儿童脓毒症T细胞亚群选择性缺失与血清降钙素原的关系及意义

涂丹娜，周小勤，许 慧，夏 治

（湖北省妇幼保健院儿内科，武汉430070）

儿童脓毒症T细胞亚群选择性缺失与血清降钙素原的关系及意义

涂丹娜，周小勤，许 慧，夏 治

（湖北省妇幼保健院儿内科，武汉430070）

目的探讨脓毒症患儿血清降钙素原（PCT）水平与其T细胞亚群选择性缺失的关系，并阐明二者在早期判断儿童脓毒症严重程度上的意义。方法依据2005年国际儿科脓毒症联席会议标准及小儿危重病例评分法（PCIS）将2013年6月至2014年3月该科收治的70例脓毒症患儿分为非危重组37例（PCIS＞80分）和危重组33例（PCIS≤80分）。另同期选择30例健康儿童作为健康对照组。采用流式细胞仪检测各组儿童T细胞亚群，应用免疫发光分析法检测儿童血清PCT水平，比较PCT水平与T细胞亚群及其选择性缺失的关系。分析血清PCT水平与T细胞亚群选择性缺失在早期评估儿童脓毒症严重程度上的意义。结果与健康对照组比较，非危重组出现CD3+T、CD4+T表达率及CD4+T/CD8+T比值下降；与非危重组比较，危重组CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD56+T表达率及CD4+T/CD8+T比值均下降，差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）。脓毒症患儿血清PCT水平与CD3+T、CD4+T、CD19+T表达率及CD4+T/CD8+T校正值呈负相关（P＜0.05或0.01）；PCT水平和CD19+T表达率与患儿PCIS评分呈负相关 （P＜0.01），而CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD56+T表达率及CD4+T/CD8+T校正值与PCIS评分呈正相关（P＜0.05或0.01）。结论脓毒症患儿T细胞亚群呈选择性缺失，CD4+/CD8+失衡程度与血清PCT水平呈负相关，二者与儿童脓毒症的严重程度密切相关，可作为早期判断脓毒症严重程度的指标。

脓毒症； T淋巴细胞亚群； 降钙素； 儿童

脓毒症是指由感染引起的全身炎症反应综合征[1]，其易发展为脓毒性休克而危及生命，已成为人类健康的严重威胁。尤其是儿童脓毒症发病率一直居高不下，且起病急，病情进展快，病死率高达40%～60%[2]，为儿科危重症领域难题之一。为此，本研究通过探讨脓毒症儿童血清降钙素原（PCT）水平与其T细胞亚群选择性缺失的关系，以阐明二者在早期判断儿童脓毒症严重程度上的意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2013年6月至2014年3月入住本科的年龄29 d至14岁、按照2005年1月国际儿科脓毒症联席会议制订的小儿脓毒症及严重脓毒症诊断标准[3]筛选出脓毒症/严重脓毒症患儿70例。依据小儿危重病例评分法[4]（PCIS）将患儿分为非危重组 37例（PCIS＞80分）和危重组33例（PCIS≤80分）。另同期选择30例健康儿童作为健康对照组。

1.2 方法 所有患儿均在住院首日采集外周静脉血5 mL，其中3 mL血标本用乙二胺四乙酸（EDTA）抗凝，采集后6 h内采用流式细胞仪检测各组儿童CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD56+T、CD19+T及CD4+T/CD8+T比值，并使用计算式[（CD4+T实际测量值/同年龄组CD4+T正常值）/（CD8+T实际测量值/同年龄组CD8+T正常值）]对CD4+T/CD8+T比值进行校正以消除年龄差异带来的影响；2 mL血标本应用免疫发光分析法检测患儿血清PCT水平，比较PCT水平与CD4+T/CD8+T校正值的关系。并分析血清PCT水平与T细胞亚群选择性缺失在早期评估儿童脓毒症严重程度上的意义。

1.3 统计学处理 应用SPSS17.0统计软件对数据进行分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验；连续相关变量采用Pearson检验；非参数统计采用Spearman检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

表1 各组T细胞亚群检测结果比较（±s）

表1 各组T细胞亚群检测结果比较（±s）

注：与健康对照组比较，aP＜0.01；与非危重组比较，bP＜0.01，cP＜0.05。

组别健康对照组非危重组危重组n CD3+T（%） CD4+T（%） CD8+T（%） CD19+T（%） CD56+T（%） CD4+T/CD8+T比值 CD4+T/CD8+T校正值30 37 33 64.99±6.03 59.64±7.72a39.54±12.97b38.99±6.61 30.60±7.85a18.04±6.44b21.90±5.45 23.87±4.72 18.56±7.12b22.86±5.53 25.65±9.41 49.45±15.94 8.56±4.10 8.05±4.11 5.88±4.62c1.92±0.67 1.35±0.49a1.05±0.39b1.00±0.00 0.89±0.15a0.56±0.20b

