良恶性卵巢甲状腺肿组织中CK 19、Galectin-3、CD56蛋白的表达及鉴别诊断价值

邵世清，杨少琴#，黄 贵，田 君，张红霞，王社莲

1)河南大学淮河医院妇产科开封475000 2)河南大学淮河医院病理科开封475000

#通信作者，女，1962年10月生，主任医师，教授，研究方向:妇科肿瘤，E-mail:shaosq1978@sina.com

卵巢甲状腺肿是一种特殊类型的畸胎瘤，肿瘤完全或主要由甲状腺组织构成，是一种单胚层、高度特异性肿瘤，可辨认出甲状腺组织。卵巢甲状腺癌发病率占卵巢甲状腺肿的5%～10%［1］。卵巢甲状腺癌若能早期诊断、及时治疗，几乎可达到根治，因此卵巢甲状腺肿组织的良恶性鉴别就显得十分重要。由于卵巢甲状腺肿临床特异性差，并且良、恶性卵巢甲状腺肿组织结构特点差异不明显，仅根据肿瘤本身的组织结构、细胞学的非典型性和核分裂象并不能断定良恶性。CK19是最常见的细胞角蛋白之一，在甲状腺乳头状癌的诊断中有重要作用［2-3］。Galectin-3可以作为包括甲状腺癌在内的甲状腺滤泡细胞起源的恶性肿瘤的标志［4］。CD56属于免疫球蛋白超家族，在良性卵巢甲状腺肿中表达较高，在卵巢甲状腺癌中存在失表达现象［5］。作者对卵巢甲状腺癌和良性卵巢甲状腺肿组织中CK19、Galectin-3及CD56蛋白的表达进行了检测，并分析了其对卵巢甲状腺癌和良性卵巢甲状腺肿的鉴别诊断价值，报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料 收集河南大学附属淮河医院病理科1998年5月至2014年3月诊断为卵巢甲状腺癌6例患者的存档蜡块及临床资料，患者年龄49～68 (58.7±8.4)岁，其中2例合并腹水且CA125升高(分别为1 541、485 U/mL)，其余4例CA125均在正常范围;收集同期10例良性甲状腺肿患者的资料，年龄38～59(49.5±6.9)岁，CA125均在正常范围。卵巢甲状腺肿诊断标准［6］:①肿瘤的50%以上为甲状腺组织。②甲状腺组织未超过50%者，诊断为畸胎瘤合并甲状腺肿。③甲状腺组织很少(＜10%或仅在显微镜下可见到)，则作为畸胎瘤的特殊成分之一，在诊断中特殊注明。卵巢甲状腺癌诊断标准参照颈部甲状腺癌。所有患者术前查体甲状腺均无肿大，未行甲状腺功能检查，术后查甲状腺功能FT3、FT4、TSH均在正常范围，复查CA125均在正常范围。

1.2 CK19、Galectin-3及CD56的免疫组化染色检测 将石蜡包埋组织进行4μm厚切片，HE染色，进行病理观察。CK19、Galectin-3和CD56兔抗多克隆抗体，DAB显色试剂等购自北京中杉金桥生物工程有限公司。应用 ABC三步法染色，一抗均按1∶100稀释，操作中缓冲液用PBS，进行防脱片处理，采用高温高压修复抗原。已知阳性切片为阳性对照，应用PBS代替一抗作为阴性对照。CK19阳性信号主要定位于细胞质，或少许定位于细胞膜，阳性信号为黄色、棕褐色颗粒状分布。Galectin-3阳性信号主要定位于细胞质或少许定位于细胞核，呈黄色、棕褐色颗粒状分布。CD56阳性信号主要定位于细胞膜或少许定位于细胞质，呈黄色、棕褐色颗粒状分布。每张切片均由病理科两名副主任医师进行单盲法阅片，低倍镜(×40)下观察全片阳性信号分布特点，再于100倍镜下采用Leica Owin系统测定染色区域灰度值，灰度值越高，表明蛋白表达水平越低。

1.3 统计学处理 应用SPSS13.0进行数据处理，两组间CK19、Galectin-3及CD56灰度值比较采用两独立样本t检验;绘制ROC曲线，分析3个蛋白的鉴别诊断价值;检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 病理表现特点 卵巢甲状腺癌组织镜下特点为典型乳头状结构，细胞核大并相互重叠，毛玻璃样细胞核和间质内砂粒体，可见核纵沟，细胞核拥挤，细胞极向混乱，并可见少量核内嗜酸性(红染)的包涵体，染色质欠细腻，符合甲状腺乳头状癌的特点。良性卵巢甲状腺肿组织中腺体形态较一致，细胞质丰富，染色质细腻，细胞核圆形或椭圆形，无明显异型性。见图1。

图1 卵巢甲状腺癌(A)和良性卵巢甲状腺肿(B)的病理表现(HE，×40)

2.2 CK19、Galectin-3及CD56在卵巢甲状腺癌及良性卵巢甲状腺肿中表达水平的比较 3种蛋白染色结果见图2，表达水平的比较见表1。

图2 CK 19、Galectin-3及CD56在卵巢甲状腺癌及良性卵巢甲状腺肿中的表达(ABC，×100)A1、B1、C1:分别为卵巢甲状腺癌组织中CK19、Galectin-3及CD56的表达;A2、B2、C2:分别为良性卵巢甲状腺肿组织中CK19、Galectin-3及CD56的表达。

