特发性血小板减少症患儿抗核抗体及可提取性核抗原多肽抗体谱特点分析

郑 浩，顾晓琼，高 飞，陈晓娟，王洁琳，郭彩娇，皮 蕾

·临床研究·

特发性血小板减少症患儿抗核抗体及可提取性核抗原多肽抗体谱特点分析

郑 浩，顾晓琼，高 飞，陈晓娟，王洁琳，郭彩娇，皮 蕾

目的 分析特发性血小板减少症(ITP)患儿抗核抗体(ANA)及可提取性核抗原(ENA)多肽抗体谱特点。方法 选取2013年1月—2014年10月在广州市妇女儿童医疗中心血液及免疫科门诊就诊或住院的初发ITP患儿67例为ITP组，另选取同期在该院健康体检的50例健康儿童为对照组，分别应用间接免疫荧光法和蛋白印迹法检测ANA及ENA多肽抗体谱。结果 ITP组患儿ANA阳性率、抗ENA抗体阳性率均高于对照组(P<0.01)；ANA阳性ITP患儿治疗前、后血小板计数及增值均低于ANA阴性患儿，且ANA阴性ITP患儿临床疗效优于ANA阳性患儿(P<0.05)。结论 检测ANA可反映ITP患儿对治疗的反应，ANA、抗SSA抗体等可能与ITP的发病及病情进展有关。

血小板减少；儿童；抗体,抗核；可提取性核抗原多肽抗体谱

特发性血小板减少症(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)是以皮肤黏膜和内脏出血、血小板减少、骨髓巨核细胞发育成熟障碍、血小板生存时间缩短及出现抗血小板自身抗体为主要特征的出血性疾病[1]，目前研究认为ITP与感染及免疫因素有关，但具体作用机制尚不清楚。除血小板自身抗体外，其他抗体如抗核抗体(ANA)等与ITP发病、临床表现及预后也有密切关系。为进一步了解ITP的发病机制及有效治疗手段，本研究对67例ITP患儿的ANA及可提取性核抗原(ENA)多肽抗体谱进行了分析，现报道如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象 选取2013年1月—2014年10月在广州市妇女儿童医疗中心血液及免疫科门诊就诊或住院初发ITP患儿67例为ITP组，均符合我国ITP诊断标准[2]，其中男36例，女31例；年龄8个月～13岁，平均年龄5岁11个月；均无系统性红斑狼疮(SLE)及其他结缔组织病。另选取同期在该院进行健康体检的50例健康儿童作为对照组，其中男27例，女23例；年龄3个月～12岁。两组儿童性别、年龄间具有均衡性。

1.2 治疗方法及临床疗效判定标准 ITP组患儿给予口服泼尼松1～2 mg·kg-1·d-1，血小板<50×109/L患儿给予丙种球蛋白400 mg·kg-1·d-1，连用5 d。以治疗后血小板计数≥100×109/L为完全反应(CR),(50～99)×109/L为部分反应(PR)，(30～49)×109/L且无活动性出血为微小反应(MR)，<30×109/L或伴活动性出血为无反应(NR)[2]。

1.3 检测方法 ITP组患儿于未治疗前抽血，对照组儿童与体检当天抽血，送检。血小板计数的检测采用SYSMEX5000全自动血细胞分析仪。ANA的检测采用间接免疫荧光法(IIF)：以猴肝及Hep-2细胞作为抗原基质，根据猴肝及Hep-2细胞核是否产生特异性荧光判定是否存在ANA，以ANA滴度≥1∶100为阳性。抗ENA抗体的检测采用蛋白印迹法(LIA)，包括抗nRNP、抗Sm、抗SS-A、抗SS-B、抗SCL-70、抗JO-1、抗CENP-B及抗dsDNA。ANA及抗ENA抗体检测试剂均购自德国欧蒙公司。ITP组患儿治疗1周后抽血复查血小板计数。

2 结果

2.1 两组儿童ANA检测结果比较 ITP组患儿ANA阳性16例，阴性51例，阳性率为23.9%，其中颗粒型12例，胞质型3例，核仁型1例；对照组儿童ANA均为阴性，ITP组患儿ANA阳性率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=13.714，P<0.01)。