2 结 果

2.1 各组T细胞亚群检测结果比较 与健康对照组比较，非危重组CD3+T、CD4+T表达率，CD4+T/CD8+T比值及其校正值均显著下降，差异有统计学意义（P＜0.01），而CD8+T表达率下降不明显，差异无统计学意义（P＞0.05）；与非危重组比较，危重组CD3+T、CD4+T、CD8+T表达率，CD4+T/CD8+T比值及其校正值下降更为明显，且其CD56+T表达率也下降，差异均有统计学意义（P＜0.05或0.01）。见表1。

2.2 脓毒症/严重脓毒症患儿血清PCT水平与T细胞亚群的关系 脓毒症/严重脓毒症患儿血清PCT水平与CD3+T、CD4+T、CD19+T表达率及CD4+T/CD8+T校正值呈负相关（P＜0.05或0.01）。见表2。

表2 脓毒症/严重脓毒症患儿血清PCT水平与T细胞亚群的关系

2.3 脓毒症/严重脓毒症患儿血清PCT水平、T细胞亚群与PCIS评分的关系 脓毒症/严重脓毒症患儿血清PCT水平、CD19+T表达率与PCIS评分呈负相关（P＜0.01），而CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD56+T表达率及CD4+T/CD8+T校正值与PCIS评分呈正相关（P＜0.05或0.01）。见表3。

表3 脓毒症/严重脓毒症患儿血清PCT水平、T细胞亚群与PCIS评分的关系

3 讨 论

儿童脓毒症是儿科重症监护病房（PICU）的常见疾病。从脓毒症发展到脓毒症休克有时只需短短24h左右。尽管采取早期积极抗感染、液体复苏及重要脏器功能支持等治疗措施，儿童严重脓毒症、脓毒性休克病死率仍较高，是PICU患儿死亡的主要原因之一[5]。因此，早期识别严重脓毒症、脓毒性休克，把握“黄金时间”，及早启动有效干预，是降低病死率、改善预后的关键。

儿童脓毒症发病机制复杂，多项研究表明其发生、发展是病原入侵、促/抗炎性细胞因子平衡失调、肠道细菌易位、免疫抑制、相关信号通路激活等综合作用的结果[6-7]。其中促/抗炎性细胞因子平衡失调、免疫抑制及其调节治疗是目前研究的热点。T淋巴细胞介导的细胞免疫在这一过程中起着重要的作用。在受到抗原刺激后，T淋巴细胞分化、增殖、合成和分泌一系列细胞因子，产生特异性的细胞免疫，其免疫调节作用主要通过CD4+T、CD8+T细胞完成，正常情况下CD4+T/CD8+T比值维持动态平衡，以维持机体免疫功能的稳定。脓毒症早期，T淋巴细胞亚群选择性缺失将促进病情进展[8]。本研究结果显示，非危重组患儿CD3+T、CD4+T表达率及CD4+T/CD8+T校正值均比同年龄段的健康儿童明显下降，而在严重脓毒症患儿中，上述3项指标进一步下降，且CD8+T表达率也下降，说明脓毒症患儿中T细胞免疫应答效应减弱，而病情严重的脓毒症患儿抑制性T细胞（Ts）细胞也不能发挥其细胞介导的细胞毒作用，机体的细胞免疫功能紊乱进一步加重，导致疾病进展。

此外，严重脓毒症患儿CD56+T表达率出明显下降，表明严重脓毒症患儿在清除病原和杀伤受感染细胞的过程中消耗了大量的自然杀伤（NK）细胞。NK细胞是天然免疫系统中的重要细胞，其功能包括控制病毒和细菌感染，调节体内环境稳定，产生细胞因子，对细菌具有杀伤效应，并建立先天性免疫和获得性免疫之间的联系[9]。本研究中严重脓毒症患儿体内NK细胞大量凋亡，说明患儿免疫功能低下，不利于机体清除致病原和感染的细胞，导致感染得以持续或二次感染的发生。

传统的炎性标志物——C反应蛋白，在细菌、病毒感染，创伤等情况下均可升高，在感染控制数天后仍可维持较高水平，而在机体免疫功能紊乱时，其升高水平不一定能真实地反映脓毒症的严重程度。PCT是无激素活性的降钙素前肽物质[10]，作为新型炎症标志物，具有早期、特异、敏感的特性，优于传统的炎症标志物，可用于鉴别细菌感染、指导抗菌药物应用及评估病情及预后。多项研究表明，PCT在全身严重感染2～4 h时即可检测到，8 h达到高峰，且PCT升高幅度与炎性反应的严重程度相关，动态监测PCT水平更有助于对病情的评估。美国重症医学会和美国感染病学会推荐将PCT作为脓毒症的辅助诊断工具[11]。本研究发现，脓毒症/严重脓毒症患儿PCT水平越高，感染程度越严重，其T细胞亚群选择性缺失越显著，表明细胞免疫抑制有利于感染炎症的进展。

