高效液相色谱-蒸发光散射法测定甜梦胶囊中黄芪甲苷含量

葛德洲，邓祖磊

（安徽省蚌埠市食品药品检验所，安徽 蚌埠 233000）

高效液相色谱-蒸发光散射法测定甜梦胶囊中黄芪甲苷含量

葛德洲，邓祖磊

（安徽省蚌埠市食品药品检验所，安徽 蚌埠 233000）

目的 建立测定甜梦胶囊中黄芪甲苷含量的高效液相色谱方法。方法 色谱柱用Zorbax Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4．6 mm，5 m)，流动相为乙腈-水(32∶68)，流速为1．0 mL／min。结果 黄芪甲苷进样量的线性范围为0．230 4～4．608 g（r=0．999 7），平均回收率为98．15%，RSD为1．46%(n=6)。结论 该方法用于测定甜梦胶囊中黄芪甲苷含量专属性强、操作简便。

黄芪甲苷；甜梦胶囊；高效液相色谱-蒸发光散射法

甜梦胶囊具有益气补肾、健脾和胃、养心安神功效，是由刺五加、黄精、蚕蛾、桑葚、黄芪、陈皮、砂仁等组方的复方中药制剂。目前，其标准中只有简单的鉴别项[1]，且未见有含量测定的报道。为了有效控制药品质量，确保临床疗效，笔者参考文献[2-9]，以黄芪甲苷为定量控制指标，采用高效液相色谱-蒸发光散射法（HPLC-ELSD）测定黄芪甲苷的含量，现报道如下。

1 仪器与试药

Waters e2695型高效液相色谱仪（美国Waters公司）；2424蒸发光散射检测器（美国Waters公司）；Empower化学工作站；Sartorius CP225D电子天平（德国 Sartorius公司，感量 0．01 mg）；Sartorius BS210S电子天平（德国Sartorius公司，感量0．1 mg）。黄芪甲苷对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110781-200613）；乙腈（色谱纯），水为重蒸水，其他试剂均为分析纯；甜梦胶囊（烟台荣昌制药股份有限公司，批号为120503，120508，120610）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Zorbax Eclipse XDB-C18柱(150 mm×4．6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(32∶68)；流速：1 mL／min；柱温：30℃；检测器参数：漂移管温度为75℃，雾化器温度为48℃，气体压力为25 psi。

2．2 溶液制备

取本品装量差异项下内容物，研细，取约5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 mL，称定质量 ，超声处理（功率300 W，频率45 kHz)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，蒸干，残渣加水20 mL，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇液置水浴上蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用 0．45 μm滤膜滤过，即得供试品溶液。精密称取黄芪甲苷11．52 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液（质量浓度为0．230 4 g／L）。按处方比例，取除黄芪以外的药材，按制备工艺要求制备阴性样品，再按供试品溶液制备方法制备成阴性对照品溶液。2．3 方法学考察

空白干扰试验：取2．2项下3种溶液，按拟订色谱条件测定。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上有相同保留时间的色谱峰，而阴性对照品溶液色谱则无此峰(见图1)。

1．黄芪甲苷A．对照品溶液 B．供试品溶液 C．阴性对照品溶液图1 高效液相色谱图

线性关系考察：分别精密吸取对照品溶液1，2，5，10，20 μL，分别进样，按拟订色谱条件进行测定，记录色谱峰面积，以峰面积对数为纵坐标、黄芪甲苷进样量的对数值为横坐标绘制标准曲线，得回归方程 Y=2．024 3 X+6．542 7，r=0．999 7(n=5)。结果表明，黄芪甲苷进样量在0．230 4～4．608 μg范围内与峰面积对数线性关系良好。

精密度试验：取对照品溶液，连续进样5次，每次10 μL。结果黄芪甲苷峰面积的 RSD为0．51%(n=5)，表明仪器精密度良好。

重复性试验：精密称取同一批号样品（批号为120508）6份，按供试品溶液的制备方法制备并测定峰面积，代入线性方程计算。结果平均含量为每粒0．094 mg(n=6)，RSD=0．87%(n=6)，表明方法重复性良好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12 h时按拟订色谱条件测定。结果黄芪甲苷峰面积 RSD为1．0%(n=6)，供试品溶液在12 h内测定供试品稳定。

