血液中microRNA-21对肺癌诊断价值的Meta分析

陈 劼

（湖北汉川仙女山医院检验科 431600）

肺癌是全球常见的恶性肿瘤之一［1］，目前肺癌病死率约是40年前的10倍，已成为病死率最高的肿瘤性疾病，其中非小细胞肺癌的5年存活率只有10%～15%［2］。然而，对肺癌的诊断，目前尚缺乏理想的方法。随着人们对微小RNA（microRNA，miR）研究的深入，已有大量文献报道miR-21可作为肺癌诊断的标志物，但其诊断价值评估高低不一。本文拟对miR-21诊断肺癌的文献进行Meta分析，以明确其对肺癌是否具有潜在的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 检索策略 通过中文检索词“miR-21”或“microRNA-21”或“Hsa-mir-21”、肺癌、血液或血浆或血清，英文检索词miR-21 or microRNA-21or Hsa-mir-21、lung、cancer or carcinoma or tumor or neoplasm or cancers、serum or sera or serums or blood or plasma，于2014年1月10日检索中国知网、维普、万方、PubMed和Embsase等数据库，并对纳入文献及相关综述的参考文献进行检索，以防止漏检［3］。限制检索文献语种为中文和英文，不限制文献发表时间。

1.2 文献的纳入排出标准 文献纳入标准：（1）文献报道为血液中（包括血浆和血清）的miR-21 对肺癌的诊断，而非其他体液或组织；（2）肺癌诊断的金标准能够明确的区分出肺癌患者和非肺癌的参照者；（3）有明确的阈值或cut-off值；（4）能够从文献报道中直接获得或者计算出诊断性试验的四格表。排出标准：（1）重复发表的文献，对于同一作者相近年份发表的文章，选取最新发表或病例数最多的一篇；（2）不能得到阈值（cut-off值）和诊断性试验四格表的文献，包括向通讯作者写信索取未果或不能通过文中数据推算的文献；（3）小样本（小于30例）研究报告；（4）排出动物试验、综述、系统评价和会议报道。

1.3 数据提取和文献质量评估 对可能符合标准的文献进行资料提取和质量评估。提取基本信息包括：标题、作者、发表年份、实验组和对照组病例数、灵敏度、特异度、RNA 检测的内参、RNA 提取试剂盒和检测探针。通过Quadas对纳入文献进行评估。

1.4 统计学处理 Stata12.0和Meta-DiSc用于纳入文献诊断值的合并，并通过Spearman模型、敏感度分析和Meta回归判断是否存在异质性及异质性的来源，Deek、Egger′s，Bagg′s检验用于发表偏倚判断和评估，以P＜0.05 差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 检索结果和纳入文献的一般情况 从数据库和相关参考文献中共检出994篇文献，通过筛选，有7篇文献（含1 088例样本）符合本次Meta分析的纳入标准，纳入流程见图1［4-10］。纳入文献的基本信息和Quadas质量评估得分情况如表1所示。纳入文献的588例肺癌患者的确诊实验为组织切片病理学检测。miR-21的检测方法均为qRT-RCR，但不同文献所选的内参、RNA 提取试剂和探针不同，其中内参主要分为保守的内源性miRNA（miRNA-16、small nuclear U6BRNA 和miRNA SNORD68）和合成的非内源性miRNA（Cel-miR-39）［11］。Quadas评估最高得分为13分，因未有文献描述金标准组织切片病理学检测和待评价试验（miR-21的qRT-RCR 试验检测）的间隔时间，该时间间隔需足够短，以避免疾病病情变化引起检测结果的偏移。