然而，PCT因为不能有效区分细菌性还是非细菌性感染，在脓毒症早期的诊断地位受到了挑战。PCIS作为一种客观、简单的评分法，经多次大规模临床验证表明，可以准确评价患儿不同时间的危重程度[12]。本研究结果显示，脓毒症/严重脓毒症患儿血清PCT水平及T细胞亚群缺失程度与PCIS评分密切相关，PCIS评分越低，PCT水平越高，且免疫抑制越显著。因此，作者认为，PCT水平升高结合T细胞亚群选择性缺失程度及PCIS评分对早期判断脓毒症患儿病情预后的价值更有意义。

当然，任何一种检测方法所得到的结果并不都是绝对的，各项检测指标经常会受到多种因素的影响。因此，临床医生更应该结合患儿症状、体征及检测结果进行综合判断、评估，动态观察、监测、参数的变化，从而采取合理的诊疗方案。早期识别脓毒症/严重脓毒症仍然任重而道远，需要不断总结，从而制订更加切实可行的筛查方案。

[1]高戈，冯喆，常志刚，等.2012国际严重脓毒症及脓毒性休克诊疗指南[J].中华危重病急救医学，2013，25（8）：501-505.

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[10]汪芸，李尔珍.降钙素原在临床的应用研究进展[J].实用儿科临床杂志，2007，22（18）：1427-1429.

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[12]陆文峰.几种重症评分在儿科临床的应用前景[J].国际儿科学杂志，2015，42（1）：94-97.

Correlation and significance of selective defects of T cell subgroup and serum procalcitonin concentration in children with sepsis

Tu Danna，Zhou Xiaoqin，Xu Hui，Xia Zhi
（Department of Pediatrics，Maternal and Child Health Hospital of Hubei Province，Wuhan 430070，China）

ObjectiveTo approach the correlation of selective defects of T cell subgroups and serum procalcitonin concentration in children with sepsis，and set forth its significance in judgment of the severity degree of sepsis in children at early phase.MethodsIn line with the standard of International Pediatrics Sepsis Consensus Conference published in 2005 and pediatric critical cases scoring method（PCIS），a total of 70 children with sepsis admitted by department of internal pediatrics of Maternal and Child Health Hospital of HuBei Province from June 2013 to March 2014 were divided into the non-critical group（n=37，PCIS＞80 points）and the critical group（n=33，PCIS≤80 points）.Additionally，another 30 healthy children at the same period were the healthy control group.It adopted flow cytometry（FCM）to detect their T-lymphocyte subgroups of each group and immunoluminescence analysis to detect serum PCT concentration of children，then contrasting their correlation.It was analyzed the significance of PCT concentration and selective defects of T cell subgroups in the judgment of the severity of sepsis in children in the early stage.ResultsCompared with the healthy control group，the percentages of CD3+T，CD4+T and ratio of CD4+T/CD8+T in the non-critical group were decreased.Compared to the non-critical group，all the value of CD3+T，CD4+T，CD8+T，CD56+T and ratios of CD4+T/CD8+T，whose difference had statistical significance（P＜0.05 or 0.01）.There was a linear negative correlation between the expression rate of CD3+T，CD4+T，CD19+T，the adjusted value of ratio of CD4+T/CD8+T and serum PCT concentration（P＜0.05 or 0.01）.PCT concentration and expression rate of CD19+T demenstrated a negative correlation with PCIS of children patients，however，the expression rate of CD3+T，CD4+T，CD8+T，CD56+T and the adjusted value of ratio of CD4+T/CD8+T were positively correlated with PCIS（P＜0.05 or 0.01）.ConclusionT cell subgroups in children with sepsis showed selective defects，the imbalance of CD4+T/CD8+T was negatively correlated with serum PCT concentration，both of which had a close relation with sepsis in children，being indicators judging the severity degree of sepsis in children in the early stage.

Sepsis； T-lymphocyte subsets； Calcitonin； Child

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.08.011

：A

：1009-5519（2015）08-1151-03

2015-01-21）

涂丹娜（1979-），女，湖北武汉人，博士研究生，主治医师，主要从事儿童感染与免疫方面的研究；E-mail：tdn_tutu@163.com。

周小勤（E-mail：62724838@163.com）。