中药有效成分的含量测定方法概述

2015-03-16徐杨璐李守拙河北省中药研究与开发重点实验室承德医学院中药研究所河北承德067000

承德医学院学报 2015年1期

徐杨璐，李守拙（河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000）

中药有效成分的含量测定方法概述

徐杨璐，李守拙△
（河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000）

中药；有效成分；含量测定

中药材和中药制剂所含成分复杂，在制定药材及中药制剂的质量标准中，一般以其具有生理活性的主要化学成分作为质量评价与控制指标。常用于中药有效成分含量测定的方法有紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、液质联用法、红外光谱法、气相色谱法、气质联用法、薄层色谱扫描法、核磁共振波谱法等，有效成分含量测定结果的准确性是中药质量控制中关键的一部分，且不同的含量测定方法各有其优缺点，应该根据不同的检测指标选择不同的检测方法。本文就常用的中药有效成分含量测定方法原理及其应用作一概述。

1 紫外-可见分光光度法

紫外-可见分光光度法是研究物质在紫外-可见光区（200-800nm）分子吸收光谱的分析方法，主要用于测定中药中总皂苷、总生物碱、总黄酮等的含量。张茹萍等［1］采用紫外-可见分光光度法测定了雷公藤3个有效部位的含量，结果显示：不同产地的雷公藤药材总二萜内酯、总生物碱及总三萜3个有效部位的含量差异悬殊，建立的该方法稳定性、重复性均良好。孙燕等［2］进行了酸枣仁中总生物碱含量的紫外分光光度法测定，以莲心碱为对照品，检测波长282nm，结果表明：该含量测定方法操作简单，结果准确，可用于酸枣仁中总生物碱部位的含量测定及质量控制。

2 高效液相色谱法

高效液相色谱法具有分离效率高、选择性好、分析速度快、检测灵敏度高和应用范围广等优点，可用于分析样品中高沸点、热不稳定性、大分子量的有效成分，是中药有效成分含量测定中应用较为广泛的一种分析方法［3］。

检测器是高效液相色谱仪的关键部件之一，主要包括紫外检测器、荧光检测器、蒸发光散射检测器、电化学检测器、质谱检测器等。光电二极管阵列检测器也属于紫外检测器。采用高效液相色谱法进行中药有效成分含量测定时，应根据被测成分的特点选择不同的检测器。

2.1 紫外检测器是高效液相色谱中应用最广泛的检测器，针对的是有紫外吸收的物质，它灵敏度高，噪音低，线性范围宽，对流速和温度的波动不灵敏。谢宝刚等［4］采用HPLC-UV法测定六味地黄制剂中丹皮酚与熊果酸的含量，结果：在215nm波长处各成分线性关系良好，所建立的方法使样品中丹皮酚、熊果酸与其它色谱峰能够有效分离，结果准确，重复性好。紫外检测器能够提供待测物的三维光谱-色谱图，其中吸收光谱用于组分的定性，色谱峰面积用于定量，近年来逐渐被用于中药成分的含量测定。李伟等［5］采用HPLC-DAD法同时分析甘草中7种有效成分的含量，检测波长按时间序列采样，结果表明：方法准确、灵敏度高，可用于甘草药材质量的评价。

2.2 荧光检测器灵敏度比紫外检测器高，选择性好，但只适合于能产生荧光的物质的检测。刘书宇等［6］采用免疫亲和柱净化，在线柱后光化学衍生HPLC-FLD测定莲子中黄曲霉毒素B1，B2等的含量，该方法灵敏度高，重复性好。栗建明等［7］也采用高效液相色谱柱后衍生法测定了果实类药材中的黄曲霉毒素的含量。

2.3 蒸发光散射检测器属于通用型检测器，适用于挥发性低于流动相的组分，可用于无紫外吸收或紫外末端吸收、无荧光的化合物的检测。张新新等［8］采用HPLC-ELSD法同时测定盾叶薯蓣根茎中5个皂苷的含量。卢凤来等［9］采用HPLC-ELSD法测定了山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量，为全面控制山银花药材的质量提供了简便、可靠的方法。

