热毒宁注射液与两种常用溶媒配伍后9种成分稳定性研究*

李 淼，王永香，孟 瑾，王仁杰，毕宇安，王振中，萧 伟**

1江苏康缘药业股份有限公司，连云港 222001；2中药制药过程新技术国家重点实验室，连云港 222001

热毒宁注射液与两种常用溶媒配伍后9种成分稳定性研究*

李 淼1，2，王永香1，2，孟 瑾1，2，王仁杰1，2，毕宇安1，2，王振中1，2，萧 伟1，2**

1江苏康缘药业股份有限公司，连云港 222001；2中药制药过程新技术国家重点实验室，连云港 222001

目的：考察热毒宁注射液与两种常用溶媒配伍后制剂中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、断氧化马钱子苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C等9种成分的稳定性，为临床用药提供实验依据。方法：将热毒宁注射液分别与5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液按50∶250的比例配伍，考察0～6 h内配伍药液中9种成分含量变化情况。结果与结论：热毒宁注射液与5%葡萄糖注射液或0.9%氯化钠注射液配伍6 h内，其中9种成分均稳定。

热毒宁注射液；配伍；稳定性；绿原酸；栀子苷；断氧化马钱子苷；高效液相色谱法

热毒宁注射液为江苏康缘药业股份有限公司自主研发的中药注射剂，其处方由金银花、青蒿、栀子三味药材组成[1]。本品具有清热、疏风、解毒之功效，用于外感风热所致感冒、咳嗽，症见高热、微恶风寒、头痛身痛、咳嗽痰黄；上呼吸道感染、急性支气管炎见上述症候者。关于热毒宁注射液配伍方面研究的文献较多[2]，但对于其配伍过程中有效成分稳定性情况研究较少。有研究表明金银花中的有机酸类成分[3]及栀子中的环烯醚萜苷类成分[4]均为有效成分，所以本实验将热毒宁注射液按一定比例分别与5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液配伍使用，研究其中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、咖啡酸、断氧化马钱子苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C 9种成分的稳定性，为临床合理使用该药提供数据支持。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪Agilent 1100（美国安捷伦公司，包括自动进样器，二元泵，DAD紫外检测器）；BP 211D电子分析天平 （德国赛多利斯公司0.01 mg）；MILLIPORE超纯水机。

热毒宁注射液 （江苏康缘药业股份有限公司，批号：110705，110706，110713，110715）。绿原酸、咖啡酸、栀子苷对照品均购置于中国药品生物制品检定研究院，质量分数≥98%，批号分别为110753-200413，110885-200102，110749-200714；异绿原酸B（批号：071130）、异绿原酸A（批号：A0025）、异绿原酸C（批号：MUST-09041001）、新绿原酸（批号：MUST-10091501）、隐绿原酸（批号：905997）对照品由成都曼思特生物科技有限公司提供，质量分数≥98%；断氧化马钱子苷对照品为自制（色谱法检测纯度在98%以上，面积归一化）。0.9%氯化钠注射液（批号110727701）、5%葡萄糖注射液（批号110614701）为辰欣药业股份有限公司产品；甲醇为色谱纯；磷酸为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

Phenomenex Luna 5u C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：30℃；检测波长：237 nm、324 nm；体积流量：1.0 mL·min-1；进样量：10 μL。流动相为甲醇（A）-0.1%磷酸水溶液 （B），梯度洗脱程序：0～20 min，12%～30%A；20～60 min，30%～50%A[3]。

2.2 溶液的配制与系统适应性试验

2.2.1 混合对照品溶液制备 分别精密称取绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、栀子苷、断氧化马钱子苷、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C对照品 16.79、5.90、5.26、13.85、4.88、4.58、8.46、4.64、7.03 mg用50%甲醇溶解制成质量浓度分别为839.50、295.00、263.00、692.50、244.00、229.00、423.00、232.00、351.50 μg·mL-1的对照品混合溶液，0.22 μm微孔滤膜（有机膜）滤过，冷藏备用。

