醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的测定方法研究

王先友,刘伟芬,胡海廷

(1.河南大学药学院,河南开封475004;2.河南省医药学校药剂教研室,河南开封475004)

醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的测定方法研究

王先友1,刘伟芬2,胡海廷1

(1.河南大学药学院,河南开封475004;2.河南省医药学校药剂教研室,河南开封475004)

摘 要:目的建立醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的HPLC测定方法。方法以C18柱为固定相;甲醇-p H=5.0磷酸盐缓冲溶液(35∶65)为流动相;流速∶1 m L/min;柱温∶25℃;检测波长∶248 nm;进样量∶20μL。结果硫柳汞在进样量为0.0505～0.824μg范围内线性关系良好。回归方程为∶Y=5.248×105X+131.2,r=0.999 6。平均回收率为99.32%,RSD=1.3%。结论该法选择性好、灵敏度高、重现性好、准确度高。可用于控制醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的含量。

关键词:硫柳汞;醋酸曲安奈德注射液;HPLC法

醋酸曲安奈德注射液为中国药典收载品种[1],属于肾上腺皮质激素药,适用于各种皮肤病、过敏性鼻炎、关节痛、支气管哮喘、肩周炎、腱鞘炎、滑膜炎、急性扭伤、类风湿关节炎等。配方中加入了硫柳汞作为防腐剂,由于硫柳汞具有一定毒性,需对其含量严格控制。但是,药典中,醋酸曲安奈德注射液质量标准项下无硫柳汞含量控制方法。查阅文献,亦未见醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的测定报导。对于硫柳汞原料的含量测定,药典中采用常量分析滴定法[2],处理过程复杂,不适合制剂中微量硫柳汞的测定。金于兰[3]曾采用冷原子吸收法(测汞仪)对流感病毒裂解(流感)疫苗中的硫柳汞含量进行了检测;李茂光[4]采用HPLC法测定了细菌溶解物(兰菌净)中的硫柳汞含量;吕小川[5]采用分光光度法测定了硫柳汞酊中硫柳汞的含量;杨晓华[6]采用流动注射氢化物发生-原子吸收法测定了乙肝疫苗中硫柳汞的含量;徐荣采用毛细管电泳法同时测定了盐酸萘甲唑林滴鼻液中有机汞抑菌剂硫柳汞及其活性成分。但这些方法均不适合该制剂中硫柳汞的含量测定。我们建立了醋酸曲安奈德注射液中硫柳汞的HPLC测定方法,为该药的质量控制及安全性保障提供了一种有效方法手段。

1　仪器、试剂与样品

安捷伦HPLC色谱仪(1200 series);Sartorius电子天平(感量:十万分之一);waters C18柱(4.6× 150 mm,5μm)。硫柳汞对照品:国药集团(批号: F20090309);色谱甲醇:TEDIA(批号:12125005);醋酸曲安奈德注射液样品(市售)。

2　方法与结果

2.1溶液制备

对照品溶液的制备:精密称量硫柳汞对照品2.58 mg,置于50 m L量瓶中,加水定容,作为标准储备液。准确量取2 m L,置10 m L量瓶中,加水稀释至刻度,摇匀作为对照品溶液。

供试品溶液的配制:准确量取醋酸曲安奈德注射液2m L,置于5 m L量瓶中,加水至刻度,摇匀。

2.2色谱条件

色谱柱:waters,symmetry系列C18柱(4.6× 150 mm,5μm);流动相:甲醇-p H=5.0磷酸盐缓冲溶液(35:65);流速:1 m L/min;柱温:25℃;检测波长:248 nm;进样量:20μL。该条件下得到的硫柳汞理论塔板数大于15 000,分离度远大于2。色谱图分别如图1和图2。

2.3方法学考察

2.3.1线性关系 分别精密量取标准储备液0.5、1、2、4、6、8 mL置于10 m L量瓶中,稀释至刻度,摇匀。准确量取20μL注入色谱仪,按前述色谱条件测定,记录色谱图。以峰面积A对进样量(x)进行线性回归,得回归方程为:Y=5.248×105X+131.2,r= 0.999 6。结果表明,硫柳汞的峰面积与进样量在0.050 5μg～0.824μg范围内具有良好的线性关系。

