舒肝祛脂胶囊对实验性脂肪肝大鼠治疗作用的研究

金 剑,林 涛

(上海交通大学医学院附属第九人民医院，上海 200011)

舒肝祛脂胶囊对实验性脂肪肝大鼠治疗作用的研究

金 剑,林 涛

(上海交通大学医学院附属第九人民医院，上海 200011)

目的 观察舒肝祛脂胶囊对实验性脂肪肝大鼠的治疗作用。方法 将30只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组及舒肝祛脂低、中、高剂量组和阿昔莫司组。除正常对照组外，其余5组均以高脂肪饮食饲喂5周，建立高血脂性脂肪肝模型后，模型组给予生理盐水灌胃，舒肝祛脂低、中、高剂量组分别用舒肝祛脂胶囊0.04 g/(kg·d)，0.08 g/(kg·d)，0.24 g/(kg·d)灌胃，阿昔莫司组用阿昔莫司胶囊0.06 g/kg灌胃。各组于用药4周后处死动物取材送检，观察肝指数、血脂生化指标、肝组织病理改变等。结果 模型组镜下呈中重度脂肪肝改变；与模型组比较，舒肝祛脂中、高剂量组大鼠肝指数及血清TC、TG、LDL-C、AST、ALT、ALP水平均明显下降(P均<0.05)。结论 舒肝祛脂胶囊对高脂饮食诱导的脂肪肝具有一定治疗作用。

舒肝祛脂胶囊；高血脂症；脂肪肝

脂肪性肝病简称脂肪肝，是一种由各种原因引起的肝细胞内脂肪堆积，以肝细胞脂肪变性和脂质蓄积为主要特征的临床病理综合征。美国流行病学调查显示非酒精性脂肪肝发病率接近20%，远超丙型肝炎和酒精性肝病的发病率。随着肥胖、糖尿病的全球流行，日本和中国等亚洲国家的发病率已接近欧美国家水平[1]。由于脂肪肝的发病机制目前尚未完全阐明，西医缺乏理想的针对性特效药，主要应用调节血脂的药物进行辅助治疗，而中药对脂肪肝有着很好的作用和广阔前景[2]。本实验以高血脂症大鼠为研究对象，观察疏肝祛脂胶囊对大鼠血脂和脂肪肝形成的影响，为寻找和开发新的降血脂、防治脂肪肝药物提供实验依据。

1 实验资料

1.1材料

1.1.1动物与饲料 6周龄清洁级雄性Wistar大鼠30只，体质量(180±20)g，购自上海交通大学医学院附属第九人民医院实验动物中心，合格证号：SYXK(沪)2012-0007；饲料购自上海斯莱克实验动物有限责任公司，许可证号：沪饲审(2008)04002。

1.1.2药物 舒肝祛脂胶囊，上海方心制药科技有限公司，产品批号：210120805。阿昔莫司胶囊，鲁南贝特制药有限公司，产品批号：31121207。

1.1.3试剂 总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)、碱性磷酸酯酶(ALP)和血糖试剂盒均为西门子原装配套试剂。肝组织超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)试剂盒购自碧云天生物技术研究所。

1.1.4主要仪器 ADVIA 2400型全自动化生化分析仪(拜耳德国)，Axioskop-plus型光学显微镜(蔡司德国)，组织包埋机，全自动组织脱水机，石蜡切片机，病理图像分析系统等。

1.2动物分组及造模 雄性Wistar大鼠，适应性饲养1周后，随机分为正常对照组、模型组、舒肝祛脂高剂量组、舒肝祛脂中剂量组、舒肝祛脂低剂量组和阿昔莫司组，每组5只。每组大鼠均自由摄水，正常对照组给予基础饲料，其余5组给予高脂饲料(含88.8%基础饲料、10%猪油、1%胆固醇、0.2%甲基硫氧嘧啶)，连续饲喂5周。从实验第6周末起，各组大鼠仍如前法饲喂，正常对照组、模型组用生理盐水1 mL灌胃；舒肝祛脂低、中、高剂量组分别给予舒肝祛脂胶囊0.04 g/(kg·d)、0.08 g/(kg·d)、0.24 g/(kg·d)剂量灌胃各1 mL；阿昔莫司组给予阿昔莫司0.06/(kg·d)灌胃1 mL。6组大鼠均连续灌胃4周，于末次灌胃后24 h处死，取血取肝并进行相应指标检测。