加样回收试验：精密称取已知含量的同一批样品（批号为120508，含量为0．235 6 mg／g）6份，精密加入对照品溶液2．5 mL，按供试品测定方法测定含量，计算回收率。结果见表1。

2．4 样品含量测定

取对照品溶液和供试品溶液，用0．45 μm微孔滤膜滤过，对照品溶液分别进样10 μL和20 μL，供试品溶液进样20 μL，读取峰面积，按外标两点法对数方程计算含量结果批号为 120503，120508，120610的样品含量分别为每粒0．089，0．094，0．091 mg。

3 讨论

用紫外检测器检测黄芪甲苷时，由于黄芪甲苷紫外吸收在近末端，干扰较大。蒸发光散射检测器是一种通用性检测器，可以消除紫外末端吸收引起的干扰，是检测黄芪甲苷的较好方法。

在试验过程中对超声和回流提取方法进行了提取率的比较，结果两种方法提取效果无明显差异，考虑操作简单易行，最后选用甲醇超声提取法。并对超声提取时间(20，30，40，50 min）进行了比较，结果随时间延长，含量相应增加，但30 min后含量变化不大，因此选用超声处理30 min。

比较了甲醇 -水、乙腈-水等不同流动相，结果用乙腈-水(32∶68)时，各成分能到达基线分离，黄芪甲苷峰形好，理论板数高，因此选用乙腈-水(32∶68)作为流动相。

甜梦胶囊含有药味较多，成分复杂，采用HPLC-ELSD法测定胶囊中黄芪甲苷的含量，结果稳定，专属性强，可有效控制药品质量。

[1]WS3-B-2230-96，中华人民共和国卫生部药品标准·中药成方制剂[S]．

[2]国家药典委员会．中华人民共和国药典（一部）[M]．北京：中国医药科技出版社，2010：283．

[3]李 涛，徐长根，郝武常．HPLC-ELSD测定桃芪生血胶囊中黄芪甲苷的含量[J]．中成药，2005，27(5)：541-542．

[4]孙 健，刘 泓，范 斌．HPLC-ELSD法测定祝艾康胶囊中黄芪甲苷的含量[J]．中国实验方剂学杂志，2010，16(4)：60-61．

[5]何江敏，丁 洁，叶 虹．高效液相色谱-蒸发光散射法测定养胃颗粒中黄芪甲苷的含量[J]．中国药业，2010，19(22)：43-44．

[6]李 丹．高效液相色谱-蒸发光散射法测定芪麦益气口服液中黄芪甲苷的含量[J]．医药导报，2010，29(7)：941-942．

[7]张梦云，冯 俭，张煜华，等．HPLC-ELSD法测定芪桂消 颗粒中黄芪甲苷的含量[J]．华西药学杂志，2009，24(6)：659-660．

[8]陈岳蓉．HPLC-ELSD测定芪鹿益肾片中黄芪甲苷的含量[J]．中成药，2004，26(8)：629-631．

[9]唐德智，莫 迎．小儿健脾开胃合剂中黄芪甲苷的含量测定[J]．中国药业，2010，19(6)：22-23．

Determination of Astragaloside in Tianmeng Capsules by HPLC-ELSD

Ge Dezhou,Deng Zulei
(Bengbu Municipal Institute for Food and Drug Control,Bengbu,Anhui,China 233000)

Objective To establish a HPLC-ELSD method for the determination of the astragaloside content in Tianmeng Capsules．M ethods The ZORBAX Eclipse XDB-C18column(150 mm×4．6 mm，5 m)was used with acetonitrile-water(32∶68)as the mobile phase．The flow rate was 1．0 mL／min．Results The linear range of astragaloside was 0．230 4-4．608 μg(r=0．999 7)．The average recovery rate was 98．15% with RSD of 1．46%(n=6)．Conclusion This method is strongly specific and simple to operate for detecting the astragaloside content in Tianmeng Capsules．

astragaloside;Tianmeng Capsules;HPLC-ELSD

R284.1；R286.0

A

1006-4931(2015)05-0031-02

葛德洲（1963-），男，副主任药师，主要从事药物分析和药品质量标准研究工作，（电话）0552-3012569（电子信箱）al08＠163．com。

2014-04-04；

2014-07-28)