养血调经合剂质量标准研究

钱 瑾

(海门市中医院 药剂科，江苏 海门 226100)



养血调经合剂质量标准研究

钱 瑾

(海门市中医院 药剂科，江苏 海门 226100)

目的：建立养血调经合剂的质量控制方法。方法：采用薄层色谱法对养血调经合剂中川牛膝、陈皮、延胡索进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定制剂中丹酚酸B的含量。结果：供试品溶液薄层色谱中川牛膝、陈皮、延胡索在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点；丹酚酸B在0.101 7～1.01 7μg进样量范围内与其峰面积积分呈良好的线性关系(r=1.0)；丹酚酸B平均回收率为98.20%，RSD=0.68%。结论：该方法准确可靠,专属性强，重现性好，可有效控制养血调经合剂的质量。

养血调经合剂；薄层色谱法；丹酚酸B；高效液相色谱法

养血调经合剂是根据我院名老中医的经验方研制而成的医院制剂，由丹参、川牛膝、延胡索、制香附、熟地黄、陈皮等16味中药组成，具有理气活血、调经止痛的功效，用于痛经、闭经、月经不调等证的治疗。由于该制剂属于医院制剂，药典中并未收录其质量标准，因此本实验拟采用薄层色谱法对养血调经合剂中的川牛膝、陈皮、延胡索进行定性鉴别，同时采用高效液相色谱法测定制剂中主要有效成分丹酚酸B的含量，为养血调经合剂的质量控制提供参考[1-2]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

薄层自动成像仪(CAMAG TLC VISUALIZER)；BS110S万分之一天平(赛多利斯)；KQ-250B型超声波清洗器(昆山超声电子有限公司)；Agilent1260高效液相色谱仪；Agilent-G1329真空脱气器；Agilent-G1315D 二极管阵列检测器；CHEMSTATION B.04.02化学工作站；Agilent-G1311C四元泵。

1.2 试药

川牛膝对照药材(121065-201004)、陈皮对照药材(120969-200808)、橙皮苷对照品(110721-200613)、延胡索对照药材(120928-201006)、延胡索乙素对照品(110726-201011)、丹酚酸B对照品(111562-201009)均购自于中国食品药品检定研究院。养血调经合剂(批号141104、150113、150127)及阴性对照品均由海门市中医院提供。乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱定性鉴别

2.1.1 川牛膝的鉴别 取养血调经合剂40mL，用无水乙醚振摇提取2次，每次40mL，合并乙醚提取液，水浴蒸干，残渣加1mL乙酸乙酯溶解，即得供试品溶液。另取川牛膝对照药材1g，加水50mL，煎煮30min后滤过，滤液浓缩至40mL，水浴蒸干，残渣加1mL乙酸乙酯溶解，即得川牛膝对照药材溶液。按照养血调经合剂中药材比例同法制备不含川牛膝的阴性对照溶液。参照2010年版《中国药典》一部附录Ⅵ B中的薄层色谱法，分别吸取上述三种溶液各8μL，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(10∶1∶0.5)作为展开剂，预饱和20min后展开，取出并晾干，再喷以10%硫酸乙醇溶液进行显色，置于105℃烘箱中加热数分钟，取出后于365nm波长紫外光灯下检视[3]。供试品溶液在与对照药材色谱相应位置有相同颜色荧光斑点，阴性对照无干扰，见图1。

图1 养血调经合剂薄层色谱

注：1～3：养血调经合剂(批号141104、150113、150127)；4：阴性对照；5：川牛膝对照药材

2.1.2 陈皮的鉴别 取养血调经合剂40mL，用乙酸乙酯振摇提取3次，每次30mL，合并乙酸乙酯提取液，水浴蒸干，残渣加1mL甲醇溶解，即得供试品溶液。另取陈皮对照药材1g，加水50mL，煎煮30min后滤过，滤液浓缩至40mL，水浴蒸干，残渣加1mL甲醇溶解，即得陈皮对照药材溶液。精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇制备成饱和溶液，即得橙皮苷对照品溶液。按照养血调经合剂中药材比例同法制备不含陈皮的阴性对照溶液。参照2010年版《中国药典》一部附录Ⅵ B中的薄层色谱法，分别吸取上述四种溶液各6μL，点于同一块硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水(100∶17∶13)作为展开剂，预饱和20min后展开，展开距离为5cm，再以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水(20∶10∶1∶1)作为展开剂，预饱和20min后展开，展开距离为8cm，取出并晾干，喷以三氯化铝试液进行显色，吹干后并于365nm波长紫外光灯下检视[3]。供试品溶液与对照药材色谱和橙皮苷对照品色谱相应位置有相同颜色荧光斑点，阴性对照无干扰，见图2。

图2 养血调经合剂薄层色谱

注：1～3：养血调经合剂(批号141104、150113、150127)；4：阴性对照；5：陈皮对照药材；6：橙皮苷对照品

2.1.3 延胡索的鉴别 取养血调经合剂40mL，加适量浓氨水调节pH至碱性，再用无水乙醚振摇萃取2次，每次40mL，合并乙醚液，水浴蒸干，残渣加1mL甲醇溶解，即得供试品溶液。另取延胡索对照药材1g，加水50mL，煎煮30min后过滤，滤液浓缩至40mL，水浴蒸干，残渣加1mL甲醇溶解，即得延胡索对照药材溶液。取延胡索乙素对照品适量，加甲醇配制成每1mL含1mg延胡索乙素的对照品溶液。按照养血调经合剂中药材比例同法制备不含延胡索的阴性对照溶液。参照2010年版《中国药典》一部附录Ⅵ B薄层色谱法，分别吸取上述四种溶液各6μL，点于同一块硅胶G薄层板上，以甲苯-丙酮(9∶2)作为展开剂，预饱和20min后展开，取出并晾干，再置于碘缸中3min后取出，待薄层板上吸附的碘挥尽，于365nm波长紫外光灯下检视[3]。供试品溶液与对照药材和延胡索乙素对照品色谱相应位置上有相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰，见图3。

