渤海沉积环境中细菌汞还原酶基因merA的多样性分析

2015-03-21何培青李力刘季花方习生

海洋学报 2015年8期

何培青，李力，刘季花*，方习生

(1. 国家海洋局第一海洋研究所海洋生态研究中心，山东青岛 266061;2. 国家海洋局第一海洋研究所海洋沉积与环境地质国家海洋局重点实验室，山东青岛 266061)

何培青1，李力2，刘季花2*，方习生2

细菌汞还原酶MerA对环境中的汞具有潜在的还原和解毒作用。本研究对2011-2012年采自渤海湾天津滨海新区大沽河排污河口、渤海湾近岸及莱州湾垦利养殖区的表层沉积物，进行了放线菌门、厚壁菌门、α-变形菌纲和β/γ-变形菌纲汞还原酶基因merA克隆文库的构建和序列测定，并对merA基因序列编码的MerA蛋白序列进行分析。结果表明：渤海沉积环境中发育多样性丰富的MerA，排污河口和养殖区中厚壁菌门、α-变形菌纲和α/β/γ-变形菌纲的MerA多样性均高于渤海湾近岸的。3个区域具有不同的MerA组成特征，厚壁菌门中与Bacillussp. MB2021亲缘关系最近的MerA的总丰度在养殖区最高(24.3%)，与Paenisporosarcinasp. TG20亲缘关系最近的MerA的总丰度在排污河口最高(46.3%)。不同环境背景、外源merA基因输入、汞等重金属污染物的联合选择可能导致了渤海沉积环境中MerA多样性和组成的变化。

渤海；排污河口；养殖区；汞还原酶；多样性

1 引言

汞是生物毒性最大的重金属之一，且无任何生理活性。汞的生物毒性主要是由于单甲基汞和Hg2+与半胱氨酸残基中的硫原子有强的亲和力，从而破坏了蛋白的结构和功能[1]。汞污染是全球性的环境问题[2]，自然界，如土壤浸蚀、火山喷发、深海热液喷发；以及人为因素，如化石燃料、化工生产[3—4]、核武器工厂[5]等均能产生并释放汞。一些厌氧细菌还能产生毒性高于汞的甲基汞[6]，甲基汞在水体[7—8]和陆地[9]食物网中的生物蓄积和生物放大，已严重威胁到人类和环境的健康[10]。由于大气对汞的传播和沉降，还导致远离污染源的地区，如北极也暴露于不断增加的汞和甲基汞中[11—12]。古菌和细菌，如厚壁菌门、放线菌门和变形菌门等在进化中产生了对汞的抗性[13—14]。细菌的汞抗性系统包括mer操纵子，其中merA基因编码的汞还原酶MerA为核心酶，依赖NAD(P)H将Hg2+还原为元素汞Hg0[13，15]。一方面，抗汞细菌产生的气态的、毒性小的Hg0可以重新释放到大气中，对受汞污染的环境起到解毒作用；另一方面，由于Hg2+是汞甲基化反应的底物，抗汞细菌还通过减少汞甲基化反应的底物供给，减少了甲基汞的产生和危害[13]。受汞污染的土壤、海洋、河流和河口等环境分布着大量的抗汞细菌及其merA基因[16—21]，汞污染还导致了merA基因多样性和拷贝数的增加[15，17，19，21]。

渤海是我国污染海域之一。近年来，大量生活和工业等污染物输入渤海，使河口、港口和养殖区等近岸部分海域的汞、铜、铬和锌等重金属污染严重[22—23]。其中，汞在沿岸底栖贝类中的蓄积已对当地居民身体健康造成潜在的危害[24]。细菌merA基因在汞的还原和解毒中具有重要的作用，而目前有关渤海merA基因的研究还是个空白。本研究选取渤海湾天津滨海新区大沽河排污河口、渤海湾近岸和莱州湾垦利养殖区的表层沉积物，PCR扩增merA部分基因序列并构建克隆文库，进一步进行基因序列的测定和分析。研究揭示了人类活动对渤海沉积环境中merA基因的多样性、结构组成和地理分布的影响。

