生脉散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量比较

魏 梅 邓淙友 梁志毅 张德雄

(广东一方制药有限公司,佛山,528244)

生脉散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂5-羟甲基糠醛(5-HMF)含量比较

魏 梅 邓淙友 梁志毅 张德雄

(广东一方制药有限公司,佛山,528244)

目的:通过HPLC法测定并比较生脉散传统饮片汤剂及配方颗粒汤剂中5-羟甲基糠醛含量。方法:采用高效液相色谱法。Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相:甲醇-水(10∶90);检测波长:280 nm,柱温:30 ℃;流速:1 mL/min。结果:不同生脉散传统饮片汤剂中5-羟甲基糠醛含量为7.56～19.48 mg/剂;不同配方颗粒组成的汤剂中5-羟甲基糠醛含量为7.26～23.22 mg/剂。麦冬,五味子饮片均含有5-羟甲基糠醛,配伍对其并无增溶作用,但加热可增加配方颗粒汤剂中5-羟甲基糠醛的含量。结论:生脉散配方颗粒汤剂与传统饮片汤剂的色谱图基本一致,但同批药材制成的配方颗粒汤剂中5-羟甲基糠醛含量高于传统饮片汤剂。

生脉散;配方颗粒;高效液相;5-羟甲基糠醛

中药配方颗粒是以优质中药材为原料,采用现代高新技术提取、浓缩、制粒而成,具有服用少、可直接冲服、使用及携带方便等优点,近年来在临床使用逐渐增多[1]。生脉散最早出自金代医家张元素之《医学启源》[2],其以传统饮片汤剂应用于临床已有700余年,方简而力宏、经久不衰。人参、麦冬、五味子共奏益气生津,敛阴止汗之功效[3]。现代药理研究表明,生脉散中的5-羟甲基糠醛成分具有抗氧化、保护肝组织、改善血液微循环等生物活性[4-5],其可能是“益气生脉”的物质基础。

因此,本实验在已完成的传统饮片汤剂与中药配方颗粒汤剂特征图谱研究的基础上,进行传统饮片汤剂与中药配方颗粒汤剂中5-羟甲基糠醛的对比研究,以探讨中药配方颗粒在中药复方配伍中应用的可行性,为中药配方颗粒能否替代传统饮片汤剂提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 Waters2695型高效液相色谱仪,996二极管阵列检测器(Waters公司);XP 26型百万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司);BS110S型万分之一电子天平(北京赛多利斯天平有限公司)、KQ-500DE型超声波清洗机(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2 材料 人参配方颗粒(批号:1307280、310118T、402117L、401208T);麦冬配方颗粒(批号:1307109、309230T、401075T、403173T);五味子配方颗粒(批号:1305801、309382T、312269T、403362T)均由广东一方制药有限公司提供。5-羟甲基糠醛(批号:1001200655,西格玛奥德里奇(上海)贸易有限公司)。人参(批号:Y1211021、Y1311085)为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey.的根。麦冬(批号:YL130129)为百合科植物麦冬Ophiopogonjaponicas(L.)Ker-Gawl.的块根。五味子(批号:Y1311066、Y1303069)为木兰科植物五味子Schisandrachinensis(Turcz.)Baill.的成熟果实,药材均经广东一方制药有限公司质量检验中心鉴定。甲醇为色谱纯,其他化学试剂均为国产分析纯。其中编号为P1～P4的配方颗粒汤剂与编号为S1～S4的传统饮片汤剂分别来源于同批药材,见表1-2。

表1 配方颗粒汤剂对应药材来源

表2 传统饮片汤剂对应药材来源

2 方法与结果

2.1 处方及汤剂制备[6]

2.1.1 处方组成及剂量 人参10 g、麦冬30 g、五味子15 g,共55 g。

2.1.2 单味传统饮片汤剂制备 药材剪碎或用铜盅敲碎，按处方量称取三味饮片,分别加10倍水煎煮1.5 h,滤过,分别定容至500 mL,得人参、麦冬、五味子饮片汤剂,备用。

