RhD(-)无亲缘关系献血者Du和 Del变异型分布调查*

2015-03-15刘文国郭长义宋雪冬宋任浩

检验医学与临床 2015年2期

关键词：变异型初筛单克隆

刘文国，郭长义，宋雪冬，宋任浩

(1.河北省廊坊市第四人民医院检验科 065700；2.河北省

·临床研究·

RhD(-)无亲缘关系献血者Du和 Del变异型分布调查*

刘文国1，郭长义1，宋雪冬1，宋任浩2△

(1.河北省廊坊市第四人民医院检验科 065700；2.河北省

血液中心检验科，石家庄 050071)

目的调查RhD(-)无亲缘关系献血者Du和 Del变异型分布情况。方法对盐水法初筛为RhD(-)无亲缘关系献血者采用间接抗球蛋白试验检测Du型，采用吸收放散法检测Del型。结果初筛为RhD(-) 327例标本中,检出Du 20例,占6.12%,Del型51例,占15.59%,确证RhD(-)256例,占78.29%。确证RhD(-)献血者中ccee表现型最多,占48.32%,其次是Ccee,占23.55%；Du型中ccEe占3.98%,其次是Ccee,占1.53%；Del型中Ccee占10.70%,CCee占1.83%。结论常规检测 RhD(-)的献血者应采用更为敏感的试验确证是否为Du型或Del型。为保障输血安全，Du型和Del型献血者应作RhD阳性看待，而作为受血者则应视为RhD阴性。

RhD(-)血型； Du型； Del型

RhD抗原对输血的影响仅次于ABO抗原，具有重要的临床意义，因此，人们对RhD抗原的研究较为深入。RhD基因的重组、突变、缺失及mRNA的表达水平下降，导致了红细胞的RhD血型出现许多变异型，其中Du型及Del型最为常见[1]。Du型及Del型由于D抗原表达较弱，常规血型血清学方法检测一般为阴性，采用较为敏感的间接抗球蛋白试验和吸收放散法仍可检测出D抗原。目前，已有RhD(-)患者因输入Rh Du或Del型血液后产生了抗-D或抗-D效价升高的报道[2]。因此，在RhD(-)献血者中排除Du、Del的个体,对于建立真正的RhD(-)血型库以保证安全输血十分重要。为此作者采用间接抗球蛋白试验和吸收放散试验对河北地区初筛RhD(-)献血者Du和 Del变异型分布调查,现将研究结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2012年5月至2014年5月河北省血液中心盐水法初筛为RhD(-)无亲缘关系献血者的血液标本327份。进一步采用间接抗球蛋白试验检测Du型，采用吸收放散法检测Del型。

1.2 主要试剂与仪器单克隆IgM抗-D、单克隆IgG抗-D、人源性多克隆抗-D(德国Biotest公司、上海血液生物公司、北京金豪制药公司)；单克隆IgG+IgM抗-D(加拿大Dominion公司、德国Biotest公司、法国Diagast公司)；单克隆抗-C、抗-c、抗-E、抗-e和抗球蛋白试剂(北京金豪制药有限公司)。2991型血细胞洗涤机(美国Gambro公司)、80-2 型离心沉淀器(上海手术机械厂)、TD4M血细胞洗涤离心机 (长沙平凡仪器仪表有限公司)、BHW 2型水浴箱(北京医疗设备厂)、奥林巴斯CX21BIM-SET5生物显微镜(上海皖宁精密科学仪器有限公司) 和QL-861漩涡混合器(常州杰博森仪器有限公司)。

1.3 方法 RhD(-)初筛及确认:操作步骤参照文献[3]。用3批不同来源的单克隆 IgM 抗-D试剂作盐水法初筛试验,凝集者为 RhD(+)，未凝集者为 RhD(-)；未凝集者用单克隆抗-C、抗-c、抗-E和抗-e鉴定其表型，同时3种不同来源的人源性多克隆抗-D和单克隆IgG+IgM抗-D进行间接抗人球蛋白试验,凝集者判为Du；未凝集者用单克隆 IgM抗-D试剂及单克隆IgG抗-D试剂作乙醚吸收放散试验，凝集者确定为Del型。

2 结果

初筛为RhD(-)标本327例中,检出Du 20例,占6.12%,Del型51例,占15.59%,确证RhD(-)256例,占78.29%。确证RhD(-)献血者中ccee最多,占48.32%,其次是Ccee,占23.55%；Du型中ccEe占3.98%,其次是Ccee,占1.53%；Del型中Ccee占10.70%,CCee占1.83%。327例初筛为RhD(-)献血者Rh 系统表型分布见表1。

表1 327例初筛为RhD(-)献血者Rh 系统表型分布[n(%)]

3 讨论

Rh血型系统是最具多态性的红细胞血型系统，与临床输血密切相关的有D、C、c、E、e等5种抗原，免疫强度依次为D、E、c、C、e，约80%的RhD阴性个体在接受1 U的RhD阳性红细胞刺激后即可产生抗-D[4],我国卫生部于2000年颁发了《临床输血技术规范》，明确要求采供血机构在采集、供应血制品前必须进行Rh 血型检测。近年来随着输血实践的不断深入，人们发现部分RhD(-)个体拥有常规检测方法如盐水法难以检测出的弱D抗原。弱D抗原是由于基因重组、缺失、点突变、无义突变以及 mRNA 的表达水平下降而导致的，与D抗原基本上无区别,只是比RhD阳性的红细胞膜上的D抗原位点少,表达减弱。弱D抗原最为常见的为Du和 Del变异型，只能用间接抗球蛋白试验和吸收放散技术才能检出。

调查显示，本地区Du型在初筛阴性献血者中的分布频率较低，为6.12%，与有关调查结果相近[5]。Du型红细胞在抗人球蛋白介质中能够与IgG抗D血清发生凝集，说明Du型红细胞上含有一定的RhD抗原表位。有研究显示,Du型红细胞可刺激RhD(-)受血者产生IgG 抗D[6]。在RhD(-)献血者中Del型的检出率为15.59%，与云南地区接近[7]，但低于海南地区29.25%的检出率[8]，说明Del型的分布存在一定的地区差异，但还有待于大标本量的进一步研究。实验显示,Del型红细胞在抗人球蛋白介质中不能与IgG抗D出现凝集，只能用更加敏感的吸收放散试验才能检出,说明Del型红细胞上含有较少的RhD抗原表位。尽管如此,Del型献血者的红细胞仍可刺激受血者发生同种免疫反应而产生IgG抗D[9]，因此，为保障输血安全，Du型和Del型献血者应作RhD阳性看待，而作为受血者则应视为RhD阴性。由于Del型红细胞上抗原表位极少，由此引起同种免疫反应的概率较小。因此，若RhD(-)患者要急需用血，此时又找不到完全适合的血液，这时可将Del型作为RhD阴性血液来用。不过，这种做法仅限在RhD阴性血液缺乏时应急使用。

调查还显示，RhD(-)献血者的表现型以 ccee型(48.32%)和 Ccee型(23.55%) 所占比重最大,与有关报道基本一致[10]。在Du型献血者中，表现型分布以ccEe型为最多，而在Del型献血者中，以Ccee型为最多。有研究报道Del型与C抗原有一定的相关性[11],但因检测的标本量较少,还有待进一步研究。

综上所述，常规检测 RhD(-)的献血者应采用更为敏感的试验确证是否为Du型或Del型。为保障输血安全，Du型和Del型献血者应作RhD阳性看待，而作为受血者则应视为RhD阴性。

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