2 材料与方法

2.1 样品的采集

2011年10月在渤海湾近岸(BH，站位BH2、BH7、BH12和BH11)，2012年9月在渤海湾天津滨海新区大沽河排污河口(DG，站位DG11、DG10、DG9和DG7)和莱州湾垦利养殖区(K，站位K1、K3、K5和K9)各采集4个站位的表层沉积物样品(37.576 8°～38.935 9°N，117.811°～118.978 7°E；见图1)。样品采集后置于无菌塑料袋中，冰盒低温运输，实验室-80℃保存。研究区表层沉积物中铅、镉、镍、铬、锌、汞和铜的含量由国家海洋局第一海洋研究所海洋地质综合实验室测定完成。

2.2merA基因扩增和基因文库的构建

各取0.5 g表层沉积物样品，采用FastDNA R○土壤DNA 提取试剂盒(MPbio公司，美国)提取基因组。采用放线菌门、厚壁菌门、α-变形菌纲和β/γ-变形菌纲merA基因的特异性引物进行PCR扩增(表1)。PCR反应采用TransStartTMTaq DNA聚合酶(全式金，北京)，PCR反应体系包括：1 μL DNA，1 μL引物(0.2 μmol/L 终浓度)，5 μL 缓冲液，4 μL dNTP，1 μL DNA 聚合酶(2.5 U)，反应体系为50 μL。反应条件：94℃，5min；94℃，10 s，退火10 s，72°C延伸0.5 min或1 min(α-变形菌纲)，40个循环；72℃延伸10 min。退火温度和扩增片段长度如表1所示。合并2个PCR产物，采用1%的琼脂糖电泳后，切下与目的基因分子量大小相近的条带，采用琼脂糖回收试剂盒(天根，北京)进行纯化，pBS-T载体连接后，转化到E.coliDH5α 感受态细胞(天根，北京)构建克隆文库，经M13通用引物验证阳性克隆后，委托上海桑尼公司完成序列测定。

图1 研究区地理位置及站位分布Fig.1 Geographical location of study area and sampling sites渤海湾近岸BH：BH2，BH7，BH12，BH11；天津滨海新区大沽河排污河口DG：DG11，DG10，DG9，DG7；垦利养殖区K：K1，K3，K5，K9nearshore of Bohai Bay BH: BH2, BH7, BH12, BH11; Wastewater discharge of Dagu River in Tianjin Bin hai New Area DG: DG11, DG10, DG9, DG7; Kenli aquaculture facility K: K1, K3, K5, K9

门/纲引物退火温度/℃扩增片断/bp参考文献放线菌门ActinomyceteAct-Fw5′-CSGAVTTCGTSTACGTCGC-3′Act-Rv5′-GCCATGAGGTASGGG-3′50400[17]厚壁菌门FirmicutesFir-Fw5′-GTTTATGTWGCWGCYTATGAAGG-3′Fir-Rv18325＇-CCTTCWGCCATYGTTARATAWGG-352455[17]β/γ-变形菌纲β/γ⁃Proteobacteria#91(A7s-n．F)5′-CGATCCGCAAGTGGCIACBGT-3′#54(A5-n．R)5′-ACCATCGTCAGRTARGGRAAVA-3′55288[25]α-变形菌纲α⁃ProteobacteriaAl-F1085′-TCCAAGRCGATGATCCGRGC-3′Al-R9065′-TAGGCNGCCATRTAGACGAACTGRTC-3′51812本研究

2.3merA基因序列的生物信息学分析

将获得的基因序列去除载体和引物序列，并翻译成蛋白序列MerA后，采用BLAST工具在GenBank 数据库中 (http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)与近缘蛋白序列进行比对。采用DOTUR软件[26]，在不小于97%相似性水平上分析MerA的操作分类单元(OTUs)，并计算香农-韦弗多样性指数(H′)。MerA文库覆盖率计算公式为：C=[1-(n/N)]×100%，其中n为单个OTU数目，N为总的OTUs数量。采用DNA Star软件中的Clustal W和BioEdit对MerA蛋白序列与GenBank中近缘蛋白序列进行多重比对，采用MEGA4.0软件中的相邻连接法 (Neighbor-Joining) 构建系统发育树，自展值(bootstraps)设为1 000。

2.4 数据分析

采用R软件[27]vegan程序中的Hellinger 距离和Ward连接方法对各个门/纲的MerA OTUs及其相对丰度进行Q聚类分析，并采用融合水平值和Mantel相关评价最优聚类数。

