生脉饮中人参总皂苷与麦冬总皂苷的含量测定*

苗策禹，赵文普，刘喜纲，刘翠哲，刘 沛

(河北省中药研究与开发重点实验室/承德医学院中药研究所，河北承德 067000)

(基础医学栏目编辑:陈志宏)

生脉饮由人参、麦冬、五味子组成，人参总皂苷和麦冬总皂苷是其有效部位[1]。文献中多为单味人参和麦冬药材中总皂苷含量测定方法[2-3]，只有许敏等[4]对生脉饮中麦冬总皂苷的含量进行了测定。经多次验证，生脉饮样品液香草醛法显色后，395nm处没有典型麦冬总皂苷吸收峰;高氯酸法显色后，人参总皂苷与麦冬总皂苷均在390nm左右有最大吸收峰，无法单独测定其中的一种。为此，本研究建立了分别测定生脉饮中人参总皂苷和麦冬总皂苷含量的方法。

1 仪器与试药

HP-8453紫外可见分光光度计(美国惠普)。人参、麦冬、五味子(同仁堂承德分公司);人参皂苷Re、鲁斯考皂苷元对照品(成都曼斯特生物科技有限公司，批号MUST-11041201、110725)。

2 方法、结果与分析

2.1 香草醛法测定生脉饮中人参总皂苷的含量[2]

2.1.1 对照品液制备:精称人参皂苷Re对照品12.54mg于10ml量瓶中，甲醇溶解定容，即得。

2.1.2 供试品液制备:取人参1g、麦冬2g、五味子1g于具塞三角瓶中，8倍量65%乙醇超声提取3次，每次1h，过滤，滤液浓缩至稠膏状，用水饱和的正丁醇萃取4次，每次10ml，合并正丁醇液，水层弃去，用0.1mol/L的NaOH溶液洗正丁醇层2次，每次10ml，弃去NaOH层，回收正丁醇，残渣用甲醇溶解定容至10ml。同法制备不含人参的阴性供试品液。

2.1.3 检测波长确定:精取对照品、供试品和阴性供试品液各100μl至比色管中，挥干溶剂，分别精密加入新配的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，60℃水浴15min，冰浴5min，加入5ml冰醋酸。以随行试剂为空白，在200-700nm处扫描。结果显示，对照品与供试品在545nm处有最大吸收，且阴性供试品无干扰。

2.1.4 标准曲线的制备:分别吸取人参皂苷Re对照品溶液60、80、100、120、140、160μl于比色管中，按2.1.3的方法在545nm处测定。以吸光度为纵坐标，人参皂苷Re含量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程:y=4.3314x+0.0054，r=0.9993，线性范围是0.0752-0.2006mg。

2.1.5 方法学考察:精密度、重复性良好，RSD分别为0.31%、2.41%。供试品液在8h内稳定，RSD为2.07%;供试品液显色后在30min内稳定，RSD为2.90%。取已知含量的供试品溶液6份，分别精密加入一定量的人参皂苷Re对照品后进行含量测定，计算回收率，结果人参皂苷Re平均回收率为100.64%，RSD为2.88%。

2.1.6 生脉饮中人参总皂苷的含量测定:取人参1g、麦冬2g、五味子1g，平行制备3份，按2.1.2和2.1.3的方法测定吸光度，计算人参总皂苷的含量。结果显示，3批样品人参总皂苷的平均含量为18.1448mg/g。

2.2 高氯酸法测定生脉饮中总皂苷含量

2.2.1 对照品液制备:精称鲁斯考皂苷元对照品11.96mg于10ml量瓶中，甲醇溶解定容。人参皂苷Re对照品溶液制备方法同2.1.1。

2.2.2 供试品液制备:方法同2.1.2，同法制备不含人参、麦冬的阴性供试品溶液。

2.2.3 检测波长确定:精密吸取鲁斯考皂苷元、人参皂苷Re对照品溶液各200μl，供试品和阴性供试品液各300μl于比色管中，挥干溶剂，精密加入高氯酸5ml，65℃水浴15min，冰浴5min，以随行试剂为空白，200-700nm扫描，结果鲁斯考皂苷元在397nm处有最大吸收、人参皂苷Re在386nm处有最大吸收，供试品在384nm处有最大吸收，阴性样品无干扰，故确定以人参皂苷Re为对照品在386nm处测定。

