戒断对吗啡成瘾大鼠活动性的影响研究

崔跃 李欣欣 崔皓哲 徐畅

戒断对吗啡成瘾大鼠活动性的影响研究

崔跃 李欣欣 崔皓哲 徐畅

目的观察戒断对吗啡成瘾大鼠活动性的影响。方法20只大鼠随机分为对照组和吗啡组, 每组10只。用条件性位置偏爱实验(CPP)检测大鼠成瘾及活动性的变化。结果经皮下注射吗啡7 d 建立大鼠CPP模型, 与对照组比较, 吗啡组在伴药箱停留时间增加, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。自然戒断7 d 后, 与对照组比较, 吗啡组穿梭次数明显增加, 差异具有统计学意义 (P＜0.05)。结论吗啡诱导大鼠CPP模型建立成功, 自然戒断7 d后活动性增强, 提示吗啡及其运动效应之间的关系, 可能是大鼠觅药行为的具体表现之一。

吗啡；条件性位置偏爱；活动性

药物成瘾是一种慢性复发性脑疾病, 有其复杂的神经生物学基础[1]。成瘾物质的反复使用, 可以增强模型动物的运动敏感化, 这是成瘾物质的共有特征之一[2,3]。动机敏化理论认为反复使用致成瘾物质, 将使与成瘾动机有关的神经环路出现敏化, 进而表现出对成瘾药物的持续渴求, 成瘾药物导致的行为敏化被认为是成瘾后复吸的重要原因之一[3,4]。本研究利用条件性位置偏爱实验检测吗啡自然戒断对大鼠运动活性的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 健康雄性SD大鼠20只(由沈阳医学院实验动物中心提供), 平均体重(225±25)g；盐酸吗啡(青岛制药厂有限公司, 中国)。

1.2 方法

1.2.1 分组 大鼠随机化分为对照组和实验组, 每组10只,分笼饲养, 自由进食饮水。

1.2.2 主要仪器设备 条件性位置偏爱箱(CPP箱)：CPP箱由两个规格相同(长53 cm, 宽30 cm, 高30 cm)的隔音箱组成。中间有挡板, 可以抽拉。挡板底端有小门, 动物可自由穿梭, 测试时用。另有一套无小门挡板, 实验训练用。其中一个箱子为黑色, 地板为网格状, 另一个箱子为白色,地板为条纹状。箱体的上方有摄像头, 可以记录动物活动情况。

1.2.3 CPP模型制备及戒断后运动活性检测 CPP模型制备分3个阶段[5,6]。预测试阶段：建立模型之前, 连续3 d ,每天8:00, 让大鼠自由穿梭于两个箱体15 min(900 s), 第3天记录大鼠在两个箱体停留的时间, 确定其天然偏好。以大鼠非天然偏好箱为伴药箱, 天然偏好箱为非伴药箱。训练阶段：用替代挡板封闭两箱通道, 吗啡组动物8:00皮下注射吗啡(10 mg/kg), 随即放入伴药箱30 min；16:00皮下注射等量的生理盐水, 随即放非伴药箱30 min,1次/d。对照组除将吗啡替换为生理盐水之外, 其他训练相同。连续训练6 d 。测试阶段：第7天进行训练后测试, 将有小门的挡板置于两箱之间,未做任何处理的大鼠放入箱内, 让其自由活动15 min(900 s),记录其在右箱(伴药箱)停留时间和穿梭次数。位置偏爱指标：右箱(伴药箱)停留时间(Time spent in the white chamber, TW)；运动活性检测指标：大鼠停药后戒断1周(第14天)进行运动活性检测。检测指标为穿梭次数(Shuttle times, ST),大鼠从一侧箱子移动到另一侧箱子则判定穿梭1次, 累计得到穿梭次数。

1.3 统计学方法 采用SPSS16.0统计学软件进行统计分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示, 对方差齐性的指标用单因素方差分析, LSD-t检验进行均数间的多重比较；对方差不齐的指标采用Kruskal-Wallis非参数检验, Mann-Whitney U法进行两两比较的秩和检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

经过CPP训练, 第7天测试, 吗啡组大鼠在伴药箱停留时间明显高于对照组, 差异具有统计学意义(P＜0.05), 提示吗啡诱导的大鼠CPP模型建立成功。大鼠停药后戒断1周(第14天)进行运动活性检测, 与戒断前的活动性比较, 明显增强, 差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 两组大鼠吗啡成瘾及戒断后条件性位置偏爱和运动活性情况比较(±s)

