维药热合美康宫栓提取工艺研究

阿迪力·艾斯托拉，阿不都力米提·阿不力提甫，阿卜杜列提普·奥布力，古再丽努尔·阿布都艾尼，马元甲

(1.和田地区维吾尔医药研究所，新疆 和田 848000；2.和田地区维吾尔医医院，新疆 和田 848000)



维药热合美康宫栓提取工艺研究

阿迪力·艾斯托拉1，阿不都力米提·阿不力提甫2*，
阿卜杜列提普·奥布力1，古再丽努尔·阿布都艾尼1，马元甲1

(1.和田地区维吾尔医药研究所，新疆 和田 848000；2.和田地区维吾尔医医院，新疆 和田 848000)

目的：筛选热合美康宫栓的最佳提取工艺。方法：采用L9(34) 正交试验法，以没食子酸和盐酸小檗碱含量及其收膏率为考察指标，分别采用紫外分光光度法与高效液相色谱法测定热合美康宫栓中没食子酸和盐酸小檗碱含量，筛选其最佳提取工艺。结果：石榴皮等四种含多酚类成分药材的最佳提取工艺为加15倍体积50%乙醇加热回流提取3次，每次1.5h；黄连等3种药材的最佳提取工艺为加12倍体积80%乙醇加热回流提取3次，每次1h。结论：该工艺简便易行，稳定性好，有效成分得率高，可用于热合美康宫栓的工业化提取。

热合美康宫栓；维药；试验设计；没食子酸；盐酸小檗碱；含量测定

热合美康宫栓的处方源自维吾尔医药古籍文献《卡地尔方剂集》 (Karabadin Kadiri)《卡拉巴丁爱在木和艾克买力》 (Karabadin Azam wa Akmal)中的“拍日孜节”，由海螵蛸、石榴皮、石榴花、玫瑰花、没食子、芫荽子、黄连、儿茶八味药材组成。和田地区老医药专家吐尔地买买提阿訇及其女儿沙衣甫汗在长年临床经验中调整处方配比，并长期应用于新疆地区。该制剂具有收敛消炎的作用，主要用于宫颈炎、宫颈糜烂、阴道炎等妇科疾病的治疗。 原剂型是将药材粉末直接插入用药部位，将其制作成栓剂后大大简便了用药过程，使用、储存、携带更加方便，患者耐受性较好。本研究以该制剂的主要有效成分没食子酸、盐酸小檗碱为考察指标，采用 L9(34) 正交试验考察影响热合美康宫栓提取工艺的因素，确定最佳提取工艺，现报道如下。

1 仪器与材料

戴安U3000高效液相色谱仪(美国戴安公司)，包括自动进样器WPS-3000SL，可变波长紫外检测器(含流通池)VWD-3100，二级管阵列检测器DAD-3000RS，柱温箱TCC-3000 ，变色龙化学工作站软件；UV2550型紫外分光光度仪(日本岛津公司)；YP5102型电子天平(上海光证医疗仪器有限公司)；SK5200HP超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；KDM型电热套(山东鄄城华鲁电热仪器有限公司)；FW135型高速万能粉粹机(北京市永光明医疗仪器有限公司)；CPA124S型分析天平(梅特勒-托利多仪器(北京)有限公司)；盐酸小檗碱对照品，没食子酸对照品(均由中国食品药品检定研究院提供， 没食子酸批号：110831-201204，盐酸小檗碱批号：110731-201212)；乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯(天津福宇精品化工有限公司)；原药材均由新疆安萨尔维吾尔药业有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 没食子酸含量测定

2.1.1 供试品溶液制备 分别称取处方药材25g(石榴皮2.5g、石榴花10g、玫瑰花7.5g、没食子5g)，加适量50%乙醇提取，提取液置于1 000mL容量瓶中，加50%乙醇至刻度，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液1mL至25mL棕色容量瓶中，加水稀释至刻度。再精密量取上述溶液0.5mL依次加入1.5mL水、1mL磷钼钨酸钠试液和10mL水，加适量29%碳酸钠溶液至刻度，摇匀，放置30min，备用。同法同时制备空白溶液。

2.1.2 对照品溶液制备 精密称取没食子酸对照品1mg，置于50mL容量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，即得每1mL含没食子酸0.02mg的对照品溶液。

