视黄醇结合蛋白、尿微量白蛋白检测诊断糖尿病合并冠心病患者冠状动脉病变程度临床价值

张建兴,江志忠

(南方医科大学第五附属医院心内科，广州 510900)

视黄醇结合蛋白、尿微量白蛋白检测诊断糖尿病合并冠心病患者冠状动脉病变程度临床价值

张建兴,江志忠※

(南方医科大学第五附属医院心内科，广州 510900)

摘要：目的探讨视黄醇结合蛋白(RBP)、尿微量白蛋白(MA)用于预测合并糖尿病的冠心病患者冠状动脉病变程度的可能性。方法选取2013年10月至2015 年5月南方医科大学第五附属医院收治的冠心病合并糖尿病患者43例作为糖尿病组，冠心病未合并糖尿病患者43例作为非糖尿病组，均行冠状动脉造影检查，采用双抗酶联免疫吸附试验法检测血清中RBP 4水平，采用比浊法检测MA水平。结果糖尿病组RBP4和MA水平显著高于非糖尿病组 [(70±15) μg/L比(43±9) μg/L,(68±16) μg/L比(34±10) μg/L]，差异有统计学意义(P<0.05)。糖尿病组患者的冠状动脉病变血管数和冠状动脉病变评分显著高于非糖尿病组 [(2.64±0.84)支比(1.32±0.23)支、(8.2±3.3)分比(5.6±2.8)分]，差异有统计学意义(P<0.05)。联合RBP4和MA与冠状动脉病变血管数呈正相关(r=0.803,0.892,P<0.01)，与冠状动脉病变评分呈正相关(r=0.821，0.874，P<0.05)。结论冠心病合并糖尿病患者的冠状动脉病变程度与RBP和MA密切相关，RBP、MA的检测可为冠心病患者冠状动脉病变程度的诊断提供依据。

关键词：糖尿病；冠心病；视黄醇结合蛋白；尿微量白蛋白；病变程度

糖尿病是一种血糖水平慢性增高的代谢疾病，主要并发症为糖尿病肾病[1-2]。近年来，随着人们生活水平的提高，糖尿病的发生率逐年增长[3]。糖尿病和冠心病关系密切，冠心病大部分是由于冠状动脉粥样硬化所致[4]。糖尿病是引发冠心病的重要因素之一，冠心病合并糖尿病加重患者的冠状动脉病变程度，妨碍冠状动脉侧支循环，使患者病死率上升，并且近年来冠心病合并糖尿病发病年轻化。视黄醇结合蛋白(retinol binding protein，RBP)4属于脂质运载蛋白超家族，负责结合转运维生素A的代谢产物，作为脂肪因子参与胰岛素抵抗，并且用于肝病及肾病的早期诊断[5-7]。尿微量白蛋白(microalbuminuria,MA)指尿中排泄的微量白蛋白，生理条件下尿液中水平较低，是预测糖尿病肾病的指标，能够反映肾脏异常蛋白质渗漏。目前，MA是预测心血管风险的重要指标[8-9]。本研究主要分析RBP、MA水平与冠状动脉病变程度的关系，探讨RBP、MA用于预测合并糖尿病的冠心病患者冠状动脉病变程度的可能性。

1资料与方法

1.1一般资料选取2013年10月至2015 年5月南方医科大学第五附属医院收治的冠心病合并糖尿病患者43例作为糖尿病组，冠心病未合并糖尿病患者43例作为非糖尿病组。其中糖尿病组男22例、女21 例，年龄30~76岁，平均(46±5) 岁；病程7~13年，平均(10.3±1.4)岁；非糖尿病组男20例、女23 例，年龄32~75岁，平均(47±5)岁，病程8~13年，平均(10.2±1.2) 岁；患者均诊断为冠心病，且行冠状动脉造影检查。入选标准：心肌酶谱正常，冠状动脉造影未见显著闭塞病变，发作前后心电图存在明显动态演变。患者均排除心脏瓣膜病，心肌病，体质量过轻，过度肥胖，全身免疫系统疾病，急慢性感染疾病，肿瘤，严重肝肾功能不全。两组患者的性别、年龄、病程等一般资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究经本院伦理委员会审批，患者均签署知情同意书。

1.2血管病变程度判定 采用德国飞利浦HSC型设备，优维显造影剂，Juikin′s导管技术，患者造影导管经右桡动脉进入，多种常规体位投照，造影结果由两位以上专家鉴定。

冠状动脉病变血管数评定标准：左主干病变为双支病变；除此，单支冠状动脉血管内径狭窄程度≥50%为1支血管病变；2支血管内径狭窄程度≥50%为2支血管病变；3支血管内径狭窄程度≥50%为3支血管病变；左主干合并右冠状动脉病变为3支血管病变。