2.2 HPLC含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)柱(250mm×4.6mm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸溶液(22∶78)；梯度洗脱，流速：1mL·min-1；检测波长：283nm；柱温：30℃[3]。分别精密吸取养血调经合剂溶液、丹酚酸对照品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，结果显示丹酚酸B与其他组分分离度良好，其中主峰与最近的杂质峰的分离度大于1.50，理论板数均≥5 000。

图3 养血调经合剂薄层色谱

注：1～3：养血调经合剂(批号141104、150113、150127)；4：阴性对照；5：延胡索对照药材；6：延胡索乙素对照品

2.2.2 供试品溶液制备 精密量取养血调经合剂5mL于50mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 对照品溶液制备 精密称取丹酚酸B对照品适量，加50%甲醇溶液配制成每1mL含0.1mg丹酚酸B的溶液，摇匀，即得。

2.2.4 阴性对照溶液制备 按照养血调经合剂中药材比例同法制备不含丹参药材的阴性对照品溶液。

2.2.5 系统适用性试验 取供试品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，测得样品中丹酚酸B的理论板数为14 178，丹酚酸B色谱峰与相邻色谱峰之间的分离度大于1.50。

2.2.6 专属性试验 分别精密量取丹酚酸B对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明，阴性对照样品在与丹酚酸B对照品相同保留时间处无色谱峰干扰。

2.2.7 精密度试验 精密吸取丹酚酸B对照品溶液(0.101 7mg/mL)5μL，连续进样6次，测定峰面积，RSD为0.30%，表明仪器精密度良好。

2.2.8 标准曲线与线性范围考察 分别精密吸取丹酚酸B对照品溶液(0.101 7mg/mL)1、2、4、6、8、10μL，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以峰面积积分值作为纵坐标Y，丹酚酸B进样量(μg)作为横坐标X，绘制标准曲线，求得回归方程：Y=733.399 7X-0.720 0，R=1.0。

2.2.9 稳定性试验 分别于0、2、4、12、24、48h取丹酚酸B对照品溶液(0.101 7mg/mL)10μL，注入液相色谱仪，记录峰面积，结果表明：丹酚酸B峰面积积分RSD为0.25%，表明丹酚酸B在48h内性质稳定。

2.2.10 加样回收率试验 精密量取已知丹酚酸含量的养血调经合剂(批号150127，0.535mg/ml)2.5mL，置于50mL容量瓶中，共6份，分别精密加入一定量丹酚酸B对照品溶液，按照“2.2.1”项下色谱条件，分别进样10μL，求得平均回收率为98.20%，RSD=0.68%，符合药典要求，结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.2.11 重复性试验 取同一批号(150127)样品6份，按照“2.2.1”项下色谱条件测定供试品溶液中丹酚酸B含量，计算平均含量、相对标准偏差，结果表明该实验重复性良好。见表2。

表2 重复性试验结果

2.2.12 样品含量测定 按照“2.2.1”项下色谱条件，测定3批不同样品中丹酚酸B的含量，平均含量为0.60mg/mL，结果见表3。在平均含量的基础上上下浮动30%，暂定每1mL养血调经合剂中含丹酚酸B不得少于0.40mg。

表3 不同批次样品丹酚酸B含量测定结果 (mg/mL)

3 讨论

养血调经合剂是由多味中药饮片经现代工艺加工制成的医院制剂，对痛经、闭经、月经不调患者具有良好的治疗效果。本研究在原有质量标准的基础上，增加了川牛膝、陈皮和延胡索的薄层鉴别以及丹酚酸B的含量测定。丹参作为君药之一，很有必要对其质量进行控制。根据《江苏省医疗机构制剂标准提高工作方案》的要求，同时参照中国药典2010年版第二增补本“丹参”项下的含量测定方法，以丹参酸B为对照品，采用高效液相色谱法测定养血调经合剂中丹酚酸B的含量。在供试品溶液的制备过程中，对养血调经合剂中丹酚酸B的提取溶剂进行了比较和选择，分别采用水、50%甲醇、70%甲醇以及甲醇作为提取溶剂。结果显示，采用水作为提取溶剂时丹酚酸B的含量最高，因此确定水作为提取溶剂[4-5]。

本实验采用TLC法对方中川牛膝、陈皮、延胡索进行定性鉴别，采用高效液相色谱法测定制剂中丹酚酸B的含量。该方法准确可靠、专属性强，重现性好，能有效控制养血调经合剂的质量。

[1] 刘静.中药养血调经合剂治疗痛经的临床价值分析[J].中外女性健康:下半月,2013(9):21.

[2] 卢佶,吴君.高效液相色谱法测定养血调经胶囊中芍药苷的含量[J].海峡药学, 2012,24(10):83-84.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].一部.北京:人民卫生出版社,2010.

[4] 刘娜,刘赟娜.高效液相色谱法测定复方丹参片中丹酚酸B的含量所用溶剂的研究[J].中国民族民间医药,2012,21(10):55.

[5] 何昱,成金乐,徐吉银,等.HPLC-DAD同时测定丹参中原儿茶醛、丹酚酸B、隐丹参酮、丹参酮IIA四种成分的含量[J].世界科学技术-中医药现代化,2011,12(4):688-692.

(责任编辑：尹晨茹)

2015-07-29

钱瑾(1972-)，女，江苏省海门市中医院主管中药师，研究方向为中药学。

R284.1

A

1673-2197(2015)24-0044-03

10.11954/ytctyy.201524018