慢性乙型肝炎患者白细胞介素33水平变化研究

李　华，张素贞，贾　倩，李梦嘉，阎敏娜，贾晓晖

(1. 河北北方学院附属第一医院检验科,河北 张家口 075000； 2. 河北北方学院医学检验学院,河北 张家口 075000)



慢性乙型肝炎患者白细胞介素33水平变化研究

李华1※，张素贞1，贾倩1，李梦嘉1，阎敏娜1，贾晓晖2

(1. 河北北方学院附属第一医院检验科,河北 张家口 075000； 2. 河北北方学院医学检验学院,河北 张家口 075000)

摘要：目的检测阿德福韦酯治疗前后慢性乙型肝炎患者血清中白细胞介素33(IL-33)水平变化，探讨其临床意义。方法选取2012年10月至2013年3月于河北北方学院附属第一医院进行诊治的89例慢性乙型肝炎患者作为慢性乙型肝炎组，89例在本院体检确定健康者作为健康对照组，应用全自动生化分析仪和荧光定量聚合酶链反应(PCR)仪于不同时相点检测血清中丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平及乙型肝炎病毒(HBV) DNA荷载量状态，同时应用酶联免疫吸附测定方法检测所有研究对象血清中IL-33、干扰素γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10水平。结果慢性乙型肝炎组治疗前IL-33、ALT、AST水平及HBV DNA拷贝量显著高于健康对照组[57.1(23.7～138.5) ng/L比20.5(9.3～67.5) ng/L；129.3(28.3～702.5)U/L 比17.4(9.1~23.2)U/L；97.5(31.4～327.1)U/L比16.2(5.9～27.8)U/L； 7.8 (5.6～9.8)×103log10拷贝/L比1.1(0.3～1.7)×103log10拷贝/L]，差异有统计学意义 (P<0.01)，且IL-33与ALT和AST无显著相关性(P>0.05)，与HBV DNA拷贝量正相关(r=0.383，P<0.05)；治疗后慢性乙型肝炎组IFN-γ、IL-2、IL-10和IL-6水平较治疗前显著升高[12.4(10.8～16.1) ng/L比6.7(2.1～12.0) ng/L；9.0(4.4～14.1) ng/L比5.3(3.6～9.5)；7.1(5.8～13.1) ng/L 比6.6(4.3～11.4) ng/L；7.1(6.3～10.7) ng/L比6.5(5.7～8.8) ng/L，P<0.05或P<0.01]，TNF-α和IL-4水平变化差异无统计学意义，均与IL-33无相关性(P>0.05)。结论IL-33在慢性乙型肝炎患者免疫调节中具有一定作用，可能是HBV相关肝损伤中一个病理因素，检测患者血清中IL-33 水平对于免疫状态监控具有重要意义。

关键词：慢性乙型肝炎；白细胞介素33；阿德福韦酯；肝功能

慢性乙型肝炎是机体感染乙型肝炎病毒(hepatitis B virus, HBV)后未能及时清除，形成慢性肝脏损伤，最终导致肝纤维化、肝硬化甚至肝癌，严重威胁人类健康。细胞因子是机体免疫系统的重要组成部分，HBV感染后的疾病转归与机体免疫系统整体功能密切相关，其中细胞因子发挥重要作用[1]，但其具体机制尚未完全阐明。白细胞介素 (interleukin, IL) 33是新发现的一种细胞因子，属IL-1家族，具有多种生理功能，与其受体suppression of tumorigenicity (ST2)结合后可调节机体炎症反应和免疫应答[2]，关于其在HBV感染中所起作用的研究甚少。阿德福韦酯是治疗HBV感染的一线药物[3]。本研究检测慢性乙型肝炎患者接受药物治疗前后血清中IL-33水平变化情况，探讨其在疾病发病机制中的意义。

1资料与方法

1.1一般资料选取2012年10月至2013年3月于河北北方学院附属第一医院进行诊治的89例慢性HBV感染者作为慢性乙型肝炎组，其中男49例、女40例，年龄17～66岁，平均(47±5)岁。诊断标准参照2010年制订的《慢性乙型肝炎防治指南》[4]。所有患者入院6个月内未使用过免疫抑制剂及其他导致肝脏毒性的药物。排除合并其他病毒感染、其他引起疾病和(或)药物引起的肝脏损伤及合并其他系统严重疾病的患者。并于相同时间段内选取89例健康体检者作为健康对照组，无病毒性肝炎及其他肝脏疾病，其中男46例、女43例，年龄22～59岁，平均(43±6)岁。慢性乙型肝炎组及健康对照者在性别、年龄方面比较差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法慢性乙型肝炎组患者使用阿德福韦酯[葛兰素史克(天津)有限公司生产，批号：120421，10 mg/片]进行治疗， 10 mg/d口服，维持12周，疗程结束后在预定时间点(健康对照组为体检当天，慢性乙型肝炎组为服药治疗前及服药治疗后第12周)抽取所有研究对象静脉血，离心分离血清-20 ℃ 保存待行血清学检测，离心半径为3 cm，1000 r/min离心5 min。标本收集完成后统一应用酶联免疫吸附测定检测试剂盒(购于美国R&D公司)检测血清中IL-33、干扰素γ(interferon-γ, IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10水平。严格按照试剂盒说明书进行操作。

