调节免疫力口服液的研制

吴 丹，唐丽君，王 杉，聂仁昌

(1 江西省药品审评中心，南昌 330046;2 江西省产品质量监督检测院，南昌 330029;3江西省疾病预防控制中心，南昌 330029;4江西巨日生物技术有限公司，南昌 330200)

免疫力低下严重危害着现代人类健康，均衡营养可提高自身免疫力。西洋参、虫草、灵芝均有增强免疫力的功效。张佳丽［1］研究表明，将西洋参、冬虫夏草、灵芝联合使用比单独使用这些药物有更好的免疫调节作用。药理研究表明，西洋参的主要活性成分有西洋参皂苷，西洋参多糖等，对免疫、抗肿瘤、抗衰老等有显著的功效［2-4］。灵芝主要的免疫调节作用包括促进增殖，对造血干细胞的刺激作用和激活免疫效应细胞活性［5］。冬虫夏草可激活增强单核-巨嗜细胞的系统的非特异性免疫作用和自然杀伤细胞的活性，对体液免疫功能也有调节作用［6，7］。由于野生虫草过度采挖、价格高昂，市面上出现的西洋参、冬虫夏草、灵芝复方保健食品不能满足广泛需求，本文以发酵虫草代替野生虫草，开发出以西洋参、发酵虫草菌多糖粉、灵芝为主要原料的具有调节免疫力功能的保健食品，并且该品种已经通过保健食品注册。

1 材料与仪器设备

1.1 材料

原料:西洋参(2010 版药典)、灵芝(2010 版药典)、发酵虫草菌多糖粉(Q/ZWZ 002—2009);辅料:低聚异麦芽糖(GB/T20881—2007)、西洋参香精(QB/T1505—2007)、纯化水。

1.2 仪器与设备

725 型分光光度计、Agilent 1200 型高效液相色谱仪、酶标仪、pH 计等。

生产设备:中药多功能提取回流浓缩机组、配料罐、全自动液体灌封机、灭菌柜、纯化水制备设备等。

2 配方的确定

西洋参、灵芝、发酵虫草菌多糖粉均是可以用于保健食品的原料。车振明［8］研究表明，人工培育的蛹虫草纯子实体在剂量达到2.5g/(kg·bw)的条件下，作为食品食用是安全的。姜文玲［9］研究表明，灵芝提取液无亚慢性毒性，最大无作用剂量大于20g/kg。西洋参总皂甙LD50≥5g/kg［10］。

通过研究确定，西洋参用量区间为2～3g/d、灵芝用量区间为4～6g/d、发酵虫草菌多糖粉用量区间为2～3g/d。

3 试验方法

3.1 工艺流程

药材提取:西洋参、灵芝加水煎煮→过滤→浓缩→醇沉→滤过→回收乙醇。

制剂配制:配制→滤过→半成品检验→灌装→灭菌→清洗→灯检→成品检验。

3.2 操作要点

(1)药材提取

煎煮:西洋参和灵芝加纯化水煎煮3 次，每次加8倍量水，煎煮1.5h，煎煮液滤过，将3 次滤液合并，药渣滤除，滤液备用。

浓缩:将滤液70℃减压(真空度－0.07～－0.08MPa)浓缩，至1∶1 (药液体积与药材重量比)，备用。

醇沉:浓缩液放冷，逐步加入食用酒精(含乙醇量95%)，慢加快搅，至含醇量达到55%。醇沉液静置24h，备用。

滤过:取醇沉的上层液，板框(200 目)滤过，醇沉液底部沉淀弃去，滤液备用。

回收乙醇:70℃减压(真空度－0.07～－0.08MPa)浓缩回收乙醇，并浓缩至药液相对密度为1.03～1.07，备用。

(2)制剂生产

配制:取低聚异麦芽糖和发酵虫草菌多糖粉，分别加总体积20%的纯化水，加热(90℃)搅拌使溶解，放冷，备用。加入药材提取液，搅拌混匀，加西洋参香精同时加纯化水至全量，搅拌混匀，为粗制液，备用。

滤过:去粗制液板框(200 目)滤过，备用。

半成品检验:对感官、pH 值、可溶性固形物等项目进行检测。

灭菌:灭菌温度105℃、灭菌时间45min。

3.3 功效成分的稳定性试验

对加工出的3 个批次口服液进行加速稳定性研究，其标志性功效成分变化如图1、图2。总皂苷、腺苷测定值变化在6.0%以内，未超出检测方法误差范围。因此，上述工艺加工出的口服液中标志性成分稳定性较好。

图1 3 个批次口服液加速试验中总皂甙含量的变化

图2 3 个批次口服液加速试验中腺苷含量的变化

4 安全性毒理学及功能评价

4.1 安全性毒理学评价

急性经口毒性研究表明，本品最大耐受剂量大于20.0mL/(kg·bw)(相当于人体推荐量的200 倍)，属于无毒级。三项遗传毒性试验结果均为阴性。30d 喂养试验期间，动物生长发育良好，各生理生化指标与对照组比较均无显著差异。大体解剖和组织病理检查均未见异常，提示口服液的最大无作用剂量大于10.0mL/(kg·bw)，为人体推荐量的100 倍。

4.2 调节免疫力功能评价

取去糖2 倍浓缩液作为受试样品，设置2.1、4.2、12.6 mL/kg 3 个剂量组给小鼠连续灌胃30d 后进行免疫指标测试。小鼠淋巴细胞转化试验、迟发型变态反应、HC50、抗体生成细胞小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能试验测定结果均为阳性，小鼠碳廓清试验结果为阴性，提示口服液具有调节免疫力功能。

5 产品质量指标

口服液为深棕色。微生物和重金属指标符合国家标准规定。标志性成分:腺苷含量≥7.81 mg/100mL、总皂苷含量(以人参皂苷Re 计)≥34.6 mg/100mL、可溶性固形物≥10%、pH 值3.5～5.5。

6 结论

口服液生产工艺可行、稳定，标志性成分在加速试验中有良好的稳定性。口服液经过毒理安全性评价证明安全，功能研究证明其具有调节免疫力功效，其各项理化指标和微生物指标均符合国家标准规定，标志性成分含量满足产品安全有效要求。

［1］张佳丽，杨睿悦，王楠，李勇.参灵草复合粉增强小鼠免疫功能的实验研究［C］.北京市营养学会第四届会员代表大会暨膳食及健康研讨会论文集，2010:62-66.

［2］王红梅，马玲.西洋参的免疫调节作用研究进展［J］.中国食品卫生杂志，2002，14(5):43-45.

［3］易骏.国内西洋参抗衰老作用机制的研究概况［J］.福建教育学院学报，2000，4:94-96.

［4］史艳宇，李红，杨世杰.西洋参有效部位的抗肿瘤作用研究［J］.中国药理学通报，2005，21(1):75-78.

［5］李秀芬，强玉丰，仪慧兰.灵芝水提液对小鼠免疫功能的增强作用［J］.山西大学学报(自然科学版)，2004，27(1):62-64.

［6］张书超，秦晓红，于新.冬虫夏草药理作用的研究进展［J］.中国医药导报，2008，5(14):16-17.

［7］李锋.冬虫夏草免疫抑制作用研究现状［J］.川北医学院学报，2001，16(2):108-110.

［8］车振明.人工培育的蛹虫草纯子实体食用安全性研究［J］.食用菌，2003，3:45-46.

［9］姜文玲.灵芝液安全性毒理学评价［J］.职业与健康，1994，4:51-13.

［10］郭生桢.西洋参总皂甙毒理实验(摘要) ［J］.人参研究，1995，2:15.