2.5 基因序列

将获得的序列提交到NCBI，基因序列号为KP2

34395-KP234517，KP731588-KP731608，KP715265-KP715269。

3 结果与分析

3.1 重金属分布

结果如表2所示，铅、镍、锌、镉和铜平均含量在排污河口(DG)最高；铬的平均含量在渤海近岸(BH)最高；汞的平均含量在养殖区(K)最高，其次为排污河口，渤海湾近岸最低。在总体上，排污河口的重金属污染最严重，养殖区的汞污染最严重。

表2 渤海表层沉积物中的重金属含量

续表2

3.2 汞还原酶MerA蛋白序列的多样性分析

研究共获得752个含有merA基因片段的克隆，其中采用厚壁菌门、α-变形菌纲和β/γ-变形菌纲特异性引物分别获得了278、179和295个克隆，分别获得了35、33和81个MerA OTUs。采用β/γ-变形菌纲特异性引物同时获得了α/β/γ-变形菌纲merA基因片段，采用放线菌门特异性引物未获得merA基因片段。

由表3可以得出，厚壁菌门MerA蛋白序列的平均香农-韦弗多样性指数在养殖区最高(1.82)，其次为排污河口(1.75)，渤海湾近岸最低(1.55)。采用本研究设计的α-变形菌纲merA基因特异性引物，在养殖区存在高比例的非特异性扩增，仅获得17个含有目的基因片段的克隆，对此不进行分析比较。由表4可以得出，排污河口的α-变形菌纲MerA蛋白序列的平均香农-韦弗多样性指数(1.92)高于渤海湾近岸的(1.28)。α/β/γ-变形菌纲MerA蛋白序列的香农-韦弗多样性指数在DG10最高，在K1最低。当不考虑BH11站位的偏高值，由表5可以得出，α/β/γ-变形菌纲的平均香农-韦弗多样性指数从高到低依次为排污河口(2.55)，养殖区(2.42)和渤海湾近岸(2.35)。

表3 渤海表层沉积物中厚壁菌门MerA多样性

表4 渤海表层沉积物中α-变形菌纲MerA多样性

续表4

表5 渤海表层沉积物中α/β/γ-变形菌纲MerA多样性

3.3 MerA蛋白序列系统发育分析

3.3.1 厚壁菌门MerA蛋白序列

如图2所示，研究获得35个厚壁菌门的MerA OTUs，与GenBank 数据库中8个属的MerA蛋白序列亲缘关系最近，包括专性嗜碱芽孢杆菌BacilluspseudofirmusOF4 (相似度，93%～96%)，芽孢杆菌属Bacillussp. SOK1b (相似度，87%)、芽孢杆菌属Bacillussp. MB2021(相似度，94%～100%)、Paenisporosarcinasp. TG20(近似度，87%～97%)、莱氏无胆甾原体AcholeplasmalaidlawiiPG-8A(相似度，99%)、芽孢八叠菌属Sporosarcinasp. G3(相似度，93%～94%)、轻型链球菌Streptococcusmitis(相似度，100%)、Pontibacillusmarinus(相似度，92%～93%)、丁酸梭菌Clostridiumbutyricum(相似度，100%)和Lacticigeniumnaphtae(相似度，74%)。这些参考序列主要分布于碱性土壤、污水、冰川底冰和南极淡水环境中，少部分分布于晒盐场、海湾等高盐环境，说明渤海沉积物中厚壁菌门的MerA有可能来源于陆地环境。

3.3.2 α-变形菌纲MerA蛋白序列

如图3所示，研究获得33个α-变形菌纲的MerA OTUs，与GenBank 数据库中10个属的亲缘关系最近，包括颗粒居大洋菌Oceanicolagranulosus(相似度，70%)、深海深海螺旋菌Thalassospiraprofundimaris(相似度，60%)、短杆菌属Bradyrhizobiumsp. Is-D308(相似度，61%～73%)、南极十八杆菌Octadecabacterantarcticus(相似度，63%～87%)、雷辛格氏菌属Leisingeraaquimarina(相似度，86%～95%)、生丝单胞菌属Hyphomonassp. CY54-11-8 (相似度，65%～68%)、Defluviimonassp. 20V17(相似度，81%)、嗜碱海岸杆菌Maritimibacteralkaliphilus(相似度，90% )、亚硫酸盐杆菌属Sulfitobactersp. CB2047(相似度，98%～99%)和黏液玫瑰变色菌RoseovariusmucosusDSM 17069(相似度，84%～100%)。这些参考序列主要分布于海洋环境中。