同时应用AU1700全自动化分析仪检测治疗前后丙氨酸转氨酶 (alanine aminotransferase,ALT)和天冬氨酸转氨酶(aspertate aminotransferase, AST)水平；应用美国ABI7300荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)扩增仪测定治疗前后HBV DNA载量。病毒荷载量降低100倍定义为药物敏感，其他则定义为药物不敏感。正常值 ALT≤40 U/L；AST≤40 U/L；HBV DNA≤3×103log10拷贝/L。每例参与研究的患者均签署了知情同意书，且本研究由本院伦理委员会批准。

2结果

2.1治疗前后IL-33水平变化及与肝功能指标相关性治疗前慢性乙型肝炎组患者血清中的IL-33、ALT、AST水平及HBV DNA拷贝量均显著高于健康对照组(P<0.01)；治疗后上述指标均下降，与治疗前相比差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，与健康对照组相比差异无统计学意义 (P>0.05)，见表1。IL-33与ALT和AST无相关性(r值分别为0.137和0.144，P>0.05)，与HBV DNA拷贝量呈正相关(r=0.383，P<0.05)。

表1　治疗前后研究对象IL-33、ALT、AST及HBV DNA拷贝数变化情况　[M(Q25~Q75)]

IL-33：白细胞介素33；ALT：丙氨酸转氨酶；AST：天冬氨酸转氨酶；HBV DNA：乙型肝炎病毒DNA

2.2慢性乙型肝炎组治疗前后其他细胞因子变化慢性乙型肝炎组患者治疗前IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10均高于健康对照组，差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)；治疗后IFN-γ、IL-2、IL-6和IL-10水平显著升高，与治疗前和健康对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)，TNF-α和IL-4水平与治疗前比较差异无统计学意义(P>0.05)，高于健康对照组(P<0.05或P<0.01)，见表2。IL-33与IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-6和IL-10无相关性(r值分别为0.236，0.089，0.158，0.095，0.117和0.175，均P>0.05)。

表2　治疗前后受试者血清中IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10和IL-6水平比较　[M(Q25~Q75),ng/L]

(续表2)

IFN-γ：干扰素γ；TNF-α：肿瘤坏死因子α；IL：白细胞介素

2.3研究对象不良反应发生情况慢性乙型肝炎组服药治疗期间未发生与药物有关的不良反应，耐受性良好，均积极配合并完成了本次研究内容。

3讨论

IL-33是一种多作用细胞因子，通过与特异性受体结合后激活促分裂素原活化激酶和核因子κB信号转导途径，进而促进Th2型免疫反应和细胞因子产生[5]。慢性乙型肝炎发病机制复杂，已明确Th1型免疫反应可使病毒感染局限化，Th2型免疫反应则与感染的慢性化有关[6]。Th1/Th2型免疫反应失衡可影响病毒性肝炎慢性化和不良临床转归[7]。慢性乙型肝炎患者异常表达的IL-33水平可能参与疾病的进展过程。本研究为进一步明确IL-33在HBV导致的肝脏损伤机制中的作用，检测其对于监控患者免疫状态的意义，选取慢性乙型肝炎患者作为研究对象，检测患者应用阿德福韦酯治疗前后血清中IL-33及其他多个指标水平变化，探讨其临床意义。

本研究结果显示，慢性乙型肝炎组治疗前血清中IL-33、ALT、AST水平及HBV DNA拷贝量显著高于健康对照组，可能是因为治疗前机体在清除HBV时产生的免疫应答导致肝细胞损伤，坏死的肝细胞释放IL-33、ALT和AST增加，从而导致血清中水平升高。近期有研究发现IL-33水平与系统性红斑狼疮患者抗核抗体等活动性指标有关[8]，但本研究结果显示，IL-33水平与ALT和AST无相关性(P>0.05)，有待进一步确认。

阿德福韦酯是现阶段抗病毒治疗的一线药物，临床上已经明确通过诱导Th1类细胞因子分泌增强非溶细胞机制而抑制病毒复制，清除HBV感染，且不造成肝细胞损伤，从而改善患者肝功能状态，机体耐受性良好，具有良好的治疗效果[3, 9]。本研究结果显示，慢性乙型肝炎组接受阿德福韦酯治疗12周后肝功能恢复明显，血清中IL-33水平降低，与HBV DNA拷贝量呈正相关(P<0.05)，与预期结果一致。