1.3检测指标

1.3.1一般情况 观察大鼠精神、活动、饮食、皮毛、体质量变化。处死大鼠后肉眼观察肝脏脂肪情况并计量肝指数(肝湿质量与体质量之比)。

1.3.2生化指标检测 门静脉采血分离血清，采用全自动化分析仪测定TG，TC，LDL-C，HDL-C，ALT，AST，ALP及血糖水平，该检测由我院检验科生化实验室完成。

1.3.3SOD活力、MDA水平检测 取大鼠1/5肝脏组织用预冷生理盐水冲洗表面血污后置于少量生理盐水中固定。SOD活力采用氮蓝四唑(NBT)比色法，MDA含量测定采用硫代巴比妥酸法，通过检测吸光度，制备标准曲线，计算各组大鼠肝组织SOD活力和MDA水平。

1.3.4光镜观察 取肝组织5 mm×5 mm，浸泡于10%甲醛液中固定，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜下观察肝组织形态变化。

2 结 果

2.1各组一般情况 高脂饲料饲喂大鼠前期食量大于正常对照组，体质量增加较快，后期食量减小，活动量减少。舒肝祛脂各组食量、活动量均明显优于模型组(P<0.05)。舒肝祛脂高剂量组大鼠体质量明显轻于模型组(P<0.05)。处死大鼠后取肝组织肉眼观察，发现正常对照组肝组织色泽正常，呈暗红色，切面无油腻感；模型组大鼠肝脏肥大、表面发黄，切面油腻。舒肝祛脂高剂量组和阿昔莫司组肝组织略偏大，大部分色泽暗红，接近正常表现。各组体质量、肝湿质量及肝指数情况，见表1。

表1 各组体质量、肝湿质量与肝指数比较

注：①与模型组比较，P<0.05。

2.2各组血清脂质、血糖及肝功能比较 与模型组相比，舒肝祛脂高剂量组和阿昔莫司组TC和AST、TG、LDL-C、ALT、ALP水平均明显下降(P均<0.05)，舒肝祛脂中剂量组水平也明显下降(P均<0.05)；舒肝祛脂低剂量组生化指标亦有所下降，但差异无统计学意义。疏肝祛脂胶囊各剂量组HDL-C及血糖水平与模型组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2 各组血清脂质、血糖的比较

注：①与模型组比较，P<0.05。

2.3各组SOD活力、MDA水平比较 疏肝祛脂各剂量组，SOD活力及MDA水平随剂量增大有轻度改善，但与模型组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表3。

2.4肝组织光镜下观察 光镜下显示，正常对照组大鼠肝组织结构完整清晰，肝小叶结构正常，中央静脉大而壁薄，肝组织排列成肝索，在中央静脉周围呈放射状分布，细胞呈多边形，见图1。模型组呈重度脂肪肝样改变，呈现弥漫性脂肪变性及空泡样变，变性的肝组织极度肿胀呈圆形，体积较正常肝组织明显增大，细胞核被脂滴挤向一边，类似脂肪细胞。肝窦受压变窄甚至消失，肝索排列紊乱，见图2。舒肝祛脂各剂量组其细胞变性及肿胀程度随药物剂量增大而逐渐减轻，高剂量组和阿昔莫司组仅有微量炎性细胞浸润和坏死灶，接近于正常表现，见图3～6。

表3 各组血清SOD活力及MDA水平比较

图1 正常对照组肝组织结构(HE，×400)

图2 模型组肝组织结构(HE，×400)

图3 舒肝祛脂低剂量组肝组织结构(HE，×400)

