荣昌部分地区鸭源致病性大肠杆菌的分离及血清型鉴定

伍 莉，陈鹏飞

（1.西南大学荣昌校区动物医学系，重庆 荣昌 402460；2.西南大学荣昌校区水产系，重庆 荣昌 402460）

鸭大肠杆菌病由致病性大肠杆菌引起。该病可侵害各种日龄的鸭，易感日龄为2～6 周龄，发病率为25%～40%，死亡率可达10%～30%。呼吸道、生殖道感染和种蛋污染是该病主要的传播途径。鸭大肠杆菌病常与其他病混合发生，导致死亡率上升，造成巨大的经济损失。由于大肠杆菌的血清型较多，抗原复杂，临床表現具有多样性，给该病的防治带来极大困难。本试验对荣昌县部分地区鸭大肠杆菌病的血清型进行了鉴定。

1 材料与方法

1.1 病料 2011 年12 月至2012 年12 月采自荣昌县8 个乡镇96 只大肠杆菌病鸭的肝脏。

1.2 实验动物 健康昆明系小鼠104 只，雌雄不限，购自重庆医科大学实验动物中心。

1.3 试剂 各种培养基由西南大学荣昌校区动物医学系提供；肠杆菌科细菌生化鉴定管由杭州天和微生物试剂有限公司提供（批号：120123）；大肠杆菌标准抗O因子血清由中国兽医药品监察所提供（批号：120324）。

1.4 细菌分离鉴定 将病料分别接种于普通营养平板、麦康凯平板，置37 ℃培养24 h，涂片，革兰染色镜检。挑取培养基上的单个典型菌落，依次接种于麦康凯平板、肉汤培养基进行纯培养。

1.5 生化试验 取纯培养菌落接种肉汤培养基，37 ℃培养，按常规方法进行生化试验15 项[1]。

1.6 血清型鉴定 大肠杆菌标准抗O因子血清凝集试验，按照使用说明书和文献操作[2-3]。

1.7 致病性试验 取定型后的大肠杆菌分别接种于营养肉汤培养基，37 ℃振荡培养18 h，4 000 r/min 离心20 min，用灭菌生理盐水配成含菌量为20 亿/mL 悬浮液作攻毒用[4]。将104 只小鼠，随机分为13 组，每组8 只；前12 组为试验组，腹腔注射0.2 mL 悬浮液，第13 组为空白对照组，腹腔注射0.2 mL 生理盐水。接毒后记录小鼠发病与死亡情况，未死亡小鼠接毒后第10 天扑杀，剖检死亡小鼠，取肝脏抹片，革兰染色镜检[5]。

2 结果

2.1 细菌分离培养 共分离到77 株大肠杆菌，在麦康凯平板上形成红色菌落；在营养琼脂上形成圆形凸起、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落；在普通肉汤营养培养基中变浑浊，管底有黏性沉淀，液面管壁有菌环。镜检发现该细菌呈红色（革兰染色阴性），形态为两端钝圆的短杆状，多数为单个散在，少数为成对连接。由此初步鉴定这77 株细菌为大肠杆菌。

2.2 生化试验 分离到的细菌不产生硫化氢，不能利用苯丙氨酸、枸橼酸盐和葡萄糖酸盐，不分解尿素，不能液化明胶；能分解葡萄糖和山梨醇，45 株可分解棉子糖，73 株菌株可分解木糖，73 株可与木糖反应，69 株可与赖氨酸反应，61 株可与鸟氨酸反应；甲基红试验和吲哚试验均呈阳性；V-P 试验均呈阴性（表1）。

2.3 血清型鉴定 77 株大肠杆菌分属于12 种血清型，其中以O76、O78、O92、O142为优势血清型，分别占总分离菌株的16.8 % 、24.7 % 、23.4 % 和19.5 %（表2）。

2.4 致病性试验 接毒后10 h 试验组小鼠开始出现死亡，其中以O45、O92、O93和O142的致病性最强，致死率达到100 %。剖检死亡小鼠可见肝脏严重出血或呈暗红色，脾和肾表面有出血点，肠黏膜有出血、水肿现象，肠内容物稀薄有气泡。从死亡小鼠肝脏中均能分离到大肠杆菌。

表1 大肠杆菌生化试验结果

表2 大肠杆菌O抗原血清型鉴定结果

对照组小鼠全部存活（表3）。

3 讨论

3.1 小鼠致病性试验显示，12 种血清型的大肠杆菌均有不同程度的致病性，其中以O45、O92、O93和O142的致病性最强，致死率达到100 %；O2的致死率最低，只有20 %。

表3 小鼠致病性试验结果

3.2 分离到的77 株大肠杆菌分属于12 种血清型，以O76、O78、O92、O142为优势血清型，这与央珍[6]的报道一致，但是本试验中发现的O2、O9为国内不常见的血清型。这一结果表明，本地区流行的鸭大肠杆菌病血清型复杂，在防治本病选择疫苗时应与本地流行血清型相对应；有条件的鸭场应进行血清型诊断，采用本地（场）菌株制造灭活疫苗进行预防接种。

3.3 鸭大肠杆菌可侵害各种日龄的鸭，其中以2～6 周龄的雏鸭和中鸭最易感染，发病率最高[7-8]，日龄越小的雏鸭感染鸭大肠杆菌死亡率越高。在发生大肠杆菌病后，一般鸭场都选择使用抗生素来治疗，但由于用药单一，缺乏合理性，药量无度，没有明显的周期性；还由于饲养人员素质较低，没有专业的畜牧兽医知识，防疫意识浅薄，不能提前落实防疫工作，只是等到发病后盲目的滥用抗生素治疗，既起不到治疗的效果还增加了大肠杆菌的耐药性；以上综合因素导致大肠杆菌病的治疗效果不明显[11]。

4 结论

分离到的77 株鸭大肠杆菌对小鼠均有致病性，其优势血清型为O76、O78、O92、O142；有条件的养殖场应进行血清型诊断，采用本地（场）菌株制造灭活疫苗进行预防接种。

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