根据美国心脏学会标准[10]将冠状动脉病变评分分为6个等级：5分为狭窄程度99%~100%；4分为狭窄程度90%~98%；3分为狭窄程度75%~89%；2分为狭窄程度50%~74%；1分为狭窄程度25%~49%；0分为狭窄程度≤24%。

1.3实验材料 抗人RBP4抗体(北京博奥森生物技术有限公司)；辣根酶标记的羊抗兔IgG(稀释度为1∶200～500)(北京博奥森生物技术有限公司)；微量移液器(德国艾本德)；UVP凝胶成像系统(美国VILBER LOURM)；DU800核酸蛋白分析仪(美国贝克曼公司)；涡旋混合仪VX-200型(美国莱伯特公司)；离心机3K30型(德国西格玛公司)；超低温冰箱(日本三洋电器集团)；-20 ℃冰箱SCD-2166XZ型(青岛海尔)；电子天平(德国赛多利斯科学仪器(北京)有限公司)；全自动特定蛋白分析仪ARRAY360(美国贝克曼公司)；酶标仪MODEL450(美国伯乐公司)。

1.4检测指标所有患者入院24 h内清晨空腹抽取静脉血5 mL，采用双抗酶联免疫吸附试验法检测血清中RBP4的水平；所有患者入院24 h内清晨留取中段尿5 mL，患者的尿样品不添加防腐剂，采用比浊法检测尿中微量白蛋白的水平。

1.5检测方法

1.5.1RBP4检测采用双抗酶联免疫吸附试验法检测，将患者血液样本置于肝素锂管，混匀，以离心半径12 cm，转速为3000 r/min离心10 min，分离血清，取0.5 mL上清置于聚对苯乙炔管，保存于-80 ℃待测，在酶标板上包埋抗人RBP4单抗，抗人RBP4单抗结合待测样品和标准品，添加生物素化的抗人RBP4抗体，形成免疫复合物，通过辣根酶标记的羊抗兔IgG结合生物素，添加3,3′,5,5′-四甲基联苯胺底物，显蓝色，加入硫酸终止液，显黄色，在波长450 nm处检测样品的光密度值，绘制标准曲线得到样品RBP4浓度，RBP4浓度和光密度值成正比。

1.5.2MA检测采用比浊法检测，将患者的尿液样品以离心半径12 cm，转速为3000 r/min，离心10 min。取10 μL上清置于离心管，加入50 μL抗血清，反应温度为37 ℃，在波长340 nm 处检测样品的光密度值，绘制标准曲线得到样品MA浓度。设备为全自动特定蛋白分析仪ARRAY360，配套试剂和设备均由美国贝克曼公司提供。

2结果

2.1两组患者RBP4和MA水平比较糖尿病组RBP4为(70±15) μg/L，MA为(68±16) μg/L；非糖尿病组RBP4为(43±9) μg/L，MA为(34±10) μg/L，糖尿病组的RBP4和MA水平均显著高于非糖尿病组，差异有统计学意义(t=9.894,11.673,P<0.01)。

2.2两组患者冠状动脉病变程度比较糖尿病组冠状动脉病变血管数为(2.64±0.84)支，冠状动脉病变评分为(8.2±3.3)分；非糖尿病组冠状动脉病变血管数为(1.32±0.23)支，冠状动脉病变评分为(5.6±2.8)分，糖尿病组患者的冠状动脉病变血管数和冠状动脉病变评分均显著高于非糖尿病组，差异有统计学意义(t=9.939,3.898,P<0.01)。

2.3RBP4和MA与冠状动脉病变程度的关系RBP4和MA与冠状动脉病变血管数呈正相关(r=0.803,0.892,P<0.05)，与冠状动脉病变评分呈正相关(r=0.821，0.874，P<0.05)。

3讨论

目前，冠心病是一种长期慢性炎症疾病，冠状动脉粥样硬化是其主要原因[11-12]。动脉粥样硬化的病理过程为：单核细胞长期停留在血管，入侵血管内膜，随后转化成巨噬细胞，导致趋化因子、炎性因子、氧化酶类及细胞外基质等增生，形成血栓，动脉粥样斑块纤维帽被降解，粥样斑块破裂，血栓脱落，血管痉挛，导致急性冠状动脉综合征。目前，预防冠心病是医疗卫生界研究的重要课题。RBP是一种单链蛋白质，属于脂质运载蛋白超家族，负责结合转运维生素A的代谢产物。研究表明，RBP参与胰岛素抵抗，并与血脂异常、糖尿病肾病、体质指数等有关[13-15]。降低血脂能够降低冠心病的发生率，但不能治疗冠心病。2型糖尿病及代谢综合征患者体内RBP4水平上升[16]。MA指尿中排泄的微量白蛋白，白蛋白是血液中的一种正常蛋白质，生理条件下尿液中白蛋白水平较低。研究表明，MA是预测糖尿病肾病的指标，能够反映肾脏异常蛋白质渗漏[15]。糖尿病患者肾小球对白蛋白吸收量降低，使尿中白蛋白水平增加[17]。MA是冠状动脉病变评分的独立因素，并且影响冠状动脉病变血管数。

