腹腔神经丛阻滞对肝部分切除术后大鼠肾功能的影响



·论著·

腹腔神经丛阻滞对肝部分切除术后大鼠肾功能的影响

车建翔,邱庆明,倪俊,李军

[摘要]目的观察腹腔神经丛阻滞(NCPB)对肝部分切除术(PH)大鼠术后肾功能的影响。方法分别于雄性SD大鼠肝脏左、中叶根部结扎、切除,构建经典大鼠PH模型,然后随机分为对照组和NCPB组。NCPB组在术后12 h开始予0.5%利多卡因1 ml行双侧经皮NCPB,1次/d,连续7 d；对照组以0.9%生理盐水代替。分别于术后第1、3、7 d,NCPB后30 min测定大鼠肾功能、肾脏组织超微结构、肾血流灌注及肾脏总抗氧化能力(T-AOC)。结果NCPB组血尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)在PH术后第1、3 d显著低于对照组(P<0.05或P<0.01),第7 d两组的BUN 和Cr差异无统计学意义；在术后第1、3和7 d,NCPB组肾血流量在各时间点均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)；在术后第1、3和7 d,NCPB组的肾组织T-AOC各时间点均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01)；而术后肾组织超微结构的改变NCPB组明显轻于对照组,其恢复也早于对照组。结论NCPB能够减轻PH术后大鼠的肾脏损害,可能与增加肾血流灌注,减轻肾脏组织的氧化应激反应有关。

[关键词]腹腔神经丛阻滞；肝切除；肾功能；氧化应激

腹腔神经丛是人体内最大的自主神经丛,目前临床上腹腔神经丛阻滞(neurolytic celiac plexus block,NCPB)主要用于治疗慢性顽固性腹痛[1]。在前期研究中发现,大鼠行肝部分切除术(partial hepatectomy,PH)术后,NCPB能减轻全身性炎症反应综合征(SIRS)的发生、发展,从而明显改善肝功能[2-3]。大量临床观察发现,严重的肝外伤后机体容易并发急性肾功能损害,本研究拟通过观察NCPB对大鼠肝部分切除术后肾功能的影响,初步探讨其保护作用及机制。

1材料与方法

1.1动物及分组60只健康清洁SD雄性大鼠,3月龄,平均体重(210±15)g,自由进食、饮水,由第三军医大学大坪医院实验动物中心提供(医动字第24301045)。行大鼠肝左叶、中叶根部结扎、切除,构建大鼠70%肝脏部分切除术模型(PH模型)[4],后随机分为对照组和NCPB组,每组各30只。NCPB组在术后12 h给予双侧0.5%利多卡因1 ml经皮行NCPB,1次/d；而对照组以生理盐水代替。大鼠经皮NCPB方法参照文献[2]。

1.2检测指标

1.2.1肾功能PH术后1、3和7 d,在乙醚麻醉下,各分别取5只大鼠静脉血,自然沉积分离血清,取1 ml,送成都军区总医院检验科全自动生化仪(Olympus AU2700)测定尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)。

1.2.2肾血流量采用放射性生物微球法[5]测定双肾血流量。事先以99Tcm标记蟾蜍红细胞作为生物微球。NCPB后30 min,乙醚麻醉、固定大鼠,分离同侧颈总动脉和股动脉并插入左心室导管和股动脉插管。取标记好的蟾蜍红细胞悬液1 ml,经左心室导管在30 s内匀速注入左心室,在注射生物微球前10 s开始从股动脉以约1 ml/min的恒速抽血1 ml,作为参考血样本。大鼠在注入微球后处死,测定肾组织重量,并用γ计数仪(GC-911,中佳光电公司)分别测定参考血样本及肾组织的放射活性,按Domenech公式计算肾组织血流量,即：肾组织血流量[ml/(min·g)]= 参考血样本流速(ml/min)×肾组织放射活性(cpm)/参考血样本放射活性(cpm)/肾组织重量(g)。

1.2.3肾组织总抗氧化能力(T-AOC)取大鼠双肾,称重,用生理盐水按10%组织溶液在冰浴中匀浆,4 ℃下1500 r/min离心10 min,取上清,按试剂盒(南京建成生物工程研究所)操作说明检测。按照公式计算总抗氧化能力：T-AOC[IU/(mg·pro)]=[(测定管OD值-对照管OD值)/0.01]/ 30×(反应液总体积/取样量)×样品测试前的稀释倍数/所测样本蛋白含量(mg)。

1.2.4肾组织超微结构观察在PH术后第1 d、3 d、7 d行NCPB后30 min,断头处死大鼠,取肾组织约 0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm,3%的戊二醛固定液预固定,1%四氧化锇再固定,丙酮逐级脱水,EPON 812包埋,作1 μm半薄切片光学定位,作50~80 nm超薄切片,醋酸铀和枸橼酸铅双重染色,H600-Ⅳ型透射电子显微镜观察。

2结果

2.1NCPB对PH术后大鼠肾功能的影响经NCPB处理后,NCPB组大鼠血BUN在1 d和3 d后均显著低于对照组(P<0.05或P<0.01)；血Cr在1 d和3 d也显著低于对照组(P<0.01)；在PH术后7 d,两组的血BUN和Cr相比无显著性差异(P>0.05),见表1。

2.2NCPB对PH大鼠肾血流量的影响与对照组相比,NCPB组大鼠的肾脏血流量在PH术后1、3和7 d均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01,表2)。