2.3.2精密度实验 取硫柳汞对照品溶液,同一天内重复进样6次,测定其峰面积,计算日内RSD为0.68%(n=6)。每次间隔一天进样,连续6次,计算日间RSD为0.97%。结果表明该法精密度较好。

2.3.3重复性实验 取批号为201308173的样品,按2.1项下方法配制成供试品溶液5份,取每份溶液20μL进样,记录色谱图。测得硫柳汞峰面积的RSD为1.53%(n=5),表明该法重复性较好。

2.3.4回收率实验 精密量取已知含量的醋酸曲安奈德注射液供试品(批号201308173)1 m L,硫柳汞标准储备液0.5 m L,一起置于5 m L量瓶中,加水定容,摇匀。按前述方法重复测定6次,测得平均回收率为99.32%,RSD=1.3%(n=6)。

2.3.5稳定性实验 取供试品溶液(批号201308173),按照前述色谱条件,每间隔2 h进样1次,连续考察12 h,测得RSD为0.36%(n=6),表明供试品溶液在12 h内稳定。

2.3.6含量测定 取批号为201308156、201308173和201308186的样品,按前述方法测定。测得3批样品中硫柳汞的标示量分别为93.48%,RSD= 1.53%;94.56%,RSD=0.83%;97.88%,RSD= 125%(n=3)。

3　讨论

3.1检测波长的选择

用硫柳汞标准储备液描绘UV吸收曲线,在248 nm有最大吸收峰,因此选择248 nm作为检测波长。

3.2流动相的选择

由于硫柳汞分子结构中含有一些易电离的离子官能团,需控制溶液p H值防止色谱峰拖尾,经多次摸索,采用p H=5.0磷酸盐缓冲溶液,峰的不对称因子为0.978。流动相甲醇-p H=5.0磷酸盐缓冲溶液的比例为35∶65分离度较好,选择性较高。

参考文献:

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2010:1 123.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[S].北京:化学工业出版社,2010:1 235.

[3]金于兰,陈哲文,马福容,冷继平,魏葆华.冷原子吸收法检测硫柳汞含量[J].中国生物制品学杂志,2005,18(5): 422―423.

[4]李茂光,石继春,陈琼,叶强.HPLC法测定细菌溶解物(兰菌净)中的硫柳汞含量[J].中国药事,2013,27(8): 864―866.

[5]吕小川,王晓蕾.分光光度法测定硫柳汞酊中硫柳汞的含量[J].中国医院药学杂志,1994,14(6):273―274.

[6]杨晓华,刘英华,王玉春.流动注射氢化物发生一原子吸收法测定乙肝疫苗中硫柳汞的含量[J].中国药房,2008, 19(13):1 013―1 014.

[责任编辑李武营]

Determination of Thimerosal in Triamcinolone Acetonide Acetate Injection by HPLC Method

WANG Xianyou1，LIU Weifen2，HU Haiting1
（1.Pharmaceutical college of Henan University，Henan，Kaifeng 475004，China；2.Pharmacy teaching and research section of Henan Pharmaceutical School，Henan，Kaifeng 475004，China）

Abstract：ObjectiveTo establish method of Thimerosal Determination in Triamcinolone Acetonide Acetate Injection by HPLC.MethodsAccurate result was attained with C18column，using CH3OH-p H=5.0 phosphate buffer Solution（35∶65）as mobile phase；Column temperature was 25℃with Flow rate of 1.0m L/min and detection Wavelength 240nm.ResultsLinearity was good（r=0.999 6）at the range of 0.0505μg～0.824μg.Mean recovery was 99.32%with RSD=1.3%.ConclusionThis method was sensitive，Accurate and simple with good repeatability.

Key words：Thimerosal；Triamcinolone Acetonide Acetate Injection；HPLC Method.

作者简介:王先友(1971―),男,河南开封人,博士,副教授,从事药物分析方法研发工作。

收稿日期:2015-03-18

中图分类号:R972.2

文献标识码:A

文章编号:1672―7606(2015)02―0098―02