1例易漏检的CisAB01/A血清学鉴定和基因分型

2015-03-15吕丽霞安仕萍

检验医学与临床 2015年2期

关键词：血型亚型天津市

黄娴，吕丽霞，安仕萍△

(1.天津市血液中心 300110；2.天津市环湖医院 300060)

1例易漏检的CisAB01/A血清学鉴定和基因分型

黄娴1，吕丽霞2，安仕萍1△

(1.天津市血液中心 300110；2.天津市环湖医院 300060)

CisAB； ABO亚型；血清学；基因分型

CisAB血型为ABO血型中罕见的亚型，初检时常表现为正反定型不符[1]。但在医院送检的ABO正反定型不符的标本中，作者发现1例患者血样在室温下初检时正反定型均为A型，经过进一步血清学鉴定和基因分型检测后判定为CisAB01/A型，从而避免了血型的误判，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 标本来源标本来自天津市某医院2013年7月就诊的肿瘤患者，女，52岁，临床诊断为右乳肿物。无输血史和妊娠史。

1.2 试剂抗-A、抗-B、抗-A1和反定型试剂红细胞均由上海血液生物有限公司提供。抗-H血清来自Bio-Rad公司。人源抗-A、抗-B和抗-AB血清由天津市血液中心免疫血液学研究室自行配制。基因组DNA提取试剂盒为北京天根生化科技有限公司产品；基因分型试剂盒来自天津市秀鹏生物技术开发有限公司，包括人类ABO血型-B亚型检测和人类ABO血型-CisAB、B(A)检测两种试剂盒；DNA Marker DL2000购自TaKaRa大连宝生物公司。

1.3 血型血清学检测使用外周静脉血，乙二胺四乙酸 (EDTA)抗凝。试管法进行ABO正反定型，先在室温下离心看结果，然后置于4 ℃冰箱10 min后，再次离心判读结果。用抗-A1、抗-H血清检测血型抗原。采用吸收放散试验检测弱的抗原，步骤参见文献[2]。

1.4 基因分型检测采用聚合酶链反应-序列特异性引物(PCR-SSP)法。按照说明书进行基因组DNA的提取。在ABO分型PCR反应板中，每孔反应体系为20 μL。反应条件均遵守说明书：96 ℃预温2 min；96 ℃ 20 s，68 ℃ 60 s，5个循环；96 ℃ 20 s，65 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，10个循环；96 ℃ 20 s，62 ℃ 45 s，72 ℃ 30 s，15个循环；72 ℃延伸，其中人类ABO血型-B亚型检测为延伸1 min，CisAB、B(A)检测为延伸3 min。220 V稳压电泳30 min，采用凝胶成像系统观察。

2 结果

2.1 血清学鉴定在室温反应条件下，标本的正反定型均为A型，但置于4 ℃ 10 min后，标本红细胞与单克隆抗B和人源抗B血清均出现弱凝集，如表1所示。标本红细胞与抗H血清凝集强度为w+(Oc对照：+++；Bc对照：w+)。将标本红细胞与O型对照红细胞分别使用人源抗B血清于4 ℃进行吸收试验，然后进行56 ℃热放散，放散液与B细胞作凝集实验，标本红细胞的放散液凝集强度为++++，O型对照红细胞的放散液凝集强度为0。血清学分析，标本红细胞含正常A1抗原，B抗原弱，血清含抗-B抗体，为ABx亚型。

表1 标本正反定型结果

2.2 基因分型图1为CisAB、B(A)检测，显示1、2孔为阳性，1、2孔为CisAB01的特异性扩增孔，根据试剂盒提供的读板纸判断含有CisAB01基因。图2为B亚型检测，仅第36孔阳性，显示含有A基因。标本基因分型结果为CisAB01/A。

图1 标本CisAB、B(A)基因检测电泳图谱

图2 标本B亚型基因检测电泳图谱

3 讨论

1964年，疑似CisAB血型案例最早被报道[3]。CisAB遗传机制有两种可能的解释，一种是染色体不等交换，另一种是糖基转移酶基因的错义突变，从目前的文献看后者更常见。已经报道的CisAB等位基因有4种，其中本例标本所属的CisAB01等位基因，据文献报道，其基因型是在A*101的基础上有nt467(C→T)和nt803位(G→C)的点突变[4]。

通常所说的CisAB是指CisAB/O，其血清学特征常被描述为A2Bx[5]或A2B3，B抗原通常表达很弱，H抗原水平很高，血清中通常有弱的抗B，但其A抗原一般比A2B表达多，比A1B表达少[6]。本例CisAB/A的血清学特征与CisAB/O不同，与抗-A1强凝集，与抗B血清反应更弱(仅在4 ℃弱凝集)，而H抗原含量与B型细胞相仿，远不及O型细胞，疑似ABx。其原因是一条染色体为A基因，另一条染色体为CisAB01基因。2003年，许先国等[7]报道CisAB01等位基因，2013年，于晓丽等[8]报道CisAB01与B等位基因杂合，但CisAB与A等位基因杂合的报道仅见于家系中[9]，尚未有先证者案例报道。

本例标本在室温条件下初检表现为正常的A型，但医院送检时标注正反定型不符，谨慎起见，作者采用更丰富的方法鉴定血型，避免了血型误判。这提醒检验人员在血型检测工作中，应采用多种血清学方法，仔细观察ABO血型正反定型不一致现象，防止ABO亚型的漏检，必要时采用分子生物学技术加以辅助鉴定[10]。若本例标本的患者需要输血，由于其红细胞与抗-A强凝集、与抗-B弱凝集，血清中存在抗-B，以输注O型洗涤红细胞和AB型血浆为佳[11]。

[1]孙玉芹，吴晓黎，孙迪，等.cisAB血型家系分析1例[J].中国输血杂志，2013，26(1):81-82.

[2]兰炯采，贠中桥，陈静娴.输血免疫血液学实验技术[M].北京:人民卫生出版社，2011:32-42.

[3]杰夫·丹尼尔.人类血型[M].北京:科学出版社，2007:47-48.

[4]郭忠慧，向东，朱自严，等.罕见的CisAB与B(A)血型的基因型研究[J].中华医学遗传学杂志，2004，21(4):321-324.

[5]王志强，闫学莉，李新新，等.罕见的cisAB血型鉴定及家系调查[J].中国现代医生，2012，50(32):119-123.

[6]Hummel K，Badet J，Bauermeister W，et al.Inheritance of Cis-AB in three generations(family Lam) [J].Vox Sang，1977，33(5):290-298.

[7]许先国，洪小珍，朱发明，等.cisAB亚型第6、7外显子及侧翼内含子序列分析[J].临床检验杂志，2003，21(2):69-71.

[8]于晓丽，赵卫军.对1例罕见CisAB01/B血型的基因学研究[J].中国输血杂志，2013，26(7):619-621.

[9]相晓，侯涛，赵广超，等.罕见cisAB血型家族的遗传学分析[J].医学研究生学报，2013，26(12):1279-1281.

[10]兰炯采，陈静娴，马红丽，等.推荐ABO疑难血型三步分析法[J].中国输血杂志，2010，23(3):165-168.

[11]何子毅，刘赴平，胡应明，等.一例稀有CisAB 血型血清学及遗传机理分析[J].中国生物制品学杂志，2012，25(11):1524-1526.

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.02.068