梅毒血清学试验检测潜伏妊娠梅毒的临床价值

2015-03-22范海燕

现代医药卫生 2015年7期

关键词：梅毒阳性率孕妇

范海燕

（安徽医科大学附属巢湖医院，安徽巢湖238000）

梅毒血清学试验检测潜伏妊娠梅毒的临床价值

范海燕

（安徽医科大学附属巢湖医院，安徽巢湖238000）

目的探究梅毒血清学试验检测潜伏妊娠梅毒的临床价值。方法选择2012年1月至2014年3月于该院进行围产保健的460例孕妇作为研究对象，分别对孕妇的血清进梅毒螺旋体颗粒凝聚试验（TPPA）、聚合酶链反应（PRC）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）、酶联免疫吸附试验（ELISA）、胶体金免疫层析试验（GICA）5种血清试验，回顾性分析试验过程及结果，以TPPA和PCR结果均为阳性最终判定为阳性，统计TRUST、ELISA和GIGA检测的阳性率。结果460例孕妇的血清学试验中，共检测出潜伏妊娠梅毒患者21例，检出率为4.6%；ELISA法检出潜伏妊娠梅毒患者19例，符合率为90.6%，高于TRUST的71.4%和GICA的81.0%，差异均有统计学意义（P＜0.05）；ELISA、TRUST和GICA诊断特异度都在95%以上，阴性预测值都高达98%以上，且ELISA的阳性似然比最高，而阴性似然比最低。结论在孕妇进行临床妊娠梅毒筛查时，ELISA检测潜伏妊娠梅毒阳性率较高，但3种方法的临床效能各有所长，选择ELISA配合TRUST、GICA可大大提高妊娠梅毒检出率，节约检测成本，阻断梅毒在母婴之间的垂直传播，为临床潜伏妊娠梅毒的检测提供了参考依据。

梅毒；梅毒血清诊断；妊娠并发症

梅毒是一种性传播疾病，由梅毒螺旋体引发，发病范围为全身，其传播途径不仅可以通过性接触进行水平传播，也可通过妊娠的方式在母婴之间垂直传播[1]。梅毒对妊娠的感染非常严重，可致孕妇早产、胎儿水肿、宫内生长受限，甚至流产或死产，存活下来的婴儿也会并发严重的后遗症，成为先天梅毒儿。所以，为避免悲剧发生，做好孕妇的产前检查和早期治疗是阻断胎传梅毒发生的有效手段。但近几年的研究发现，妊娠现象会改变梅毒的临床特征和一般病程，使其变成潜伏妊娠梅毒，极大地干扰了产前检测结果[2]。因此，为探究一种有效的梅毒血清学试验方法，本院对460例孕妇的血液进行了梅毒血清学试验，并将检测结果进行回顾性分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

1.1.1 研究对象选取2012年1月至2014年3月于本院进行围产保健的460例孕妇为研究对象，年龄21~ 33岁，平均（26.2±3.5）岁。

1.1.2 纳入标准选取的孕妇中均无梅毒的临床表现和体征。

1.1.3 试剂梅毒螺旋体颗粒凝聚试验（TPPA）、ELISA试剂盒由卡迈舒（上海）生物科技有限公司生产；梅毒甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）诊断试剂盒、聚合酶链反应（PCR）荧光检测试剂盒由南京森贝伽生物科技有效公司生产；胶体金免疫层析检测（GICA）试剂盒由墨客密理博公司生产。

1.1.4 仪器选用上海杉浦生物科技有效公司生产的酶标仪；北京拓普公司生产的DEM-3洗板机；深圳市匹基生物工程有效公司生产的核酸扩增荧光检测仪；湖南湘仪离心机仪器有限公司生产的离心机。

1.2 方法

1.2.1 试验方法孕妇晨起后，空腹状态下取静脉血5mL于真空采血管中并立即送往试验室，放入速度为3000 r/min的离心机中离心处理10min，将血清分离备用。分别对孕妇的血清进TPPA、PCR、TRUST、ELISA、GICA 5种血清试验，对TPPA检测出阳性的血清，再次做PCR[3]。TRUST、ELISA和GICA的具体操作步骤如下所示。

1.2.1.1 TRUST （1）定性试验：吸取50μL的梅毒阳性和阴性对照物，均匀添加在纸卡的2个圆圈中，取等量的受测血清与卡片的另一个圆圈范围内，使用专用滴管和针头将TRUST试剂垂直地、均匀地滴加在上述3种血清中；摇动上述试剂8min，每分钟100转，仔细观察效价变化。（2）定量试验：使用生理盐水倍比稀释受测血清，再次按照上述步骤进行试验，呈现出明显凝聚反应的为达到最高稀释度，以此作为血清的凝聚效价。若受测血清中可见较大的红色凝聚物，则结果判定为阳性（+++～++++）；若受测血清中可见红色凝聚物较小，则判定结果为弱阳性（+～++）；若受测血清中无凝聚物产生，则可判定为阴性（-）[4]。