2.4 质谱检测器是一种高灵敏度的检测器，目前，液质联用技术越来越多的被应用在中药有效成分的含量测定中。除了传统上利用液相色谱的高效分离能力对被分析样品进行分离，质谱为检测器在线提供化合物的分子量信息以外，利用质谱多反应离子监测模式，可以对被测化合物准确定量。在高效液相色谱法其它检测器的使用过程中发现，如果光谱是一致的，峰仍可能包含不纯物。如果光谱吸收相对于主化合物很小，或不纯物和主化合物具有相同或几乎相同的光谱及相近的洗脱时间，也可能出现上述情况。而质谱监测是选择特异性的母离子和特异性的子离子，通过提取离子流图（EIC）进行定量。因此，质谱检测器测定结果比液相其它检测器更准确。高淑丽等［10］采用LC-MS/MS法同时测定连翘叶中4种成分的含量，采用电喷雾电离源，负离子多反应监测模式，所建立的方法专属性好、精密度高，可用于连翘叶中4种成分的同时检测。李月茹等［11］采用高效液相色谱串联质谱法测定了紫红参中57个人参皂苷类成分的含量。采用电喷雾电离，多反应监测模式检测。

3 红外吸收光谱法

红外吸收光谱法除了传统的作为定性分析的手段外，由于其进行含量测定时具有不破坏样品、用量少、操作简单、快速等优点，越来越多的被应用在中药成分定量分析中。刘冰等［12］采用傅立叶变换近红外光谱仪透射光谱技术对黄芪精口服液中黄芪多糖和黄芪甲苷进行含量测定，应用偏最小二乘回归法建立了黄芪多糖和黄芪甲苷含量近红外数学校正模型，结果表明：该含量测定方法快速、准确。蔡佳良等［13］运用近红外光谱法建立了广藿香含叶量的定量分析模型，其建立的近红外校正模型，内部交叉验证相关系数达到0.99647，定量模型稳定、精确，可用来预测未知样品的含叶量。

4 气相色谱法

气相色谱法（GC）是以气体为流动相的色谱方法，在中药成分含量测定中主要用于分离分析挥发性成分，对中药的质量控制及安全用药等方面意义重大。赵祥升等［14］用气相色谱法测定降香中4个挥发油成分的含量，为降香挥发油的综合利用及质量控制提供了依据。在有机氯农药分析领域中，GC法占有绝对的优势。沈燕等［15］用毛细管气相色谱-电子捕获检测器分析了6种中药中12种有机氯类农药的残留量，结果表明：6种中药中有4种不同程度的受到有机氯农药污染，严重影响了使用的安全性。同液质联用技术一样，气相色谱-质谱联用（GC-MS）集气相色谱法的高灵敏度、高分离效能和质谱的高选择性的特点于一体，通过总离子流色谱图结合质谱图和气相保留值对多组分混合物进行定性鉴别和分子结构的准确判断，也可与标准谱库进行比对来确证，通过峰匹配法、质量色谱图、选择离子监测法对待测物进行定量分析［16］，该技术已广泛的应用于挥发油、甾类、生物碱、脂肪酸等中药有效成分的研究。周芳等［17］用气相色谱-质谱联用法检测不同产地莲子心中有机氯农药残留量，以保留时间和特征离子定性，峰面积定量，结果：23种农药均线性关系良好，该方法简单、灵敏，可用于莲子心中农药残留的分析。

5 薄层色谱扫描法

薄层色谱扫描法（TLCS）是用薄层扫描仪对薄层板上斑点进行扫描，通过斑点对光产生吸收的强弱进行定量分析。刘法锦等［18］采用TLCS法对黄连单煎液、黄连吴茱萸合煎液、黄连吴茱萸单煎混合液中盐酸小檗碱、盐酸巴马汀、盐酸药根碱的含量进行测定，该研究为临床两药配伍使用提供了实验依据。