2.2.2 供试品溶液制备 精密量取热毒宁注射液与5%葡萄糖注射液（或0.9%氯化钠注射液）以50∶250比例混合的溶液2.0 mL，置10 mL容量瓶中，加入50%甲醇溶液稀释至刻度摇匀，0.22 μm微孔滤膜（有机膜）滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 系统适应性试验 取对照品混合溶液、供试品溶液进样检测，见图1。绿原酸、新绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸、栀子苷、断氧化马钱子苷、异绿原酸A、异绿原酸B、异绿原酸C相邻色谱峰的分离度均在1.5以上，拖尾因子均在1.00至1.10之间，理论塔板数以各色谱峰计均在10000以上。

图1 混合对照品和供试品溶液的HPLC色谱

2.3 方法学验证

2.3.1 标准曲线的制备 精密量取绿原酸等9种对照品混合溶液0.1、0.2、0.4、1.0、2.0、4.0、10.0 mL，分别置于10mL量瓶中，加50%甲醇稀释并定容至刻度，摇匀，再分别按照“2.1”项下色谱条件进样检测，记录峰面积，绘制标准曲线，纵坐标Y为对照品的峰面积、横坐标X（μg·mL-1）为质量浓度，得线性方程：

新绿原酸Y=29.6594X-10.5519（r2=0.9999）；

绿原酸Y=29.39X+11.52（r2=1.0000）；

隐绿原酸Y=30.8598X-9.6342（r2=0.9999）；

咖啡酸Y=54.33X-12.60（r2=1.0000）；

栀子苷Y=14.3229X-4.7754（r2=0.9999）；

断氧化马钱子苷Y=14.8257X-2.4655（r2=0.9999）；

异绿原酸B Y=31.9671X-34.2703（r2=0.9999）；

异绿原酸A Y=34.7999X-29.4002（r2=0.9999）；

异绿原酸C Y=35.5031X-46.2478（r2=0.9999）。

结果表明，新绿原酸在2.95～295.00 μg·mL-1，绿原酸在8.40～839.50 μg·mL-1，隐绿原酸在2.63～263.00 μg·mL-1，咖啡酸在2.29～229.00 μg·mL-1，栀子苷在6.93～692.50μg·mL-1，断氧化马钱子苷在2.44～244.00 μg·mL-1，异绿原酸B在4.23～423.00 μg·mL-1，异绿原酸A在2.32～232.00 μg·mL-1，异绿原酸C在3.52～351.50 μg·mL-1范围内线性关系良好。

2.3.2 进样精密度试验 精密量取绿原酸等9种成分对照品的混合溶液，按照“2.1”项色谱条件进样6次，进样体积均为10 μL，以对照品峰面积进行计算，新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、断氧化马钱子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C峰面积的RSD分别为0.19%、0.28%、0.35%、0.31%、0.12%、0.47%、0.18%、0.69%、0.26%，表明该仪器的精密度良好。

2.3.3 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于制备后0、2、4、6、8、12、24 h注入液相色谱仪，记录9种成分的峰面积值。结果新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、断氧化马钱子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、峰面积的RSD分别为：1.2%、1.4%、1.3%、1.5%、1.0%、1.4%、1.0%、1.6%、1.2%，表明在24 h内供试品溶液稳定性良好。

2.3.4 重复性试验 按照“2.2.2”项下方法，取热毒宁注射液样品（批号：110705）与5%葡萄糖注射液按照50∶250混合后的溶液，制备6份供试品溶液，进行样品分析，计算绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、栀子苷、断氧化马钱子苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C等的平均含量（n=6）分别为6.01、2.09、2.86、0.12、11.07、2.09、0.60、0.27、0.45 g·L-1，RSD分别为 0.73%、0.81%、0.95%、1.02%、0.35%、0.91%、0.85%、0.51%、1.10%（n=6）。

2.3.5 加样回收率试验 精密量取热毒宁注射液（批号：110705）与5%葡萄糖注射液以50∶250混合的溶液（新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、断氧化马钱子苷、栀子苷含量分别为：0.348、1.002、0.477、0.020、0.100、0.045、0.075、0.348、1.845 g·L-1）6份，每份1.0 mL，分别精密添加含新绿原酸0.346 g·L-1、绿原酸1.010 g·L-1、隐绿原酸0.450 g·L-1、咖啡酸0.025 g·L-1、异绿原酸B 0.105 g·L-1、异绿原酸A 0.046 g·L-1、异绿原酸C 0.080 g·L-1、断氧化马钱子苷0.350 g·L-1、栀子苷1.900 g·L-1的混合对照品溶液1.0 mL，按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定，计算回收率。9种成分的平均回收率依次为：99.95%、99.50%、97.96%、99.33%、99.05%、99.28%、98.96%、99.00%、99.13%；SD分别为：1.01%、0.63%、1.05%、3.01%、1.35%、2.63%、2.43%、1.07%、0.95%（n=6）。试验结果表明，本法具有良好的回收率。