本研究结果还显示，慢性乙型肝炎组血清中IFN-γ、IL-2、IL-6和IL-10在治疗后较治疗前水平显著升高(P<0.05或P<0.01)，TNF-α和IL-4变化差异无统计学意义。提示前炎性细胞因子不仅在清除HBV感染过程中起重要作用，在肝脏恢复中也发挥重要作用[10]。IL-6是Th17细胞功能发育的重要细胞因子，且IFN-γ和IL-2是Th1型免疫反应的作用因子，慢性乙型肝炎组治疗前血清中IFN-γ、IL-2和IL-6水平较低提示病毒存在持续复制抑制了Th1型免疫反应的发生。IL-10 促进T2型细胞因子模式的发展，慢性乙型肝炎组血清中IL-10水平的降低可能是多种细胞因子相互作用的结果。本研究结果显示，IL-33与上述几种细胞因子无相关性，有待进一步确认。

本研究初步探讨了慢性乙型肝炎患者服用阿德福韦酯治疗前后IL-33水平变化情况，结果表明IL-33在机体免疫调节中具有一定作用，可能是慢性乙型肝炎患者HBV相关肝损伤中一个病理因素，检测患者血清中IL-33水平对于免疫状态监控具有重要意义，有待进一步明确IL-33在慢性乙型肝炎患者病理进展过程中的具体作用及机制。

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Study on Changes of Interleukin-33 Levels in Patients with Chronic Hepatitis BLIHua1,ZHANGSu-zhen1,JIAQian1,LIMeng-jia1,YANMin-na1,JIAXiao-hui2.(1.DepartmentofClinicalLaboratory,theFirstAffiliatedHospitalofHebeiNorthUniversity,Zhangjiakou075000,China； 2.CollegeofLabMedicine,HebeiNorthUniversity,Zhangjiakou075000,China)

Abstract：ObjectiveTo explore the changes of serum interleukin-33(IL-33) levels in patients with chronic hepatitis B before and after adefovir dipivoxil therapy and its clinical significance.MethodsA total of 89 patients with chronic hepatitis B admitted in the First Affiliated Hospital of Hebei North University from Oct.2012 to Mar.2013 were selected as the chronic hepatitis B group,and another 89 healthy people underwent physical examination in the hospital during the same period were selected as the healthy control group.Automatic biochemical analyzer and fluorescence quantitative polymerase chain reaction(PCR) were applied to detect serum levels of alanine transaminase(ALT) and aspertate aminotransferase(AST) and the quantity of hepatitis B virus(HBV) DNA load at different phases,and enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) method was used to detected serum levels of IL-33,interferon-γ(IFN-γ),tumor necrosis factor-α(TNF-α),IL-2,IL-4,IL-6 and IL-10.ResultsIn chronic hepatetes B group,levels of IL-33,ALT,AST and HBV DNA copies before treatment were significantly higher than those of the healthy control group [57.1(23.7-138.5) ng/L vs 20.5(9.3-67.5) ng/L；129.3(28.3-702.5)U/L vs 17.4(9.1-23.2)U/L；97.5(31.4-327.1)U/L vs 16.2(5.9-27.8)U/L； 7.8 (5.6-9.8)×103log10 copies/L vs 1.1(0.3-1.7)×103log10 copies/L],the differences were statistically significant(P<0.01),while there was positive correlation between IL-33 level and HBV DNA load(r=0.383,P<0.05).Serum lveels of IFN-γ, IL-2, IL-10 and IL-6 in chronic hepatitis B group significantly increased after treatment[12.4(10.8-16.1) ng/L vs 6.7 (2.1-12.0) ng/L；9.0(4.4-14.1) ng/L vs 5.3(3.6-9.5)；7.1(5.8-13.1) ng/L vs 6.6(4.3-11.4) ng/L；7.1(6.3-10.7) ng/L vs 6.5(5.7-8.8) ng/L，P<0.05 orP<0.01],changes of TNF-α and IL-4 levels showed no statistically significant differences,and there were no correlation of IL-33 level with TNF-α and IL-4 levels.ConclusionIL-33 is involved in the immune regulation of chronic hepatitis B,and may be a pathological factor in HBV related liver injury.Detection of serum IL-33 level contributes great significance for monitoring the patients′ immune status.

Key words:Chronic hepatitis B； Interleukin-33； Adefovir dipivoxil； Liver function

收稿日期：2014-03-25修回日期：2014-10-02编辑：相丹峰

doi：10.3969/j.issn.1006-2084.2015.11.062

中图分类号：R512.62

文献标识码：A

文章编号：1006-2084(2015)11-2081-03