日本血吸虫酪蛋白激酶2α的表达、定位与免疫效果观察*

唐 正 刘 镕 赵琴平 明珍平 钟沁萍 蒋明森 董惠芬

武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室，武汉 430071；#通讯作者

日本血吸虫酪蛋白激酶2α的表达、定位与免疫效果观察*

唐 正 刘 镕 赵琴平 明珍平 钟沁萍 蒋明森 董惠芬#

武汉大学基础医学院人体寄生虫学教研室，武汉 430071；#通讯作者

目的：克隆、表达日本血吸虫酪蛋白激酶2α(SjCK2α)基因，并定位表达，观察其表达产物的免疫效果。方法：首先针对SjCK2α基因的开放阅读框设计特异性引物，以日本血吸虫成虫RNA逆转录后的cDNA为模板，扩增目的基因；并使其带上限制性内切酶酶切位点，获得SjCK2α的目的基因片段，回收后连入表达质粒pET28a(+)。重组质粒pET28a(+)-SjCK2α转化入BL21细胞，构建表达菌；并用IPTG诱导表达菌的表达；用Ni-NTA树脂纯化后透析，收集重组目的蛋白。用重组蛋白免疫家兔制备多克隆血清。免疫组化法对皮肤型童虫、肺型童虫和常规培养肺型童虫进行组织学定位。将重组蛋白免疫小鼠，再用日本血吸虫尾蚴攻击感染，6周后剖杀，灌注法收集日本血吸虫成虫，计算减虫率；摘取肝脏组织剪碎、KOH消化后收集虫卵，计算减卵率；摘取眼球取血，收集血清，ELISA检测细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和白细胞介素4(IL-4)的含量。另设感染对照组和化工剂对照组进行比较分析。结果：扩增的目的基因SjCK2α基因片段长度为1047bp，构建的重组质粒pET28a(+)-SjCK2α转化入BL21细胞后，构建的表达菌在IPTG诱导下获得大量重组蛋白，纯化后免疫家兔获得多克隆血清。免疫组化染色发现，SjCK2α主要定位于童虫表面。将重组蛋白免疫小鼠后，攻击感染6周后获得15%的减虫率和17%的减卵率，与对照组的减虫率和减卵率差异无统计学意义(P>0.05)；此时，感染对照组的IFN-γ和IL-4含量分别为42.77±12.11和17.31±9.13，佐剂对照组的IFN-γ和IL-4的含量分别为30.99±16.55和18.65±7.52，重组蛋白免疫组的IFN-γ和IL-4的含量分别为36.19±14.56和9.90±5.20，三组间两指标比较均无统计学差异(P>0.05)。结论：本实验成功克隆和表达SjCK2α基因，其主要表达于童虫表面；SjCK2α免疫小鼠后未能获得免疫性保护。

日本血吸虫；酪蛋白激酶2α；克隆表达；定位；免疫保护

国家自然科学基金(No.81273010)