贵州165例α-地中海贫血基因突变类型初步分析＊

刘兴梅，李贵芳，吴 娴，苏 莉，王茹蕾，黄盛文

（贵州省人民医院检验科，贵阳550002）

α-地中海贫血（以下简称α-地贫）是世界上常见的单基因常染色体遗传性疾病之一，也是我国长江以南发生率最高，影响最大的遗传病之一[1]。其发病机制是α-珠蛋白基因的缺失或点突变使珠蛋白基因的表达受到抑制，引起α-珠蛋白链合成的减少甚至完全不能合成，导致溶血性贫血。广东、广西等省的α-地贫分子流行病学特征已经阐明[2-3]，但贵州α-地贫发生率及突变类型尚未见报道。本文对165例经本院确诊的α-地贫基因携带者和患者的基因型进行分析，初步了解贵州地区α-地贫的基因型分布情况。现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2008年11月至2014年1月在本院就诊，经地贫筛查发现为地贫表型阳性，血红蛋白电泳提示可能为α-地贫的患者，或有α-地贫阳性家族史，需进一步确诊者，共753例，均为贵州户籍，其中男397例，女356例，年龄2个月至77岁。

1.2 α-地贫筛查方法 采用红细胞指数分析结合血红蛋白（hemoglobin，Hb）结果进行筛查。平均红细胞体积（mean corpuscular volume，MCV）＜82fL和（或）平均血红蛋白水平（mean corpuscular hemoglobin，MCH）＜27pg，血清铁和铁蛋白正常者为地贫表型阳性。同时，血红蛋白A2（HbA2）≤2.5%，或检出HbBarts或HbH，拟诊为α-地贫。

1.3 基因诊断 对α-地贫表型阳性者，抽取外周静脉血2 mL，提取DNA用于α-地贫基因诊断。基因诊断试剂购自深圳益生堂生物企业有限公司，PCR扩增采用E-Cycler TM 96仪（北京博奥生物有限公司），PCR产物电泳结果用Syngene凝胶成像系统分析。应用跨越断裂位点聚合酶链反应（Gap-PCR）检测3种常见的α-珠蛋白基因缺失突变（--SEA、-α4.2和-α3.7），反向点杂交（reverse dot blot，RDB）技术检测3种常见的α-珠蛋白基因点突变（αCS、αQS和αWS），操作步骤按试剂盒说明书进行。

2 结果

2.1 阳性检出率 753例受检者中共检出α-地贫165例，男89例，女76例，阳性检出率为21.91%。

2.2 α-地贫基因型分析 共检出11种α-地贫的基因型，其中--SEA／αα标准型105例，占63.64%，见表1。检出基因突变类型5种，以--SEA最多见，占64.77%，两种点突变类型共占3.62%，见表2。

表1 165例α-地贫基因型分布

2.3 αβ复合型地贫 共检出4例αβ复合型地贫，基因型为--SEA／αα复合βCD17／βN2例，-α3.7／αα复合β654-Ⅱ／βN1例，-α3.7／αα复合βCD41-42／βCD41-421例。前3例临床上均表现为轻度贫血，其中HbA2正常1例，升高2例，HbBarts阳性1例。第4例为1岁男性患儿，Hb 94.0g／L，HbF 89.9%，临床上表现为重型β-地贫。

表2 α-地贫基因突变类型分布

3 讨论

我国南方地区是α-地贫的高发区，尤其以广西、广东两省发病率最高，分别为17.55%[4]和12.03%[5]。本课题组前期采用脐血血红蛋白电泳的方法，对贵州贵阳地区的1 219例新生儿进行α-地贫筛查，其发生率为2.95%[6]。这是目前惟一关于贵州地区α-地贫发病率的调查结果。由于贵阳位于贵州的中部，这一调查结果不能反映整个贵州地区α-地贫的发生率。与广西接壤的贵州南部地区的α-地贫发生率可能会高于这一数据。因此，贵州地区准确的α-地贫发生率，有待于进一步开展系统完整的分子流行病学调查研究才能明确。同时，还要系统了解贵州地区的α-地贫基因突变类型，有助于指导本地区α-地贫的防控。

本研究对165例α-地贫患者及携带者的基因突变类型进行分析，初步了解贵州地区α-地贫的基因突变类型及分布情况。本研究显示：在165例α-地贫患者或携带者中，静止型32例，标准型113例，中间型20例，分别占19.39%、68.48%和12.12%。共检测出11种基因型，其中以--SEA／αα最多，占64.77%，其次是-α3.7／αα、--SEA／-α3.7、-α4.2／αα和--SEA／-α4.2分别占12.73%、7.27%、5.45%、4.24%，与国内其他地区的报道基本一致[7]。检出的5种突变类型中，3种缺失型突变--SEA、-α3.7、-α4.2分别占64.77%、22.28%、9.33%，其中以--SEA最常见，与国内其他地区的突变类型一致[8-9]；点突变αCSα、αQSα仅占2.59%和1.03%。由于本研究的病例来源仅限于就诊于贵州省人民医院的患者，这一调查结果仅是初步反映贵州地区α-地贫的突变类型及分布频率。

本研究检测出4例αβ复合型地贫，低于文献报道的1.58%[10]，这可能与检测人员对αβ复合型地贫的认识不够有关，部分αβ复合型地贫未被检测出。这4例病例均符合小细胞低色素贫血，并伴Hb电泳异常。而αβ复合型地贫患者无论与α-地贫或β-地贫携带者婚配，都有1／4的风险生育重型或中间型地贫。例如本研究的第4例患儿，基因型为-α3.7／αα复合βCD41-42／βCD41-42，从基因型可以初步推测此患儿的父母一方为αβ复合型地贫，另一方为β-地贫携带者。因此，在地贫高发区，要重视αβ复合型地贫的检测，对防止重型和中间型地贫患儿的出生有重要的意义。

本研究初步获得了贵州地区α-地贫基因的突变类型及其分布频率，为本地α-地贫的防治提供了有价值的基础数据，对α-地贫的产前筛查和产前诊断具有重要的指导意义。

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