2.4 试验结果

2.4.1 配伍溶液配制方法 在20℃恒温条件下，将50 mL热毒宁注射液分别与250 mL的5%葡萄糖注射液（5%GS）、0.9%氯化钠注射液（0.9%NS）混合均匀，分别于0、1、2、4、6 h对混合药液进行外观检查及绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、咖啡酸、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、断氧化马钱子苷、栀子苷等9种成分含量测定。

2.4.2 样品检测结果 配伍溶液在6 h内外观无明显变化，药液澄清透明，无沉淀、无气泡产生。三批热毒宁注射液与两种溶媒分别配伍后0～6 h内9种成分含量无显著性变化，结果见表1。

3 讨 论

中药注射液的配伍问题是影响其安全性的重要因素。热毒宁注射液与两种常用溶媒配伍，对其内含的9种成分稳定性情况进行研究，在检测方法的建立过程中，将其供试品溶液制备方法进行了改进，同时测定9个成分，既减少了供试品溶液处理步骤，又节约了检测时间。

结果显示，热毒宁注射液分别与5%葡萄糖注射液、0.9%氯化钠注射液配伍，配伍溶液在0～6 h内，绿原酸等9种成分的含量无显著性变化，表明这9种成分在配伍药液中6 h内均是稳定的，为热毒宁注射液临床合理用药提供了实验依据及数据支持。

[1] 李 芳，周建明，韩兆忠，等.3种中药注射液的过敏性试验研究[J].中国现代中药，2013，15（3）：183-6.

[2] 王永香，刘 涛，王振中，等.热毒宁注射液与溶媒配伍稳定性研究[J].中国中药杂志，2010，35（22）：2990-3.

[3] 毕宇安，王振中，宋爱华，等.热毒宁注射液高效液相色谱指纹图谱研究及多成分定量分析[J].世界科学技术—中医药现代化，2010，12（2）：298-303.

[4] 刘 桦，周婷婷，范国荣.液质联用技术在环烯醚萜苷类化合物研究中的应用[J].药学服务与研究，2011，11（1）：45-9.

Study on the Compatible Stability of 9 Components in Reduning Injection Mixed with 2 Kinds of Solvent Most in Use*

LI Miao1,2,WANG Yong-xiang1,2,MENG Jin1,2,WANG Ren-jie1,2,BI Yu-an1,2,WANG Zhen-zhong1,2,XIAO Wei1,2**
1Jiangsu Kanion Pharmaceutical Co.,Ltd.,Lianyungang 222001;2State Key Laboratory of New-tech for Chi-nese Medicine Pharmaceutical Process,Lianyungang 222001

Objective:To investigate the compatible stability of chlorogenic acid,neochlorogenic acid, cryptochlorogenic acid,cafferic acid,geniposide,secoxyloganin,isochlorogenic acid A,isochlorogenic acid B and isochlorogenic acid C in Reduning Injection mixed with two solvents,to provide an experimental basis for clinical medicine.Methods:The changes of the nine components in Reduning injection combined with 5%glucose injection or 0.9%sodium chloride injection respectively (Reduning injection:solvent=50:250) were determined by HPLC.Results and Conclusion:The 9 components were stable in 6 h after combin-ing Reduning injection and 5%glucose injection or 0.9%sodium chloride injection.

Redning injection;Compatibility;Stability;Chlorogenic acid;Geniposide;Secoxyloganin;HPLC

R969.2

A

1673-7806（2015）02-150-03

国家重大新药创制项目（编号：2013ZX09402203）

李淼，女，工程师 E-mail:limiao4569092@126.com

**通讯作者萧伟，男，研究员，博士生导师 E-mail:kanionlunwen@163.com

2014-11-06

2015-01-28