2.1.3 标准曲线制备 分别精密量取对照品溶液2、3、4、5、6、7、8mL，置于25mL棕色容量瓶中，加水稀释至12mL，加1mL磷钼钨酸钠试液，再加适量29%碳酸钠溶液至刻度，摇匀，放置30min。以相应的试剂为空白溶液，参照紫外-分光光度法(附录ⅤA)，于760nm波长处测定各溶液吸光度值。以吸光度值为纵坐标Y，没食子酸浓度为横坐标X，绘制标准曲线，回归方程为Y=0.107 60X+0.04 700(r=0.999 6)，没食子酸在0.082～7.840mg质量范围内与其吸光度值线性关系良好。见图1。

图1 没食子酸标准曲线

2.1.4 提取溶媒考察 称取处方药材25g(石榴皮2.5g、石榴花10g、玫瑰花7.5g、没食子5g)，共4份，分别加15倍量水、50%乙醇、65%乙醇及80%乙醇加热回流提取1.5h，滤过，合并滤液。结果表明，50%乙醇提取液中没食子酸含量相对较高，故采用50%乙醇作为没食子酸的提取溶媒。

2.1.5 提取次数考察 称取处方药材25g(石榴皮2.5g、石榴花10g、玫瑰花7.5g、没食子5g)，共3份，分别加50% 乙醇加热回流提取2次、3次和4次，滤过，合并滤液。结果显示，提取3次所得提取液中没食子酸含量相对较高，故提取次数定为3次。

2.1.6 醇提取正交试验设计 选择提取温度、提取时间及溶媒用量为考察因素，根据正交试验表L9(34) 进行试验，见表1。

表1 L9(34) 正交试验设计因素水平 (n=3)

2.1.7 样品测定 根据表1试验设计，共进行9组试验，所得提取溶液均于760nm波长处测定吸光度值，代入标准曲线计算没食子酸含量。另分别精密吸取各组溶液20mL于干燥至恒重的蒸发皿中，105℃下干燥5h后移至干燥器中，放凉，迅速称重，再干燥1h，放凉后称重，计算收膏率。以没食子酸含量和收膏率为考察指标进行综合评分，直观分析结果见表2，方差分析结果见表3 。

2.1.8 结果分析 由直观分析结果可知，各因素对提取效果的影响大小依次为A (提取温度) >B (提取时间) >C (加醇倍量)，最佳因素水平为A3B3C3，即加25倍量50% 乙醇，提取温度为80℃，提取3次，每次2h 。由方差分析结果可知，提取温度(A)对提取效果有显著影响(P<0.05)，而提取时间和加醇量无显著影响(P>0.05)。为降低成本，选取最佳提取工艺为A3B1C1，即加15倍量乙醇，提取温度为80℃，提取3次，每次1h 。

2.1.9 验证实验 以最优工艺条件A3B1C1重复提取3次，结果表明所选工艺条件各次验证试验所得没食子酸含量差别不大，重现性较好，结果见表4。验证试验结果表明，该提取工艺较稳定。

表2 L9(34) 正交试验结果 (%)

表3 方差分析

表4 最佳工艺验证试验结果

2.2 盐酸小檗碱含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Inertsil ODS-3 (250mm×4.6mm，5μL)；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾(磷酸调pH值为4.0)；检测波长：345nm；柱温：35℃；流速：1.0mL/min。

2.2.2 标准曲线制备 精密称取盐酸小檗碱对照品，用盐酸-甲醇(1∶100)溶液配制成一系列梯度浓度溶液，按照上述色谱条件，分别进样10μL，测定峰面积积分。以盐酸小檗碱峰面积积分为纵坐标Y，盐酸小檗碱含量为横坐标X，得回归方程：Y=-13.141 7+149.308 0X(r=0.999 7)。结果表明，盐酸小檗碱在0.15～1.03μg质量范围与其峰面积积分线性关系良好。

2.2.3 供试品溶液制备 称取处方药材 35g(黄连5g、儿茶10g、芫荽子15g)，加适量80% 乙醇提取，提取液置于 2 000mL容量瓶中，加 80% 乙醇至刻度，即得供试品溶液。精密量取供试品溶液 1mL 至10mL容 量瓶中，加甲醇至刻度，静置，微孔滤膜(0.4μL)滤过，采用高效液相色谱仪进行测定。

2.2.4 提取次数考察 称取处方药材35g(黄连5g、儿茶10g、芫荽子15g)，共3份，加适量80% 乙醇，分别加热回流提取2次、3次和4次，滤过，合并滤液。结果表明，提取3次时提取液中的盐酸小檗碱含量相对较高，故提取次数定为3次。