2.1.3 生脉散传统饮片汤剂制备 药材剪碎或用铜盅敲碎,按处方比例称取以上三味饮片,加10倍水煎煮1.5 h,滤过,定容至500 mL,备用。

2.1.4 生脉散配方颗粒汤剂制备 称取与药材相当量的三味配方颗粒,混合,加入90～100 ℃的水400 mL,搅拌溶解,冷却后加水定容至500 mL,备用。

2.1.5 生脉散配方颗粒缺味汤剂制备 称取与药材相当量的二味配方颗粒,混合,加入90～100 ℃的水400 mL,搅拌溶解,冷却后加水定容至500 mL,分别制得缺人参、麦冬、五味子的生脉散配方颗粒缺味汤剂,备用。

2.2 HPLC法测定5-羟甲基糠醛含量

2.2.1 色谱条件[7-10]色谱柱 Diamonsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-水(10∶90);柱温:30 ℃;流速:1 mL/min;检测波长为280 nm;进样量:5 μL。对照品、供试品图谱见图1～图3。

图1 5-羟甲基糠醛对照品HPLC图谱

图2 生脉散传统饮片汤剂S1的HPLC图谱

图3 生脉散配方颗粒汤剂P1的HPLC图

2.2.2 对照品溶液的制备[11-12]精密称定5-羟甲基糠醛对照品2.324 mg,置150 mL量瓶中,加甲醇溶解,并稀释至刻度,摇匀,制成浓度为15.49 μg/mL的5-羟甲基糠醛对照品溶液。

2.2.3 供试品溶液的制备 将上述4种汤剂摇匀,滤过,取续滤液,用0.45 μm微孔滤膜滤过,即得。

2.2.4 线性关系考察 精密吸取5-羟甲基糠醛对照品溶液2、4、8、16及20 μL,按上述色谱条件测定,记录峰面积,以峰面积Y对进样量X(ng)进行回归分析,得5-羟甲基糠醛回归方程:Y=0.000 1X+4.883 5,r=0.999 9。结果表明,5-羟甲基糠醛在31.0～309.9 ng范围内线性关系良好。

2.2.5 精密度试验 精密吸取5-羟甲基糠醛对照品溶液,按上述色谱条件重复进样6次,记录色谱图,5-羟甲基糠醛峰面积RSD值为0.86%,结果表明仪器精密度良好。

2.2.6 稳定性考察 吸取同一供试品溶液(传统饮片汤剂S1),分别在0、2、4、8、12、24 h进样,记录色谱图,5-羟甲基糠醛峰面积RSD值为1.59%，结果表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.2.7 重复性试验 分别取汤剂(传统饮片汤剂S1)6份,按2.2.2项下方法操作,平行制备6份供试品溶液,按上述色谱条件测定峰面积,计算每剂中的5-羟甲基糠醛平均含量为7.56 mg,RSD为2.07%。

2.2.8 加样回收率试验 精密吸取已知含量汤剂(传统饮片汤剂S1)6份,每份5 mL,分别精密加入浓度为15.496 μg/mL的5-羟甲基糠醛对照品溶液5 mL,按2.2.3项下方法操作,计算其平均回收率。结果5-羟甲基糠醛的平均回收率为98.40%,RSD为2.56%,见表3。

表3传统饮片汤剂S1中5-羟甲基糠醛加样回收率试验结果

2.2.9 样品测定:按上述色谱条件分别测定饮片、生脉散配方颗粒缺味汤剂、传统饮片汤剂及配方颗粒汤剂中5-羟甲基糠醛含量,并考察加热时间对5-羟甲基糠醛含量的影响,结果见表4至表8。

表4 饮片、饮片汤剂与配方颗粒汤剂中 5-羟甲基糠醛含量测定结果

表5 生脉散配方颗粒缺味汤剂中 5-羟甲基糠醛含量测定结果

表6 生脉散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂 中5-羟甲基糠醛含量测定结果

表7 10批生脉散配方颗粒汤剂5-羟甲基糠醛含量测定结果

表8 加热对生脉散配方颗粒汤剂5-羟甲基糠醛含量的影响

3 结论

本试验通过DAD检测器在200～370 nm波长扫描,发现5-羟甲基糠醛在280 nm处有最大吸收,故选择检测波长为280 nm。在摸索色谱条件时,比较甲醇-水不同浓度的溶液溶剂系统,最终确定流动相为甲醇-水(10∶90),得到的色谱峰峰形尖锐,分离度高,且基线稳定。

