视网膜色素变性患者房水中血管内皮生长因子含量的测定

陈星 于建春 周丹英 孙庆祝 吴雁冰 沈健



·临床交流·

视网膜色素变性患者房水中血管内皮生长因子含量的测定

陈星 于建春 周丹英 孙庆祝 吴雁冰 沈健

视网膜色素变性(retinitis pigmentosa，RP)是视网膜变性中最普遍的，发生率约为1/4 000[1]。由于光感受器细胞的缺乏，导致视网膜色素上皮的损坏。RP是一种高变异程度的疾病，有的表现为局部视野缺损，有的表现为周边视野缺损，但最终会发展为黄斑功能的缺损。眼底表现以骨细胞样色素沉着、视网膜血管变细、视盘萎缩为典型特征，视网膜血管改变是眼底改变突出的特征，早期视网膜血管的变细和晚期血管的纤维化变性是RP患者眼底改变的主要特点。本文通过比较RP患者与单纯年龄相关性白内障患者房水的血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor-A，VEGF-A)含量，研究RP患者眼底血管的改变与其之间的相关性，现报告如下。

1 资料与方法

1.1 资料 收集2009年1月～2014年2月来我科确诊的无其他眼病的RP患者，共17例，年龄36～79岁，平均(49.5±12.3)岁，患者都具有典型的夜盲症状，视网膜血管狭窄，降低的视网膜电流图特征。对照组为单纯年龄相关性白内障患者17例，年龄44～76岁，平均(56.3±10.9)岁，排除任何眼相关的疾病。2组年龄差异无统计学意义(t=-1.712，P=0.09)。本研究经医院伦理委员会讨论通过，所有受试对象均签署知情同意书。

1.2 房水样品的收集 手术台上收集房水约0．15 mL，分装于50 μL无菌的EP管内，零下80 ℃深低温保存。对照组为全身无其他系统疾病的年龄相关性白内障的手术患者，术前签订知情同意书。酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)法检测试验组和对照组房水中VEGF-A的表达量。

1.3 统计学处理 数据采用SPSS16．0软件进行统计分析。采用独立样本t检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

试验组患者房水VEGF-A平均含量是(97.1±98.2)pg/mL，对照组是(333.3±133.1) pg/mL，2组比较差异有统计学意义(图1，t=-5.889,P<0.001)。RP患者视网膜血管的改变是眼底改变突出的特征，可见早期视网膜血管的变细和晚期血管的纤维化变性。图2为一患者明显的视网膜颞侧血管狭窄，鼻侧血管纤维变性。

图1. 试验组和对照组各17例患者房水中的VEGF-A的表达量,试验组比对照组VEGF浓度更低，差异有统计学意义(P<0.001)

图2. 一患者明显的视网膜颞侧血管狭窄，鼻侧血管纤维变性(箭头处)

3 讨论

由于基因和蛋白质功能的多样性，RP病因的分子机制仍然不清楚。现在有认为与细胞凋亡有关，神经营养性治疗是干扰细胞凋亡的治疗基因的常用方法，各类干细胞在视网膜变性疾病中也有了一定的应用, 将干细胞移植整合人视网膜并诱导其分化为目的细胞，挽救或重建视功能，为视网膜变性类疾病的治疗带来新希望[2]。VEGF-A是内皮细胞促细胞分裂因子，影响神经生长、分化、生存的一种物质，在动物和人类研究中，低VEGF-A含量是启动神经元变性的重要因素，同时表明VEGF-A对神经的生长和营养起重要作用[3]。目前实验表明，VEGF-A受体是存在于正常视网膜神经细胞中；局部缺血再灌注的模型实验表明，VEGF-A导致剂量依耐性减少，VEGF-A对视网膜神经细胞凋亡有直接神经保护性[4]。未来VEGF-A发病机制的研究可能将支持神经性治疗RP。

有人曾报道，零下80 ℃保存房水21 d后房水中VEGF的表达量比同一来源新鲜样本检测的结果要明显降低[5]。为了使本研究的实验组和对照组的结果得到一个相对公平的对比，2组标本零下80 ℃保存的时间长短尽可能接近，以排除深低温保存时间长短不一所带来的对房水内VEGF表达量的影响。同时，2组年龄差异无统计意义，排除了年龄因素对VEGF-A含量的影响。

我们认为RP患者低VEGF-A含量可能有3方面主要原因。①视网膜和脉络膜的血管变性，视网膜色素上皮层色素细胞的缺乏。研究[6]表明正常的眼球VEGF-A是由视网膜色素上皮层细胞产生的。视网膜变性归因于正常表达基因的缺乏，光感受器细胞的凋亡由于不同种基因变异包括RP基因，它可能导致VEGF的低表达[7]。②光感受器变性导致相对的视网膜组织内氧耗过多，实验表明暴露于缺氧环境的成年鼠会增加视网膜组织氧的含量，同时也显示出视网膜VEGF的低表达。研究者[8]认为，这是因为光感受器细胞凋亡导致了氧利用的降低和视网膜组织的变薄，产生了视网膜内部相对高缺氧性，导致了VEGF含量的低表达。③VEGF-A在不同的视网膜神经细胞保护作用时被破坏。一个体外培养研究表明VEGF-A对视网膜有直接保护作用，负责神经保护的同型被证明是VEGF120 。同时，VEGF受体2(VEGFR2)也被证明参与视网膜神经保护。神经元细胞中的节细胞层(GCL)和视网膜的内核层(INL)缺血后表达VEGFR2，而感光细胞中的外核层(ONL)试验则呈阴性，无VEGFR2的表达[9]。

总之，我们认为RP的发病机制还有很多其他因素，低VEGF-A表达减少了VEGF的生成，这是由于神经变性的缘故而不是它导致了RP的产生。目前关于此方面的国内外报道较少，通过研究RP患者低VEGF-A水平表达，进一步探讨这种难治性疾病，并且由此对这种疾病在神经细胞治疗保护作用上提供一个方向。

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[9] Nishijima K, Ng YS, Zhong L, et al. Vascular endothelial growth factor-A is a survival factor for retinal neurons and a critical neuroprotectant during the adaptive response to ischemic injury[J].Am J Pathol,2007,171(1):53-67.

(本文编辑 诸静英)

更正

本刊2015年第15卷第4期封二“专题导语”中，“另一是除阿柏西普与康柏西普已获我国国家药品食品监督管理总局批准用于治疗湿性黄斑水肿外”应为“另一是除雷珠单抗与康柏西普已获我国国家药品食品监督管理总局批准用于治疗湿性黄斑水肿外”；第252页《抗血管内皮生长因子药物在糖尿病性黄斑水肿治疗中的应用进展》文献中，“另外也有进行中的Ⅲ期临床试验Protocol T，针对阿柏西普(2.0 mg)、贝伐单抗(1.25 mg)、雷珠单抗(0.5 mg)眼内注射治疗DME的疗效与安全性的比较研究”一段中的“雷珠单抗(0.5 mg)”应为“雷珠单抗(0.3 mg)”；第303页文献《Bell面瘫[耳显微外科2007版(四十七)]》的DOI“10.14166/j.issn.1671-2420.2015.01.023”应为“10.14166/j.issn.1671-2420.2015.04.023”。特此更正。

本刊编辑部

江苏省无锡市第九人民医院眼科 无锡 214062

于建春(Email:cx429@126.com)

10.14166/j.issn.1671-2420.2015.05.016

2013-09-18)