本研究结果表明，糖尿病组患者的RBP4较非糖尿病组显著上升。糖尿病患者体内存在游离-RBP4正反馈信号，增强肝脏组织释放RBP4，而且糖尿病患者肾小球过滤功能受损，因此，导致血清中RBP4水平上升。糖尿病组患者的MA较非糖尿病组显著上升。一方面由于糖尿病患者血液黏滞，胶原硬化，肾小球过滤功能受损；另一方面，冠心病肾小球血压较高，肾小球对白蛋白吸收量降低，使尿中白蛋白水平增加。糖尿病组患者的冠状动脉病变血管数和冠状动脉病变评分较非糖尿病组均有显著上升。研究表明，高血糖水平对冠状动脉病变起重要作用。高胰岛素血症引起血管内平滑肌细胞增殖，细胞内脂质合成，引发动脉粥样硬化，导致冠心病。RBP4和MA与冠状动脉病变程度呈正相关(P<0.05)，与冠状动脉病变评分均呈正相关(P<0.05)。由此可见，RBP4和MA的诊断有利于早期发现患者病情，并进行干预治疗，延缓患者病情的发生、发展。糖尿病、冠心病早期，患者的体征和临床症状不明显，需要通过实验室检查手段。冠心病等疾病的预测、诊断具有多种途径，冠状动脉造影等技术存在创伤，且费用较高，不能作为常规检测手段。动态心电图等无创检测手段仅能够对部分冠心病预测、诊断。因此，对冠心病患者进行特殊准确的指标检查是非常必要的，这样才能够做到冠心病的早预防、早诊断、早治疗。

综上所述，冠心病合并糖尿病患者的冠状动脉病变程度与RBP和MA密切相关，RBP和MA联合检测可以用于预测冠状动脉病变程度，并且为临床诊断提供依据，为冠心病合并糖尿病患者的及时治疗提供时机。

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The Clinical Value of Retinol Binding Protein, Urinary Albumin Detection for Diagnosis of Severity of Coronary Artery Disease in Diabetes Mellitus Patients with Coronary Heart DiseaseZHANGJian-xing,JIANGZhi-zhong. (DepartmentofCardiology，theFifthAffiliatedHospitalofSouthernMedicalUniversity,Guangzhou510900,China)

Abstract:ObjectiveTo explore the feasibility for retinol binding protein(RBP) and urinary microalbuminuria(MA) to predict the lesion degree in coronary heart disease combined with diabetes mellitus.MethodsA total of 86 patients with coronary heart disease were chosen in the Fifth Affiliated Hospital of Southern Medical University from Oct.2013 to May 2015 as study group.43 cases with diabetes as diabetes group and 43 cases without diabetes as non-diabetes group.They all received coronary angiogram treatment,and enzyme-linked immunosorbent assay(ELISA) was used to measure the plasma concentrations of RBP4;turbidimetry was used to test urinary MA.ResultsSerum RBP4, urinary MA levels of the diabetes group were significantly higher than those in control group [(70±15) μg/L vs (43±9) μg/L,(68±16) μg/L vs (34±10) μg/L](P<0.05).Number and score of coronary artery lesion in diabetes group were significantly higher than those in the control group[(2.64±0.84) vessel vs (1.32±0.23) vessel,(8.2±3.3) point vs (5.6±2.8) point](P<0.05).The serum RBP4,urinary MA levels and lesion blood vessel number of coronary artery disease were positively correlated(r=0.803,0.892,P<0.01).The serum RBP4, urinary MA levels and grade of coronary artery disease were positively correlated(r=0.821，0.874，P<0.05).ConclusionThe lesion degree is closely related to RBP and MA in coronary heart disease combined with diabetes mellitus,which have clinical diagnostic value for the lesion degree of coronary heart disease.

Key words:Diabetes mellitus; Coronary heart disease; Retinol binding protein; Microalbuminuria; Lesion degree

收稿日期：2015-06-24修回日期：2015-07-27编辑：相丹峰

基金项目：广州市医药卫生科技项目(20151A011110)

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.22.045

中图分类号：R587

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)22-4152-03