2.2.5 醇提取正交试验设计 选择乙醇浓度、提取时间及溶媒用量为考察因素，按照正交试验 L9(34)表设计试验，所选因素水平见表5。

表5 L9(34) 正交试验因素水平设计 (n=3)

2.2.6 样品测定 分别取供试品溶液和盐酸小檗碱对照品溶液，按照上述色谱条件进样测定。盐酸小檗碱对照品色谱见图2，供试品溶液色谱见图3。按照正交试验设计的9组试验条件提取样品，正交试验结果见表6，方差分析结果见表7。

2.2.7 结果分析 由直观分析结果可知，各因素对提取效果的影响大小依次为C (提取时间) >A (乙醇浓度) >B (加醇倍量)，最佳因素水平为A3B3C2，即加16倍量80% 乙醇，提取3次，每次1.5h 。由方差分析结果可知，各因素均对实验结果无显著影响(P>0.05)。为降低成本，选则最佳提取工艺为A3B2C2，即加12倍量80% 乙醇，提取3次，每次1.5h 。

2.2.8 验证实验 以最佳工艺条件A3B2C2重复试验3次，结果表明所选工艺条件各次验证试验结果差别不大，重现性较好，结果见表8 。验证试验结果表明，该提取工艺较稳定。

3 讨论

优选热合美康宫栓提取工艺时以没食子酸和盐酸小檗碱含量为考察指标原因有二：一方面，石榴皮、石榴花、没食子、玫瑰花均含有多酚类成分(没食子酸)，黄连的有效成分为盐酸小檗碱；另一方面，现代药理学研究已证实以上两种成分具有较强的体内外抗肿瘤活性，并对多种革兰阳性及阴性菌具有抑制作用，其作用机制为抑制细菌DNA、RNA蛋白质及脂类合成，与细胞DNA形成复合体，干扰其复制，进而抑制细菌繁殖。

图2 盐酸小檗碱对照品色谱

图3 样品溶液色谱

本实验结果表明，石榴皮等四种含多酚类成分药材的最佳提取工艺为加15倍体积50%乙醇加热回流提取3次，每次1.5h；黄连等3种药材的最佳提取工艺为加12倍体积80%乙醇加热回流提取3次，每次1h。该工艺简便易行，稳定性好，有效成分得率高，可用于热合美康宫栓的工业化提取。该研究结果弥补了现代维吾尔医药制剂研究的不足。

表6 L9(34) 正交试验安排与结果

表7 方差分析

表8 最佳工艺验证试验结果

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(责任编辑：尹晨茹)

Study on the Extraction Process of the Uyghur Medicine Wahimi Rahmi Cervical Suppository

Adil Astulla1,Ablimit Ablitip2*,Ablitip Ubol1,Ayxamgul Ubulkasim1，Ma Yuanjia1

(1.Hotan Uyghur Medical Research Institute,Hotan 848000,China;2.Hotan Uyghur Medical Hospital,Hotan 848000,China)

Objective:To optimize the extraction process of Wahimi Rahmi Cervical Suppository.Methods:The content of gallic acid and berberine hydrochloride and its extract rate were selected as the examining indexes,using L9(34) orthogonal experiment,determine the content of gallic acid and berberine hydrochloride by ultraviolet spectrophotometry and high performance liquid chromatography (HPLC) method.Results:The optimal extraction conditions: Four types of medicinal materials which contains polyphenols like granatum were heated with 15 times the volume of 50% ethanol and reflux extract 3 times,1.5 hours each time .Three types of medicinal materials like Coptis chinensis were heated with 12 times the volume of 80% ethanol and reflux extract 3 times,each time 1 hour.Conclusion:The process is simple and easy with good stability,which provides the optimal extraction condition for Wahimi Rahmi Cervical Suppository.

Wahimi Rahmi Cervical Suppository;Testing Design; Gallic Acid; Berberine Hydrochloride; Content Determination

2015-08-04

新疆维吾尔自治区科技厅高新技术发展计划项目(201317103)；新疆维吾尔自治区科研机构创新发展专项资金项目(2014018)

阿迪力·艾斯托拉(1973-)，男，博士，新疆和田地区维吾尔医药研究所研究员，研究方向为维吾尔医药研究开发。

阿不都力米提·阿不力提甫(1983-)，男，新疆和田地区维吾尔医医院主管药师，研究方向为民族医药。

R284.2

A

1673-2197(2015)24-0027-04

10.11954/ytctyy.201524011