2.3两组肾组织T-AOC比较与对照组相比,NCPB组大鼠的肾脏T-AOC在PH术后1、3和7 d均显著高于对照组(P<0.05或P<0.01,表2)。

2.4 NCPB对PH术后大鼠肾组织超微结构的影响对照组在PH术后1 d和3 d,肾小管上皮细胞线粒体肿胀,粗面内质网扩张,细胞核染色质轻度聚集；在术后7 d时超微结构恢复正常。NCPB组在PH术后1 d肾小球结构正常,仅肾小管上皮细胞内线粒体轻度肿胀,而在术后3 d和7 d均恢复正常。见图1。

图1　PH术后大鼠肾组织超微结构(×8000)

A、B、C分别为对照组1、3、7 d；D、E、F分别为NCPB组1、3、7 d

表1　PH术后不同时间两组大鼠肾功能的变化(n=5)

注：与对照组相比,①P<0.05,②P<0.01

表2　PH术后两组大鼠肾血流量和肾组织T-AOC比较(n=5)

注：与对照组相比,①P<0.05,②P<0.01

3讨论

严重的肝外伤及某些复杂的肝脏手术后,由于有效循环容量减少,体内血流再分布,全身炎症反应等因素的影响,导致肝脏以外的心、肺、肾等远隔重要脏器的损害,而肾脏往往是最早受影响的器官之一[6-7]。肾脏作为维持内环境稳定的重要器官,一旦发生损伤,患者的预后将受到严重影响[8]。因此,如何降低严重肝外伤、肝叶切除等大型手术术后急性肾损伤的发生具有重要意义。前期研究发现,NCPB能改善PH术后大鼠的残肝血流灌注,从而明显改善肝功能。该研究进一步发现NCPB处理可显著降低PH术后大鼠血清BUN和Cr,表明NCPB对PH大鼠术后的肾功能具有一定保护作用。PH术后一方面由于失血、脱水等因素使机体处于低血容量状态,肾素-血管紧张素-醛固酮系统分泌增多,引起肾血管收缩；另一方面由于疼痛、炎症等因素使交感-肾上腺髓质系统过度兴奋,引起肾血管痉挛,从而导致肾功能不全。通过放射性微球免疫法测定大鼠PH术后肾组织血流量,发现以0.5%利多卡因NCPB处理可显著增加大鼠PH术后肾血流量。进一步通过电镜检测肾组织的超微结构也发现PH术后大鼠肾小管上皮细胞线粒体肿胀,粗面内质网扩张,而NCPB处理可显著减轻肾组织病理学改变程度,表明NCPB增加PH术后大鼠肾脏的血流灌注、减轻肾组织缺血缺氧程度可能是NCPB改善PH大鼠术后肾功能的重要原因。

机体T-AOC的变化能较好反映组织氧化应激损伤的程度[9]。当机体处于病理状态时,如严重的创伤、休克、缺血-再灌注损伤,可引起氧自由基大量产生[10],而氧自由基清除能力的减弱最终可导致细胞膜脂质过氧化、细胞内Ca2+超载、DNA变性断裂,从而导致组织细胞的损伤和死亡[11]。

综上所述,PH术后NCPB处理可显著提高大鼠的肾组织总抗氧化能力,减轻肾组织氧化应激损伤的程度,可能是NCPB改善PH大鼠术后肾功能的重要原因。

【参考文献】

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Effect of neurolytic celiac plexus block on renal function of rats after partial hepatectomy

Che Jianxiang1,Qiu Qingming1,Ni Jun1,Li Jun21.Department of Anesthesiology,Hospital 44 of PLA,Guiyang,Guizhou,550009,China;2.Department of Anesthesiology,General Hospital of Chengdu Military Command,Chengdu,Sichuan,610083,China

[Abstract]ObjectiveTo observe the effect of neurolytic celiac plexus block(NCPB)on renal function of rats after partial hepatectomy(PH).MethodsLigation and resection were made in the left and middle liver of male SD rates in order to build classical PH model rats,which were then randomly divided into control group and NCPB group.1 ml of 0.5% lidocaine was administered to the rats in the NCPB group for bilateral percutaneous NCPB 12 hours later from the operation,one time per day,for seven successive days.0.9% normal saline was used in the control group,instead.Within 30 min after NCPB on the 1st day,the 3rd day,and the 7th day,the rat renal function,renal tissue ultrastructure,renal blood perfusion and total antioxidant capacity(T-AOC)were determined respectively.ResultsThe postoperative blood urea nitrogen(BUN)and creatinine(Cr)on the 1st day and the 3rd day in the NCPB group were significantly lower than those in the control group(P<0.05 orP<0.01),and on the 7th day,BUN and Cr in the two groups had not statistically significant difference;the postoperative renal blood flows on the 1st day,the 3rd day,and the 7th day in the NCPB group were all higher than those in the control group(P<0.05 orP<0.01),while the changes of postoperative renal tissue ultrastructure in the NCPB group were significantly less than those in the control group,and the recovery was also earlier than that in the control group.ConclusionNCPB can reduce renal damage in rats after PH,which may be associated with renal blood perfusion increase and oxidative stress reduction of renal tissue.

[Key words]neurolytic celiac plexus block;hepatectomy;renal function;oxidative stress

(收稿日期:2014-11-25)

文章编号1004-0188(2015)02-0117-03

doi:10.3969/j.issn.1004-0188.2015.02.001

中图分类号R 614.4

文献标识码A

通讯作者:李军,E-mail:LJ89199@163.com

基金项目:成都军区“十二五”面上课题(C12005)
作者单位:550009 贵阳,解放军44医院麻醉科(车建翔,邱庆明,倪俊)；成都军区总医院麻醉科(李军)