从表4、表5可以看出,组成生脉散的3味饮片中,人参饮片不含有5-羟甲基糠醛,制成传统饮片汤剂、配方颗粒汤剂也检测不到5-羟甲基糠醛存在。而麦冬、五味子饮片都可检测出5-羟甲基糠醛,制成传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂后含量有所增加,即配方颗粒汤剂>传统饮片汤剂>饮片。另配方颗粒缺味汤剂药对配伍,对5-羟甲基糠醛并无增溶作用,只是两者各自传统饮片汤剂原有量的叠加。从表6可以看出,生脉散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂中均可检测出此指标成分,说明5-羟甲基糠醛并不是生脉散配伍共煎产生的新成分。由同一批药材制得的生脉散传统饮片汤剂与配方颗粒汤剂中,在相等剂量下,配方颗粒汤剂的含量要高于传统汤剂,这可能与配方颗粒在浓缩与喷雾干燥过程中受热有关[13-18]。从表7、表8可以看出,不同批次配方颗粒组成的生脉散配方颗粒汤剂中,5-羟甲基糠醛含量有一定差异,其可能是药材来源、质量不同所致。10批生脉散配方颗粒含量在7.26～23.22 mg/剂之间。随着加热时间的推移,配方颗粒汤剂中5-羟甲基糠醛含量会逐渐增多,说明加热有可能使配方颗粒汤剂中其他物质转化为5-羟甲基糠醛[19]。

4 讨论

传统煎煮方法由于受到诸多不易规范统一的因素影响,如个人习惯、对火候的判断、加水量多少等,皆可导致传统饮片汤剂中有效成分的溶出含量变化较大[10]。而中药配方颗粒采用同一工艺规程生产,有效成分含量相对稳定。在临床应用中,配方颗粒汤剂比传统饮片汤剂更有利于稳定地发挥疗效。

本实验发现,生脉散配方颗粒汤剂成分与传统饮片汤剂并无区别,含量甚至优于传统饮片汤剂,说明从化学成分上中药配方颗粒在替代传统饮片汤剂中应用可行。但中药的成分相当复杂,不能单以一个或几个指标成分的相当或不相当来进行评价，研究配方颗粒在临床上替代传统饮片汤剂的可行性,还需进行药效学及临床疗效的对比研究来加以验证。

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(2014-11-06收稿 责任编辑：王明)

Comparison on Contents of 5-Hydroxymethyl-furfural(5-HMF) between Traditional Decoction and Granules of Shengmai San

Wei Mei, Deng Congyou, Liang Zhiyi, Zhang Dexiong

(GuangdongYifangPharmaceuticalCo.,Ltd.,Foshan528244,China)

Objective:To compare the contents of 5-HMF between traditional decoction and granules of Shengmai San by HPLC.Methods:A HPLC method was applied on a Diamonsil C18 column(4.6 mm×250 mm,5 μm) by an elution using MeOH-H2O(10:90) as the mobile phase. The detection wavelength was at 280nm. The column temperature was set up at 30℃ and the flow rate was 1 mL/min.Results:The contents of 5-HMF in the traditional decoction from different comprise were from 7.56 to 19.48 mg/dose. The contents of 5-HMF in the granules from different comprise were from 7.26 to 23.22 mg/dose. Lilyturf and Schisandra chinensis both contain 5-HMF, granules of Shengmai San with no solubilizaion of 5-HMF, but by heating can increase the content of 5-HMF.Conclusion:The HPLC chromatotograms are similar in the two forms of Shengmai San, but the contents of 5-HMF in granules prepared from the same batches of medicinal materials is higher than that of the traditional decoction.

Shengmai San; Granule;HPLC;5-HMF

广东省中医药局建设中医药强省科研课题(编号:20112084);广东省教育部产学研结合项目(编号:2012B091100183)

魏梅(1967—),女,硕士,副主任药师,研究方向:中药配方颗粒开发与质量管理;Tel:(0757)85603332,E-mail:weimei67@126.com

R284

A

10.3969/j.issn.1673-7202.2015.01.027