedan Infusion on Smad3 and TGF-β1 in the rats with Chronic pelvic inflammatory disease ,so as to discuss its mechanism.Methods: The rat model of chronic pelvic inflammatory disease was established by injecting coli suspension (concentration of about 6×106) 0.2ml to the bilateral intrauterine.After the modeling,the rats were randomly divided into Zedan Infusion high and medium (8g·kg, 4g·kg) dose group, Fule particle group (2.5g·kg), model group and the normal group.After oral administration 21d, the expression of TGF-β1 and Smad3 was assayed by the Western Blot. Results :Compared with the model group,the expression of TGF-β1 and Smad3 was significantly lower (P<0.05), which was better in Zedan infusion high and medium dose group than in Fule group (P<0.05).Conclusion: Zedan infusion can reduce the abnormal expressions of TGF-β1 and Smad3，has anti-tissue adhesions and fibrosis effects，thus it has good clinical efficacy on Chronic pelvic inflammatory disease．

Pelvic Inflammatory Disease/traditional Chinese medicine therapy Animal experimentation Rats @Zedan infusion

*广东省清远市科技局博士项目(2013A012)

盆腔炎性疾病/中医药疗法 动物实验 大鼠 @泽丹冲剂

R711.33

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.01.057

△深圳市南山区人民医院(深圳 518000)

▲山东中医药高等专科学校(烟台 265200)