3.3.3 α/β/γ-变形菌纲MerA蛋白序列

如图4所示，α/β/γ-变形菌纲的MerA蛋白序列系统发育树有2大分支。其中一个分支属于α-变形菌纲(49个OTUs)，含有类群Ⅰ和Ⅱ(Group Ⅰ和Group Ⅱ)，与任苍白杆菌Ochrobactrumanthropi(相似度，76%)、深海深海螺旋菌Thalassospiraprofundimaris(相似度，75%)和海王生丝单胞菌Hyphomonasneptunium(相似度，69% )的亲缘关系最近。第二个分支(32个OTUs)属于β/γ-变形菌纲，含有类群Ⅲ，Ⅳ和Ⅴ (Group Ⅲ，Group Ⅳ 和Group Ⅴ)，与海杆状菌属Marinobactersp.(相似度，100%)、波罗的海深海杆菌Idiomarinabaltica(相似度，100%)、Marinobactersantoriniensis(相似度，77%)、Sedimenticolaselenatireducens(相似度，75%)、北极嗜冷单孢菌Psychromonasarctica(相似度，84%～99%)、韩国姜氏菌Kangiellakoreensis(相似度，77%)和施氏甲单孢菌Pseudomonasstutzeri(相似度，72%～100%)亲缘关系最近。这些参考序列主要分布于海洋和河口环境；而类群Ⅰ和类群Ⅱ部分序列与受汞污染的淡水河流沉积环境中MerA序列的亲缘关系最近。此外，多数α/β/γ-变形菌纲的MerA序列与已知序列的相似性较低，说明渤海发育新颖的MerA种类。

图2 渤海表层沉积物中厚壁菌门MerA进化树Fig.2 Phylogenetic tree of Firmicutes MerA in Bohai Sea surface sediment

图3 渤海表层沉积物中α-变形菌纲MerA进化树Fig.3 Phylogenetic tree of α-Proteobacteria MerA in Bohai Sea surface sediment

3.4 不同区域MerA的主要组成特征

3.4.1 不同区域厚壁菌门MerA的主要组成特征

图2中，类群Ⅰ (Group Ⅰ)由与Paenisporosarcinasp. TG20亲缘关系最近的8个OTUs 组成(相似度，87%～100%)，是排污河口的优势类群，其在排污河口总丰度也最高(46.3%)，其次为养殖区(31.0%)，渤海近岸中，离排污河口最近的BH7总丰度为50%，接近于污河口含量，其他站位的总丰度仅为2.7%。类群Ⅱ (Group Ⅱ)由与芽孢杆菌属Bacillussp. MB2021亲缘关系最近的6个OTUs (相似度，99%～100%)组成，是养殖区的优势类群，其在养殖区总丰度也最高(24.3%)，其次为渤海近岸(12.5%)，排污河口最低(2.8%)。

3.4.2 不同区域α-变形菌纲MerA的主要组成特征

图3中，aa-DG7-35(与Bradyrhizobiumsp. DFCI-1相似度，59%)是排污河口的优势种类，丰度为29.1%，在渤海湾近岸无分布。aa-BH7-14 (与Bradyrhizobiumsp. Is-D308相似度，61%)是渤海湾近岸的优势种类，其丰度(27.4%)高于排污河口的(5.4%)。类群Ⅰ (Group Ⅰ)由与Hyphomonassp. CY54-11-8亲缘关系最近2个OTUs组成(相似度，65%和68%)，在渤海湾近岸总丰度(16.8%)高于在排污河口的(2.1%)。

3.4.3 不同区域α/β/γ-变形菌纲的MerA的主要组成特征

图4中，类群Ⅰ是渤海湾近岸的优势类群，其总丰度(31.49%)也高于排污河口(13.9%)和养殖区(6.7%)的。类群Ⅱ是排污河口的优势类群，其总丰度(32.6%)也高于渤海湾近岸(24.0%)和养殖区(22.7%)的。类群Ⅲ与海洋环境中的Psychromonasarctica(相似度84%～99%)亲缘关系最近，是养殖区的优势类群，其总丰度(24.6%)高于排污河口和渤海近岸的。