表1 两组大鼠吗啡成瘾及戒断后条件性位置偏爱和运动活性情况比较(±s)

注：与对照组比较,aP＜0.05；与第1天比较,bP＜0.05

时间 对照组 时间 吗啡组右箱停留时间(s) 穿梭次数(次) 右箱停留时间(s) 穿梭次数(次)第1天 146.776±30.85 22.7±5.85 第1天 152.004±26.07 26.3±6.85第7天 139.950±18.18 16.6±6.95 第7天 396.330±67.03a 22.1±12.75第14天 143.824±22.62 18.4±4.35 第14天 192.327±87.85 39.3±6.80bF 0.196 2.905 χ2 19.667 12.896 P 0.823 0.072 P 0.000 0.000

3 . 小结

条件性位置偏爱实验是用于评价药物成瘾性的经典实验模型[7], 广泛用于评价药物的精神依赖情况。该实验的基本原理是将实验动物置于条件性位置偏爱箱的白箱, 并给予精神依赖性药物, 经过几次训练后, 观察实验动物在条件性位置偏爱箱的活动情况。实验观察指标有位置偏爱指标, 即伴药箱停留时间；运动活性指标, 即穿梭次数, 其检测结果与药物的精神依赖性相关。

本研究检测了吗啡成瘾及戒断后大鼠条件性位置偏爱和运动活性情况, 结果显示经训练后, 成瘾大鼠在伴药箱停留时间明显增加。自然戒断后1周, 其运动活性明显增强。成瘾敏感化理论认为, 成瘾物质可以诱发运动敏感化, 从而引起强迫性觅药行为, 进而产生复吸行为[2,3]。实验结果提示了吗啡及其运动效应之间的关系, 如果能深入研究其内在机制, 将对研究成瘾后复吸提供有益的线索。

[1]Merighi S, Gessi S, Varani K, et al. Morphine mediates a proinflammatory phenotype via μ-opioid receptor-PKCε-Akt-ERK1/2 signaling pathway in activated microglial cells. Biochem Pharmacol,2013,86(4):487-496.

[2]Robinson TE, Berridge KC. The neural basis of drug craving: an incentive-sensitization theory of addiction. Brain Res Brain Res Rev,1993,18(3):247-291.

[3]Robinson TE, Berridge KC. Addiction. Annu Rev Psychol,2003(54):25-53.

[4]Vezina P. Sensitization of midbrain dopamine neuron reactivity and the self-administration of psychomotor stimulant drugs. Neurosci Biobehav Rev,2004,27(8):827-839.

[5]Niwa M, Nitta A, Mizoguchi H, et al. A novel molecule «shati» is involved in methamphetamine-induced hyperlocomotion, sensitization, and conditioned place preference. J Neurosci,2007,27(28):7604-7615.

[6]邵晓霞, 李洁, 何繁漪, 等. 吗啡诱导条件位置性偏爱大鼠海马CA1区NR2A、NR2B的变化. 昆明医科大学学报,2013,34(6):17-20.

[7]张开镐. 评价药物精神依赖性的试验方法(二). 中国药物依赖性杂志,2000,9(3):172-173.

Influence research of abstinence on mobility in rats with morphine addiction

CUI Yue, LI Xin-xin, CUI Hao-zhe, et al. School of Basic Medicine of Shenyang Medical College, Shenyang110034, China

ObjectiveTo observe influence of abstinence on mobility in rats with morphine addiction.MethodsA total of20 rats were randomly divided into control group and morphine group, with10 cases in each group. Conditioned place preference (CPP) was applied to detect changes of addiction and mobility of rats.ResultsRats CPP model was established by subcutaneous injection of morphine for7 d. Compared with the control group, the morphine group had increased residence time. Their difference had statistical significance (P＜0.05). After7 d of natural abstinence, the morphine group had obviously more shuttle times than the control group. Their difference had statistical significance (P＜0.05).ConclusionAfter successful CPP model establishment of morphine addiction rats and7 d of natural abstinence, increased mobility indicates that the correlation between morphine and motion effect can be one of the specific manifestations of drug-seeking behavior.

Morphine; Conditioned place preference; Mobility

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2015.16.190

2015-03-30]

国家自然科学基金资助(项目编号：81441110)；辽宁省教育厅科学研究一般项目(项目编号：L2014405)；沈阳医学院博士科研启动基金(项目编号：20133049)

110034 沈阳医学院基础医学院