2.3 CK19、Galectin-3及CD56蛋白对良、恶性卵巢甲状腺肿的鉴别诊断价值 分别利用CK19、Galectin-3及CD56蛋白灰度值绘制ROC曲线，曲线下面积(AUC)分别为0.983、0.933和0.867，提示3者均有很好的鉴别诊断价值，诊断界点分别为134.8、139.4和153.4，灵敏度和特异度分别为0.833和0.900、0.833和0.900、0.667和0.900;以CK19蛋白灰度值＜134.8、Galectin-3蛋白灰度值＜139.4、CD56蛋白灰度值＞153.4为恶性标准，以其中一个指标恶性即判定为恶性，则鉴别诊断的灵敏度可达100%。

3 讨论

卵巢甲状腺肿是一种罕见的卵巢肿瘤，大多数为良性，仅不到5%是恶性［7］。有报道［8］约17%卵巢甲状腺肿患者可出现腹腔积液或假Meigs综合征，甚至可伴有CA125升高，易被误诊为恶性。该研究中全部卵巢甲状腺肿患者中出现腹腔积液及CA125升高者占2/16，略低于上述报道，可能与研究例数偏少有关。卵巢甲状腺癌发病率低，往往需要与良性卵巢甲状腺肿相鉴别。良性卵巢甲状腺肿组织有时显著增生，胞质嗜酸性变，出现异型性，与卵巢甲状腺癌鉴别时较困难。作者结合国内外研究成果，选择CK19、Galectin-3及CD56作为评价指标，探讨其对卵巢甲状腺肿良恶性的鉴别诊断价值。

CK19是构成细胞骨架的一种中间丝状物，相对分子质量为40 000～56 000。林军等［2］通过研究发现CK19在甲状腺乳头状癌中呈中等至强阳性表达，而在良性甲状腺肿病变中呈阴性或局灶弱阳性表达，提示CK19在甲状腺乳头状癌诊断中有重要作用。据报道［3］CK19作为乳头状癌的标志，敏感性达到100%，特异性达到82.5%。因此，可以推测CK19对鉴别良恶性卵巢甲状腺肿有重要意义。由于卵巢甲状腺癌与甲状腺癌组织结构相似，因此卵巢甲状腺癌组织中CK19同样呈弥漫性强阳性表达，该研究免疫组化结果也证实了这一点。卵巢甲状腺癌组织中CK19表达水平高于良性卵巢甲状腺肿，在良恶性鉴别诊断方面，准确性可达0.983。

Galectin-3参与许多生理和病理过程，包括免疫调节、细胞生长、炎症反应、肿瘤转化等，是β-半乳糖苷结合蛋白，属凝集素蛋白家族成员，在正常组织中不表达，在良性肿瘤中大多不表达或呈局灶性弱阳性表达，而恶性肿瘤中为高表达。Inohara等［4］采用免疫组化方法检测发现，Galectin-3在甲状腺恶性肿瘤组织中均弥漫性和强阳性表达，而在良性或正常甲状腺组织中均不表达，其得出结论认为Galectin-3可以作为包括甲状腺癌在内的甲状腺滤泡细胞起源的恶性肿瘤的一个标志，可用于提高良恶性甲状腺病变鉴别诊断的准确性。该研究结果显示，卵巢甲状腺癌组织中Galectin-3表达水平高于良性卵巢甲状腺肿，在良恶性鉴别诊断方面，准确性可达0.933。

CD56是神经细胞黏附分子中的一种，属于免疫球蛋白超家族，在恶性肿瘤的侵袭、浸润及转移过程中以及在胚胎组织发育过程中起重要作用。越来越多的研究发现，多种恶性肿瘤组织中存在CD56的表达。解娜等［5］研究发现，甲状腺乳头状癌组织中CD56均为阴性表达，而所有良性甲状腺病变中均呈持续性阳性表达。该研究中卵巢甲状腺癌组织中CD56表达水平低于良性甲状腺肿，在良恶性鉴别诊断方面，准确性可达0.867。联合检测3个蛋白对良恶性卵巢甲状腺肿的诊断灵敏度可达100%。

综上所述，镜下明确卵巢甲状腺组织结构，若难以确诊良恶性，可通过CK19、Galectin-3及CD56等3种蛋白的检测来进一步确诊，3个蛋白联合检测，良恶性鉴别诊断灵敏度可达100%。

［1］Bokhari A，Rosenfeld GS，Cracchiolo B，etal.Cystic struma ovarii presenting with ascites and an elevated CA-125 level:a case report［J］.Reprod Med，2003，48(1):52

［2］林军，应亚君，瞿海江，等.CK19、Galectin-3、HBME-1、p27及CyclinD1在甲状腺乳头状癌中的表达及意义［J］.中国癌症杂志，2009，19(6):433

［3］ Guyétant S，Michalak S，Valo I，et al.Diagnosis of the follicular variantof papillary thyroid carcinoma Significance of immunohistochemistry［J］.Ann Pathol，2003，23(1):11

［4］Inohara H，Honjo Y，Yoshii T，et al.Expression of galectin-3 in fine-needle aspirates as a diagnosticmarker differentiating benign from malignant thyroid neoplasms［J］.Cancer，1999，85(11):2475

［5］解娜，薛逢贵，黄幼生，等.CD56、CK19、Galectin-3在甲状腺病变鉴别诊断中的应用［J］.中国热带医学，2013， 13(10):1193

［6］卿松，李晓红，苗娜，等.良、恶性卵巢甲状腺肿临床病理分析［J］.中国癌症杂志，2013，23(7):524

［7］张伶，关键，李梅，等.卵巢甲状腺肿的CT诊断及病理对照(附3例报道及文献复习)［J］.影像诊断与介入放射学，2011，20(5):330

［8］ Huh JJ，Montz FJ，Btistow RE.Struma ovarii associated with pseudo-Meigs，syndrome and elevated serum CA125［J］.Gynecol Oncol，2002，86(2):231