工会是在党的领导下独立自主开展工作的群众性组织。作为国有特大型企业的工会组织，在维护职工权益、协调劳动关系、促进和谐创建等方面具有其他组织不可替代的优势。当前，企业的用工制度、工作环境、管理重点、员工队伍构成、需求层次、意识形态等各方面都发生了显著的变化，因而工会权益维护、参政议政、生产建设、教育引领的难度不断加大，工会工作面临着全新的选择和考验。在这种大环境下，如何把住时代的脉搏，高效规范地履行职责，使工会组织有作为、有地位、有影响，使工会干部有形象、有威信、有人气，笔者认为应当着重把握好以下四个方面：

3.5 MerA群落结构和分布

3.5.1 厚壁菌门MerA的群落结构和分布

厚壁菌门MerA的群落结构分为3类，如图5a所示。排污河口所有站位、渤海湾近岸的BH7、养殖区的K3和K5属于第1类；K9、BH12和BH11属于第2类；BH2和K1属于第3类。排污河口属于第1类，BH7地理位置靠近排污河口，也具有排污河口MerA的结构特点。养殖区和渤海湾近岸MerA结构变化较大。

3.5.2 α-变形菌纲MerA的群落结构和分布

如图5b所示，α-变形菌纲MerA的群落结构分为3类，渤海近岸的BH7、BH12、BH11属于第1类；BH2属于第2类，排污河口所有站位属于第3类。因此，渤海近岸和排污河口的MerA具有不同的组成特点。

3.5.3 α/β/γ-变形菌纲的MerA的群落结构和分布

α/β/γ-变形菌纲MerA的群落结构划分为4类，如图5c所示。渤海湾近岸的4个站位和DG10属于第1类；K1、K 3、K 9、DG7和DG 9属于第2类；DG11和K5 分别为第3类和第4类。该结果表明渤海近岸的α/β/γ-变形菌纲MerA的组成和结构不同于养殖区和排污河口的；养殖区和排污河口MerA的结构变化较大，但两个区域的相似程度仍高于与渤海近岸的。

4 讨论

本研究获得厚壁菌门、α-变形菌纲和α/β/γ-变形菌纲的149个MerA OTUs，说明渤海沉积环境中发育多样性丰富的MerA，在汞污染的环境修复中具有重要作用。Oregaard和Sørensen[17]从添加汞的表层土壤中扩增获得少量的放线菌merA基因序列，在添加汞的表层以下土壤中没有获得。本研究在缺氧的海洋沉积物中，以及Chadhain等[21]在淡水河流沉积物中[21]也未获得放线菌merA基因序列。这提示含有merA基因的放线菌可能并不是缺氧环境中的主要功能类群，或者在缺氧环境和有氧环境中放线菌具有不同汞还原机制。此外，研究采用β/γ-变形菌纲的merA基因特异性引物不仅获得β/γ-变形菌纲的merA基因序列，也获得一些与淡水河流沉积环境中α-变形菌纲的merA基因亲缘关系最近的序列。由于采用该引物在土壤中没有获得这些基因序列[17]，我们推断含有merA基因的α-变形菌纲不是土壤环境中的主要功能类群，而是淡水和海洋沉积环境中的主要功能类群。此外，本研究新设计了α-变形菌纲merA的特异性引物，该引物可以应用于海洋环境中α-变形菌纲merA基因的研究，并有可能发现更多新的种类。

厚壁菌门、α-变形菌纲和α/β/γ-变形菌纲MerA群落组成和结构呈一定的区域性分布，该结果支持Zinger等[28]报道的生态系统是影响海洋微生物分布的关键因素之一的结论。渤海湾近岸、排污河口和养殖区不同的水化学、沉积化学和生态背景等综合因素对微生物形成长期适应性选择，导致微生物群落演替并建立各区域特有的MerA结构和组成。汞的长期选择性压力会使细菌在个体水平上具备汞抗性，而MerA蛋白也可能在不同的细菌个体中具备不同的进化和演变模式，从而形成高的多样性[19]。如长期受到汞污染(13～917 μg/g湿质量)的淡水河流沉积物中merA的多样性极为丰富[21]。外源输入以及联合选择压力也会引入新的merA基因，如波罗的海海水养殖区的汞含量(最高0.03 μg/g干质量)并不高，而饵料投放、养殖粪便、抗生素等共同作用使merA基因多样性高于清洁对照区[19，29]。本研究结果也支持外源输入和联合选择的观点。(1)垦利养殖区

图4 渤海表层沉积物中α/β/γ-变形菌纲MerA进化树Fig.4 Phylogenetic tree of α/β/γ-Proteobacteria MerA in Bohai Sea surface sediment