6 核磁共振波谱法

核磁共振波谱法（NMR）在进行定量分析之前，首先对化合物的分子结构进行鉴定，再利用分子特定基团的质子数与相应谱峰的峰面积之间的关系进行定量测定，是以结构分析为基础。罗尚华等［19］运用1H NMR对泽泻药材地缘区分和质量评价进行代谢组学研究，经1H NMR定量分析，发现四川产地的泽泻药材质量最优，且与福建产地的泽泻药材有统计学差异（P＜0.05），结果表明：该方法简单、快速，比常规的HPLC能反映出更全面的化学信息，且谱图中信号的相对强弱能反映样品中各组分的相对含量。

7 小结与展望

综上所述，应用于中药有效成分含量测定的方法主要有分光光度法、HPLC法、GC法等，HPLC-MS法、GC-MS法、IR法、NMR法，除传统上用于定性以外，也广泛用于中药有效成分的含量测定中，而早期的一些分析方法（如滴定法、重量法等）目前已较少使用。在中药有效成分含量测定中，不同的检测指标应该选择最适合的、准确可靠的检测方法，其中色谱质谱联用技术以其高效、准确的优势在中药有效成分含量测定的研究中应用日益广泛。该技术的进一步发展，必将提高中药有效成分含量测定的研究水平，从而建立科学、完善的现代中药有效成分含量测定体系，为中药现代化事业的发展、中药走向国际市场奠定坚实的技术基础。

［1］张茹萍，何昱，石森林，等.雷公藤药材中6种有效成分以及总二萜内酯、总生物碱、总三萜的含量测定［J］.中华中医药杂志，2013，28（1）：224-229.

［2］孙燕，孙浩，乔卫，等.酸枣仁中总生物碱含量的紫外分光光度法测定［J］.时珍国医国药，2013，24（1）：39-40.

［3］汪秋兰，王文清，马永贵.高效液相色谱法在中药有效成分含量测定中的应用［J］.医药导报，2011，30（11）：1474-1476.

［4］谢宝刚，钟，朱思琪，等.HPLC-UV法同时测定六味地黄制剂中丹皮酚与熊果酸［J］.中成药，2013，35（5）；970-973.

［5］李伟，王跃飞，文红梅，等.HPLC-DAD同时分析甘草中7种有效成分［J］.中国药学杂志，2008，43（24）：1914-1918.

［6］刘书宇，仇峰，杨美华.免疫亲和柱净化-在线柱后光化学衍生HPLC-FLD检测莲子中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2及其液质确证［J］.中国中药杂志，2012，37（3）：305-309.

［7］栗建明，李纯，顾利红，等.高效液相色谱柱后衍生法测定果实类药材中的黄曲霉毒素［J］.中药新药与临床药理，2011，22（4）：461-464.

［8］张新新，梁晋如，苏琪，等.HPLC-ELSD法同时测定盾叶薯蓣根茎中5个皂苷的含量［J］.药物分析杂志，2013，33 （7）：1235-1238.

［9］卢凤来，蒋海英，陈月圆，等.HPLC-ELSD法测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙［J］.中成药，2013，35（8）：1821-1823.

［10］高淑丽，刘丽华，张阳，等.LC-MS/MS法同时测定连翘叶中4种成分的含量［J］.中国药房，2013，24（11）：1026-1028.

［11］李月茹，王艳红，杨秀伟，等.高效液相色谱串联质谱法分析紫红参中人参皂苷类成分［J］.药物分析杂志，2013，33 （5）：812-817.

［12］刘冰，刘振尧，朱乾华，等.近红外光谱法同时测定黄芪精口服液中黄芪多糖和黄芪甲苷的含量［J］.分析科学学报，2011，27（2）：195-198.