HPLC法同时测定清胃黄连丸中5种成分的含量

2015-03-09毛爱丽鹤壁市食品药品检验所河南鹤壁458030

中国药房 2015年33期

毛爱丽（鹤壁市食品药品检验所，河南鹤壁 458030）

清胃黄连丸是由黄连、桔梗、甘草、栀子、黄芩、赤芍、地黄、牡丹皮、知母、黄柏等14味药材组成的中药复方制剂，具有清胃泻火、解毒消肿之功效，临床用于治疗肺胃火盛所致的口舌生疮、齿龈、咽喉肿痛[1]。2010 年版《中国药典》（一部）收载了该制剂，并对制剂中黄连、黄柏所含的盐酸小檗碱的含量测定进行了规定[1]，但仅控制单一成分的含量很难保证复方制剂的质量[2]。为了更好地对制剂质量进行控制，笔者参阅相关文献[3-7]，选择了栀子、赤芍、黄连、黄柏、黄芩、牡丹皮6种中药材中的5种主要成分进行质量分析，为提高清胃黄连丸的质量控制提供理论依据。

1 材料

1.1 仪器

LC-2010C 型高效液相色谱（HPLC）仪，包括UV-240 型分光光度计（日本岛津公司）；AE 240 型电子分析天平（瑞士Mettler-Toledo 公司）；SC-3610 型低速离心机（安徽中科中佳科学仪器有限公司）；FW-100型高速万能粉碎机（北京科伟永兴仪器有限公司）。

1.2 药品与试剂

清胃黄连丸（山西旺龙神农药业有限公司，批号：20140706、20140908、20141110，规格：9 g/袋）；盐酸小檗碱对照品（批号：110713-200609，纯度：98.1%）、丹皮酚对照品（批号：110708-200506，纯度：100%）；栀子苷对照品（批号：110749-201115，纯度：99.7%）、黄芩苷对照品（批号：110715-200413，纯度：100%）、芍药苷对照品（批号：110736-201337，纯度：94.9%）均购自中国食品药品检定研究院；乙腈、磷酸为色谱纯，水为纯化水。

1.3 饮片

黄连、桔梗、甘草、栀子、黄芩、赤芍、地黄、牡丹皮、知母、黄柏、连翘、石膏、天花粉、玄参饮片均购于鹤壁市天宝医药连锁有限责任公司总店，批号：20150312）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：乙腈（A）-0.3%磷酸（B），梯度洗脱（0～10 min，12%A；10～22.5 min，12%→14%A；22.5～23 min，14%→24%A；23～38 min，24%A；38～38.5 min，24%→38%A；38.5～55 min，38%A）；流速：1.0 ml/min；检测波长：238 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μl。在上述色谱条件下进样测定，理论板数均大于5 000，分离度均大于1.5，各成分基线分离良好。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.对照品；B.供试品；C.缺栀子的阴性对照；D.缺赤芍、牡丹皮的阴性对照；E.缺黄柏、黄连的阴性对照；F.缺黄芩的阴性对照；1.栀子苷；2.芍药苷；3.盐酸小檗碱；4.黄芩苷；5.丹皮酚Fig 1 HPLC chromatogramsA.reference substance；B.test sample；C.negative control without Gardenia jasminoides；D.negative control without Radix paeoniae and Cortex moutan；E.negative control without Cortex phellodendri and Coptis chinensis；F.negative control without Scutellaria baicalensis；1.geniposide；2.paeoniflorin；3.berberine hydrochloride；4.baicalin；5.paeonol

2.2 溶液的制备

2.2.1 混合对照品贮备液精密称取栀子苷对照品30.82 mg、芍药苷13.83 mg、盐酸小檗碱对照品46.36 mg、黄芩苷对照品52.13 mg、丹皮酚对照品11.14 mg，置于同一100 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，摇匀，得栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、丹皮酚质量浓度分别为0.308 2、0.138 3、0.463 6、0.521 3、0.111 4 mg/ml的混合对照品贮备液。

2.2.2 供试品溶液取样品适量，粉碎，过3 号筛，取细粉，精密称取0.5 g置于具塞锥形瓶中，加甲醇25 ml，精密称定质量，超声（功率：250 W，频率：40 kHz，下同）提取20 min，密闭放置4 h，加热回流30 min，放冷至室温，补足减失的质量，摇匀，以半径为16 cm、3 000 r/min 离心5 min，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性对照溶液按清胃黄连丸的处方和制备工艺分别制备缺黄柏、黄连、栀子、黄芩、赤芍、牡丹皮的单一阴性对照样品，再按“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 线性关系考察

精密量取“2.2.1”项下混合对照品贮备液5.0 ml，共5份，分别置于10、25、50、50、100 ml量瓶中，加流动相定容，制成系列混合对照品溶液。精密吸取上述系列混合对照品溶液各10 μl，按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。以质量浓度（x，μg/ml）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，得栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、丹皮酚回归方程分别为y＝15 209x－1 157（r＝0.999 8）、y＝13 377x－166 507（r＝0.999 9）、y＝38 995x－53 991（r＝0.999 8）、y＝13 526x－16 417（r＝0.999 9）、y＝20 310x－3 885（r＝0.999 9）。结果表明，栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、丹皮酚检测质量浓度线性范围分别为15.36～153.6、6.56～65.6、22.74～227.4、26.06～260.6、5.57～55.7 μg/ml。

2.4 精密度试验

取“2.2.1”项下混合对照品溶液适量，按“2.1”项下色谱条件连续进样测定6 次，记录峰面积。结果，栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、丹皮酚峰面积的RSD 分别为0.5%、0.6%、0.3%、0.4%、0.5%（n＝6），表明仪器精密度良好。

2.5 稳定性试验

取同一供试品溶液（批号：20140706）适量，分别于放置0、2、4、8、12 h时进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、丹皮酚峰面积的RSD 分别为0.6%、0.8%、0.7%、0.6%、1.0%（n＝5），表明供试品溶液在12 h内基本稳定。

2.6 重复性试验

精密称取同一批样品（批号：20140706）适量，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，记录峰面积。结果，栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、丹皮酚峰面积的RSD 分别为0.6%、0.7%、0.4%、0.5%、0.7%（n＝5），表明本方法重复性良好。

2.7 加样回收率试验

取样品（批号：20140706）适量，共6份，分别加入一定质量的对照品，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算样品含量，并计算加样回收率，结果见表1。

2.8 样品含量测定

取3 批样品各适量，分别按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，再按“2.1”项下色谱条件进样测定，计算样品含量，结果见表2。

3 讨论

笔者取栀子苷、芍药苷、盐酸小檗碱、黄芩苷、丹皮酚对照品各适量，分别用甲醇溶解，在分光光度计200～400 nm 波长处扫描，结果5种成分的最大吸收各不相同，分别在238、230、229、278、275 nm浓长处。其中，在238 nm波长处为栀子苷的最大吸收，而且其他成分在该波长处均有较好的吸收，故选择238 nm为测定波长。