图5 渤海沉积物环境中不同门MerA的群落结构聚类分析Fig.5 Cluster analysis of community structure of MerA within different phyla/class in Bohai Sea surface sedimenta：厚壁菌门，b：α-变形菌纲，c: α/β/γ-变形菌纲a:Firmicutes, b:α-Proteobacteria, c:α/β/γ-Proteobacteria

中与Bacillussp. MB2021亲缘关系最近的MerA蛋白序列(相似度，99%～100%)总丰度在养殖区最高(24.3%)，在排污河口和渤海近岸则分布较少。该参考菌株分布于牛瘤胃中，由此推断这些MerA蛋白序列可能来源于养殖产品(海参和虾)的肠道并随粪便排出。此外，与南极冰川中Paenisporosarcinasp. TG20亲缘关系最近的MerA蛋白序列(相似度，87%～100%)总丰度(46.3%)在排污河口最高，说明排污河口主要的抗汞细菌可能来源于陆地的水环境。(2) 排污河口汞含量低于养殖区，但α/β/γ-变形菌纲MerA蛋白序列的香农-韦弗多样性指数却高于养殖区的，这说明MerA蛋白序列多样性的控制因素并不是单一的汞含量，可能与排污河口铅、镉、镍、铬、锌和铜含量高于养殖区有关。

综上，MerA群落组成和结构的地理分布受到排污河口、渤海湾近岸和养殖区不同生态背景的控制。外源merA基因输入、汞等污染物的联合选择是排污河口和养殖区MerA蛋白序列多样性高于渤海湾近岸的重要原因。

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Diversity of mercuric reductase genemerAin Bohai Sea sediment

He Peiqing1，Li Li2，Liu Jihua2，Fang Xisheng2

(1.MarineEcologyResearchCenter，TheFirstInstituteofOceanography，StateOceanicAdministration，Qingdao266061，China; 2.KeylaboratoryofStateOceanicAdministrationforMarineSedimentology&EnvironmentalGeology，TheFirstInstituteofOceanography，StateOceanicAdministration，Qingdao266061，China)

Mercuric reductase genemerAhad a potential role in mercuric reduction and detoxification in environment. During 2011-2012，surface sediments were collected from wastewater discharge of Dagu River in Tianjin Binhai New Area from Bohai Bay，near shore of Bohai Bay and Kenli aquaculture facility from Laizhou Bay. Clone libraries ofmerAfromActinomycete，Firmicutes，α-Proteobacteriaand β/γ-Proteobacteriawere constructed and the sequences were determined. Deduced MerA protein sequences ofmerAgene were then analyzed. The results showed that Bohai Sea sedimentary environment contained high diversity of MerA，and MerA diversity withinFirmicutes，α-Proteobacteriaand α/β/γ-Proteobacteriafrom wastewater discharge and aquaculture facility were higher than that in near shore of Bohai Bay. The MerA composition in different locations also differed，and withinFirmicutes，the highest total abundance of MerAs that had the highest similarity withBacillussp. MB2021 was found in aquaculture facility(24.3%)，while，the highest total abundance of MerAs that had the highest similarity withPaenisporosarcinasp. TG20 was found in wastewater discharge(46.3%). Different environment context，exogenousmerAgene input，and co-selection caused by mercury and other heavy metal pollutants might together lead to the change of merA diversity，community composition in Bohai Sea sedimentary environment．

Bohai Sea; wastewater discharge; aquaculture facility; mercuric reductase; diversity

10.3969/j.issn.0253-4193.2015.08.010

2014-12-07；

2015-06-02。

海洋公益性行业科研专项(201105003)。

何培青(1972-)，女，山东省济南市人，博士，主要从事海洋微生物研究。E-mail：hepeiqing@fio.org.cn

*通信作者：刘季花，女，研究员，从事海洋沉积学和沉积地球化学研究。E-mail:jihliu@fio.org.cn

Q938

0253-4193(2015)08-0105-12

何培青，李力，刘季花，等. 渤海沉积环境中细菌汞还原酶基因merA的多样性分析[J].海洋学报，2015，37(8)：105—116，

He Peiqing，Li Li，Liu Jihua，et al. Diversity of mercuric reductase genemerAin Bohai Sea sediment[J]. Haiyang Xuebao，2015，37(8)：105—116，doi：10.3969/j.issn.0253-4193.2015.08.010