3 讨 论

脂肪肝是由多种原因引起的肝脏脂肪性病变，当肝细胞内脂质积聚超过肝湿质量的5%或以上的肝细胞在光镜可见脂肪小滴，其是一种可逆性病变，只要早期诊断和及时治疗，一般可恢复正常[3]。但也有研究认为，无论成因如何，均有部分脂肪肝可发展为肝纤维化，甚至肝硬化[4]。中医学虽然没有脂肪肝的病名，但根据其病因病机及临床表现和体征，可归属于中医的“胁痛”“痰浊”“瘀血”等范畴。中医理论认为该病起因多为过食肥甘厚味，嗜酒过度，或七情内伤，湿热之邪壅滞肝脾，以致肝失疏泄，肝血瘀滞，脾失健运，聚湿成痰，痰阻气机，痰瘀互结而发病[5]。其病机基础与痰、湿、瘀、积有关。病位主要责之于肝脾二脏。因此，疏肝健脾、化痰祛湿、活血化瘀、消食导滞为脂肪肝治疗要则[6]。

图4 舒肝祛脂中剂量组肝组织结构(HE，×400)

图5 舒肝祛脂高剂量组肝组织结构(HE，×400)

图6 阿昔莫司组肝组织结构(HE，×400)

舒肝祛脂胶囊作为我院的自制制剂，临床应用近20年，疗效确切，无明显不良反应。舒肝祛脂胶囊由柴胡、红花、黄芩、白芍、青皮、参三七、大黄、甘草、枳壳、海藻、白术、败酱草、郁金、猪苓、山楂和女贞子等16味药组成，具有清热化湿、化痰消瘀、调和气血、养肝健脾等功效。其中以柴胡、枳壳、郁金、海藻疏肝理气，消痰散结；白术、泽泻健脾利湿，使痰无滋生之源；红花、参三七、山楂活血通络、祛肝经之瘀，增强肝脏血运，消除积聚脂肪；败酱草能散结，寒可泄热，又具活血行瘀之功，故能清热化积；大黄通腑导滞，与泽泻配用，分流疏导，降浊祛脂。诸药合用，使肝能条达，脾可健运，痰瘀得除，脂肪无蓄积之处，从而达到舒肝祛脂之疗效[7]。现代研究表明，舒肝祛脂胶囊中多味中药材均能降低血脂、肝脂，从而改善肝细胞脂肪变性，促进肝脏功能恢复等达到降脂护肝的效果。

本研究结果显示，舒肝祛脂胶囊能降低脂肪肝大鼠血清TC、TG、AST、ALT、ALP及LDL-C水平，清除肝细胞内部分脂质积聚；镜下显示病理组织学变化明显改善，高剂量组仅有少量脂滴堆积，轻微脂肪变性，肝细胞形态趋于正常细胞表现。其改善脂肪肝作用与阿昔莫司相当，但疏肝祛脂各剂量组SOD活力和MDA水平与模型组相比稍有改善，但差异无统计学意义。其原因可能是实验观察时间过短，SOD活力与MDA水平之间存在相互影响、制约的关系，其过程较为复杂[8]。本实验是建立在高脂模型的基础上，大鼠已有明显肝损伤，发生脂肪变。一方面肝损伤造成肝细胞耗氧增加，体内产生大量自由基，造成脂质过氧化反应增强，反应产物MDA水平增加[9]；另一方面，肝脂变造成机体抵抗力下降[10]，抗自由基能力及SOD活力下降。两方面因素引发氧化应激反应，导致细胞损伤甚至死亡，使机体肝脏抗氧化能力下降。脂肪肝的治疗应是长期、多方面的，短时间内无法提高肝脏的抗氧化能力。而本研究为期4周，时间较短，可能不足以发现药物改善高血脂症大鼠肝脏氧化-抗氧化的失衡状态[11]。笔者将在下一个研究项目中对舒肝祛脂胶囊做更为长期的研究以期进一步发现具体原因。