2.2.4 标准曲线制备:精密吸取人参皂苷Re对照品 溶 液150、250、350、450、550、650μl于 比 色 管 中，按2.2.3的方法在386nm处测定。以吸光度为纵坐标，人参皂苷Re含量为横坐标，绘制标准曲线，得回归方 程:y=1.1866x+0.0112，r=0.9996，线 性 范 围 是0.1881-0.8151mg。

2.2.5 方法学考察:精密度、重复性良好，RSD分别为0.53%、2.18%。供试品液在8h内稳定，RSD为0.67%;供试品液显色后在30min内稳定，RSD为0.50%。取已知含量的供试品溶液6份，分别精密加入一定量的人参皂苷Re对照品后进行含量测定，计算回收率，结果人参皂苷Re平均回收率为100.33%，RSD为2.01%。

2.2.6 生脉饮中总皂苷的含量测定:取人参1g、麦冬2g、五味子1g，平行制备3份，按2.2.2和2.2.3的方法测定吸光度，计算总皂苷的含量。结果显示，3批样品总皂苷的平均含量为39.1208mg/g。

2.3 生脉饮中麦冬总皂苷的含量测定

2.3.1 确定换算系数:由于香草醛法显色后未发现典型麦冬总皂苷吸收峰，高氯酸法无法单独测定麦冬总皂苷的含量，因此考虑以高氯酸法测得的总皂苷含量减去香草醛法测得的人参总皂苷的含量，得到麦冬总皂苷的含量。预实验发现，高氯酸法生脉饮中人参总皂苷含量的测定值是香草醛法的1.82倍;2010年版《中国药典》中，麦冬药材麦冬总皂苷的含量以鲁斯考皂苷元为对照品计，而本研究麦冬总皂苷以人参皂苷Re为对照品测定，预实验确定以人参皂苷Re为对照品测得的麦冬总皂苷含量是以鲁斯考皂苷元为对照品测得值的4.16倍。

因此，本研究确定以鲁斯考皂苷元为对照品计麦冬总皂苷含量的换算公式为:C=(A-1.82B)/4.16。式中:A-以人参皂苷Re为对照品，高氯酸法测定生脉饮中总皂苷的含量;B-香草醛法测定生脉饮中人参总皂苷的含量;C-生脉饮中以鲁斯考皂苷元为对照品计麦冬总皂苷的含量。

2.3.2 生脉饮中麦冬总皂苷的含量:取人参1g、麦冬2g、五味子1g，平行制备3份，按2.1.2的方法制备样品溶液，按2.2、2.3.1的方法测定生脉饮中麦冬总皂苷的含量，结果麦冬总皂苷平均含量为1.4657mg/g。

3 讨论

高氯酸法是测定麦冬中麦冬总皂苷含量的常用方法，但以高氯酸法检测时，生脉饮中人参皂苷与麦冬皂苷的最大吸收波长相近，无法单独测定麦冬总皂苷的含量。香草醛法只能测定人参皂苷而无法测定麦冬皂苷的含量。本研究前期曾考虑以茴香醛法测定生脉饮中麦冬总皂苷，但显色后吸收峰不明显，重复性差，测定结果不准确。因此，本研究建立换算系数法计算得到生脉饮中的麦冬总皂苷含量，可作为生脉制剂以及其它含人参、麦冬制剂中麦冬总皂苷含量的测定方法。

[1] 严永清.生脉散口服液的综合研究[M].北京:中国医药科技出版社，1990.1-7.

[2] 桂双英，周亚球.比色法测定人参中人参总皂苷的含量[J].安徽中医学院学报，2003，22(4):51-52.

[3] 许敏，高英，李卫民.麦冬总皂苷含量测定方法的研究[J].临床医药实践，2010，19(5B):596-597.

[4] 许敏.生脉饮复方有效部位纯化工艺初探及麦冬药材的质量标准研究[D].广州:广州中医药大学，2010.