图1 文献筛选流程图

表1 纳入文献的基本信息和QUADAS质量评估得分情况

图2 miR-21诊断肺癌的灵敏度森林图

2.2 异质性分析和诊断价值的评估 合并7篇纳入文献的诊断值，灵敏度和特异度森林图及I2（81.2%）均表明存在异质性。Spearman相关系数为0.107（P＝0.819），表明该异质性并非由纳入文献的阈值效应引起；敏感度分析表明纳入文献没有明显的离群值存在；Meta回归分析纳入文献中的miR-21检测方法的不同是否引起异质性，结果如表1所示，RT-qPCR 检测的关键因素内参（RDOR＝0.35，P＝0.4366）、提取RNA 试剂（RDOR＝0.81，P＝0.6777）和检测探针（RDOR＝9.08，P＝0.2437）的不同均不是该Meta分析异质性产生的原因，因此，应用随机效应模型合并纳入文献，以最大限度降低异质性对结果的影响。通过合并得出，miR-21对肺癌的诊断灵敏度为0.68（95%CI：0.55～0.79），见图2；特异度为0.82（95%CI：0.76～0.86），见图3，阳性似然比3.70（95%CI：2.60～5.25）和阴性似然比0.39（95%CI：0.27～0.58），表明血液中的miR-21对肺癌有中度的诊断能力和较高的排出其他疾病的能力；综合曲线下面积（SROC）为0.84（95%CI：0.80～0.87）和诊断比值比（DOR）为9.90（95%CI：4.75～20.63），见图4；表明miR-21对肺癌有较好的诊断价值。

图3 miR-21诊断肺癌的特异度森林图

2.3 发表偏移 Deek、Begg′s和Egger′s检验评估纳入文献是否具有发表偏倚。Deek 检验P＝0.227，纳入文献基本对称；同时，Begg′s和Egger′s检验结果分别为P＝0.764和P＝0.446，均表明本次miR-21对肺癌诊断价值的Meta分析纳入文献不存在发表偏倚。

图4 miR-21诊断肺癌的DOR

3 讨 论

miR 是长度约为19～25bp的非编码基因的大家族，在基因表达中起着调控作用，其表达量随肿瘤疾病的发生发展而变化，已有研究报道与多种肿瘤疾病相关，如肺癌［12］、胃癌［13］等。肿瘤相关miR 在肿瘤疾病发生发展过程中稳定存在于血液中，因而可用于肿瘤疾病的诊断，其中是miR-21对肺癌疾病的诊断价值，已引起人们的广泛关注。目前已报道的miR-21对肺癌的诊断价值不一，需Meta分析整合已报道的结果，为进一步研究提供依据。

通过筛选，7篇高质量的文献纳入本次Meta分析，Quadas评分12～13，因没有文献具体描述病理学检测与qRT-PCR 检测血液中miR-21之间的时间间隔，从而忽略了可能会因病程进展引起检测结果偏移的情况。异质性是Meta分析能否进行资料合并的重要参考因素，阈值效应是诊断性Meta分析异质性的首要考虑因素，本文通过Spearman模型得其相关系数明确7篇文献的不同阈值不是引起异质性的原因；但可视化的森林图及I2均表明异质性的存在，因此采用了敏感度分析和Meta回归分析判断引起异质性的可能原因。敏感度分析结果未发现离群结果；Meta回归分析了方法设计因素的不同可能引起的异质性，结果如表2所示，方法设计的重要因素内参（P＝0.436 6）、提取RNA 的不同试剂（P＝0.677 7）、探针的种类不同（P＝0.243 7）均未引起异质性。因此，已存在的异质性来源不确定，最终采用随机效应模型合并7篇纳入文献诊断值，以最大限度消除异质性的影响。

总之，通过合并得出miR-21对肺癌的诊断价值指标：诊断灵敏度、特异度、阳性似然比、阴性似然比以及综合诊断价值的指标综合曲线下面积和诊断比值比均表明miR-21对肺癌有较好的诊断价值。在肺癌确诊尚无理想方案的情况下，可以考虑将miR-21作为一个参考指标。当然，在此之前，需要更多的研究以确定miR-21在肺癌发生发展中变化的机制，并尽可能标化检测方案和参考范围。

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