总之，舒肝祛脂胶囊具有一定的降脂保肝作用，其具体作用机制还有待进一步探索。临床应用时医师可按照患者实际病情制定个体化用药方案，灵活应用，在提高患者服药依从性的基础上教导患者调整饮食结构、适当增加运动等；并定期检查血脂、肝功能指标、B超等，及时调整给药频次、剂量等以期发挥药物最大疗效。

[1] Fan JG. Epidemiology of alcoholic and nonalcoholic fatty liver disease in China[J]. J Gastroenterol Hepatol,2013,28(Suppl1):11-17

[2] 陆渊,费建平. 非酒精性脂肪肝中医治疗研究进展[J]. 辽宁中医药大学学报,2012,14(5):254-256

[3] 哈米兰·萨啥巴，彭继江. 脂肪肝的健康教育及预防要点[J]. 中外健康文摘，2012(42)：140

[4] 雒焕文，王波. 双合汤联合运动疗法治疗脂肪肝疗效观察[J]. 中国中医药信息杂志，2011，8(18)：75

[5] 吴宜华. 脂肪肝的中医辨证论治探讨[J]. 中国保健营养,2013,6(3):1538

[6] 解婧,韩彦艳. 中药治疗脂肪肝研究进展[J]. 药物评价研究,2012,35(2):143-146

[7] 扈荣，傅旭春，沈丽美，等. 百令疏肝胶囊治疗免疫损伤性肝纤维化的实验研究[J]. 浙江大学学报，2012，41(5)：564-568

[8] Qin R,Zhang J,Li C,et al. Protective effects of gypenosides against fattyliver disease induced by high fat and cholesterol diet and alcohol in rats[J]. Arch Pharm Res,2012,35(7):1241-1250

[9] 杨钦河，黄进，张丽佩，等. 疏肝健脾方对NASH大鼠肝组织TLR4 mRNA及其蛋白表达的影响[J]. 中草药，2013，36(1)：78-84

[10] 陈会敏,徐安莉,徐建民,等. 牛蒡子提取物对高脂血症大鼠血脂及脂肪肝形成的影响[J]. 吉林中医药,2012,6(32):615-617

[11] Wang W,Zhou W,Wang B,et al. Antioxidant effect of apolipoprotein A-I on high-fat diet-induced non-alcoholic fattyliver disease in rabbits[J]. Acta Biochim Biophys Sin,2013,45(2):95-103

Study on the effect of Shugan Quzhi Capsule in rats of experimental liver steatosis

JIN Jian, LIN Tao

(Shanghai Ninth People’s Hospital Affiliated Shanghai JiaoTong School of Medicine, Shanghai 200011, China)

Objective It is to observe the effect of Shugan Quzhi Capsule in rats of experimental liver steatosis. Methods 30 cases of Wistar rats were divided into normal group, model group, Shugan Quzhi Capsule low does, medium does and high does group, and Acipimox group. In addition to normal group, the others of five groups were fed high fat diet for 5 weeks to established hyperlipemia model. Then the animals were given normal saline gavage in model groups, Shugan Quzhi Capsule (0.04 g/kg, 0.08 g/kg, and 0.24 g/kg) in Shugan Quzhi Capsule groups, and Acipimox Capsule (0.06 g/kg) in Acipimox group. Four weeks later the animals were killed to examine the changes of blood biochemistry and pathological, and the common conditions, blood lipid level, enzyme, the ratio of liver to body weight and histological change were observed. Results The liver tissues showed changes of moderate or severe fatty liver in microscope in model group. Compared with model group, the levels of TC, TG, LDL-C, AST, ALT, ALP in Shugan Quzhi Capsule medium does and high does group were decreased markedly (allP<0.05 ). Conclusion Shugan Quzhi Capsule has some effect in the treatment of hyperlipidemia fatty liver induced by high fat diet.

Shugan Quzhi Capsule; hyperlipidemia; fatty liver

金剑，男，硕士，主管药师，研究方向为临床药学。

上海市卫生局中医药科研基金(2012Y015A)

10.3969/j.issn.1008-8849.2015.03.004

R-332

A

1008-8849(2015)03-0238-04

2014-06-01