1.2.1.2 ELISA 主要步骤包括使用碳酸盐包被缓冲液稀释抗体，加入待检血清与包被反应孔中，在于反应孔中加入酶标抗体，之后进行30min至1 h的孵育，温度为37℃，孵育后洗涤，加入临时配置的0.1mL的四甲基联苯胺底物液进行显色处理，置于37℃环境中10～30min，滴入0.05mL、2M的硫酸终止反应，肉眼观察，反应孔中的颜色越深，证明阳性度越强，颜色极浅或没有则为阴性[5]。

1.2.1.3 GICA 使用去离子水溶解氯金酸至浓度为0.2 g/L，之后将其煮沸，在溶液中滴加柠檬酸三钠，滴加规格为每100毫升中加入4mL，浓度为10 g/L，继续煮沸7min，可制备15 nm的胶体金；取100mL的胶体金制备免疫胶体金；最后制备免疫层析测试条，由吸水滤纸、硝酸纤维素膜和吸水纤维组成，于试管中加入0.1mL的待测血清，测试条上带有金标记物的一段插入血清中，若测试条出现2条红色色带则为阳性，1条为阴性，无红色色带出现则表示试剂失效[6]。

1.2.2 检测结果判定标准 TPPA与PCR检测结果都呈阳性的患者，即可确诊为潜伏妊娠梅毒患者。符合率=（检出例数-假阳性例数）/（TPPA和PCR结果同为阳性例数）×100%；假阳性率=假阳性例数/460×100%[7]。

1.3 统计学处理初步数据录入EXCEL（2003版）进行逻辑校对与分析，得出清洁数据采用四方表格法进行统计学分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 潜伏妊娠梅毒阳性率以TPPA和PCR结果同时为阳性确诊为潜伏妊娠梅毒患者，460例孕妇中，共检测出潜伏妊娠梅毒患者21例，阳性率为4.6%。

2.2 ELISA、TRUST和GICA结果比较 3种检测方法中，ELISA的符合率最高，假阳性率低于TRUST，高于GICA，对潜伏期妊娠梅毒的诊断灵敏度最大，且分别与TRUST和GICA比较，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 EL I SA、TRUST和GICA结果比较

2.3 ELISA、TRUST和GICA试验临床效能比较 3种试验方式的诊断特异性都在95%以上，阴性预测值都高达98%以上，且ELISA试验的阳性似然比最高，而阴性似然比最低，见表2。

表2 ELISA、TRUST和GICA试验临床效能比较（%）

3 结论

近年来，我国的梅毒患者的例数呈逐步上升趋势，先天梅毒患儿例数的增长率也居高不下，产前的漏诊和误诊是造成的这一现象的主要原因之一，但由于妊娠反应对梅毒临床病症和体征的干扰，使得孕妇产前检查中，梅毒携带的确诊有一定的困难[4]。所以妊娠梅毒的诊断需要十分谨慎，不仅要避免给孕妇带来心理压力，还要防止漏诊和误诊造成患者错过最佳治疗时机，导致不良妊娠结局和严重的孕期并发症，给患者自身和家庭造成无法挽回的损失。

妊娠梅毒多呈潜伏状态，且妊娠状态下的妇女，其体内的内毒螺旋体和非致命的费梅毒螺旋体均可在血清学试验中呈假阳性[8]，所以在患者无梅毒的临床症状，却显示出阳性结果，这便给诊断造成了巨大的困扰，因此临床急需一种硅潜伏梅毒也变现出超级灵敏阳性率的血清学试验方法。梅毒血清学筛查，是提高潜伏梅毒检出率的最有效的检测方法，具有方便、快捷、灵敏度高、经济实用等特点，血清学试验中有5种检验潜伏梅毒的试验方法，包括：TPPA、PCR、TRUST、ELISA和GICA。而其中的TPPA联PCR得出的检测结果比较权威且确切，但这2种检测手段成本较高，普遍推广并不现实，TRUST、ELISA和GICA 3种检测方式灵敏度高，而且方便经济，是临床中常用的梅毒检测方法[9]。

综上所述，TRUST、ELISA和GICA 3种血清学试验的临床特异性较强，且各自的临床效能比较突出，可从多方面检测和试探潜伏的妊娠梅毒，联合这3种检测方式，使其在检测过程中发挥各自所长并弥补临床效能的不足之处，不仅能够提高潜伏妊娠梅毒的阳性率，还能从多方面验证患者是否属于假阳性患者，避免检测结果的不准确导致的漏诊和误诊，为母婴的健康提供了保障[10]。

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[5]朱红，帅俊，邱莉霞，等.809例梅毒孕妇及其配偶梅毒血清学分析[J].中国妇幼保健，2013，28（20）：3245-3247.

[6]梁远飞，邱莉霞，朱红，等.567例隐性梅毒孕妇所产新生儿的梅毒血清学检测结果及转阴情况分析[J].皮肤性病诊疗学杂志，2012，19（4）：214-218.

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[10]杨腊枝，胡美霞，陈丽华.妊娠期筛查和治疗梅毒的临床分析[J].中国现代医生，2012，50（17）：150-151.

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.07.041

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