2.2 两组ENA多肽抗体谱检测结果比较 ITP组患儿抗ENA抗体阳性19例(包括抗nRNP阳性2例、抗Sm阳性2例、抗SS-A阳性15例、抗SS-B阳性2例、抗CENP-B阳性2例)，阴性48例，阳性率为28.4%；对照组儿童抗ENA抗体均为阴性，ITP组患儿抗ENA抗体阳性率高于对照组，差异有统计学意义(χ2=16.783，P<0.01)；在16例ANA阳性ITP患儿中抗ENA抗体阳性者13例，阳性率为81.3%，主要以抗SSA为主。

2.3 ANA阳性与阴性ITP患儿治疗前、后血小板计数比较 ANA阳性ITP患儿治疗前、后血小板计数及增值均低于ANA阴性患儿，差异有统计学意义(P<0.05，见表1)。

Table 1 Comparison of blood platelet count between ITP children with positive or negative ANA

ANA例数治疗前治疗后增值阳性1614 43±7 91 71 125±39 80 56 69±38 05阴性5122 23±15 17119 13±74 3196 90±72 75t值-2 686-2 467-2 115P值0 0100 0160 038

注：ANA=抗核抗体

2.4 ANA阳性与阴性ITP患儿临床疗效比较 ANA阴性ITP患儿临床疗效优于ANA阳性患儿，差异有统计学意义(u=-2.081,P=0.037，见表2)。

表2 ANA阳性与阴性ITP患儿临床疗效比较(例)

Table 2 Comparison of clinical effect between ITP children with positive or negative ANA

ANA例数CRPRMRNR阳性165254阴性5131866

注：CR=完全反应，PR=部分反应，MR=微小反应，NR=无反应

3 讨论

ITP是一种免疫介导的血小板减少综合征，目前研究认为抗体介导的胞吞作用是ITP血小板破坏的主要机制，主要抗原是血小板糖蛋白(giycoproteins,GP)[3]，但导致ITP免疫异常的确切机制尚不清楚。ANA自身抗体的靶抗原为多种细胞核成分，被认为是SLE、幼年类风湿关节炎及其他自身免疫性疾病的最好筛选指标，有研究显示如果血小板与机体其他细胞的细胞核存在交叉抗原，则ANA有可能是造成血小板减少的一种自身抗体[4]。研究表明，20%～30%的ITP患者会伴有ANA阳性，且多数ANA阳性患者没有系统性自身免疫性疾病表现，而目前关于ANA阳性ITP患者日后发展为SLE或其他结缔组织病的风险性结论不一[5-6]。本研究结果显示，67例ITP患儿ANA阳性率为23.9%，抗ENA抗体阳性率为28.4%，且以抗SSA阳性为主，与以往报道的成人ITP患者ANA及抗ENA抗体阳性率相近[6]。吕迎霞等[7]研究报道，ITP患儿ANA阳性率为54%，抗ENA抗体阳性率为94%。

目前，关于ANA、SSA等是否与ITP病情、疗效及预后有关的研究结论不一。Li等[8]研究认为，ANA阳性ITP患者对糖皮质激素的反应与阴性ITP患者相似,但ANA阳性ITP患者在脾切除之后缓解期明显缩短；Abbasi等[6]研究显示，ANA阳性成人ITP患者较ANA阴性者对传统激素治疗的反应性差，且抗SSA抗体是成人ITP进展为SLE的危险因素。本研究结果显示，ANA阳性ITP患儿治疗前后血小板计数及增值均低于ANA阴性患儿，ANA阴性患儿临床疗效优于ANA阳性患儿。因此，检测ANA可反映ITP患儿对治疗的反应，而ANA阳性患儿在选择治疗方案时，尤其是需要快速提升血小板计数至较高水平时应慎重选择合理有效的治疗措施，并密切监测患儿病情变化。

本研究结果还显示，ITP组患儿ANA及抗ENA抗体阳性率均高于对照组，提示ANA、抗SSA抗体等可能与ITP的发病存在一定关系；而ANA阳性患者起病时病情较重，对激素治疗的反应较ANA阴性患者差，提示ANA可能与ITP病情进展有关，但其作用机制尚需进一步研究。而本研究纳入的ITP患儿数量较少，观察时间较短，今后尚需扩大样本量进行更长时间的观察。

[1]宋善俊.血液系统疾病[M].北京:人民卫生出版社,2004:659-662.

[2]秦平,陈峰,侯明,等.大剂量地塞米松治疗特发性血小板减少性紫癜的疗效观察[J].中华内科杂志,2005,44(6):451-452.

[3]Stasi R,Evangeiista ML,Stipa E,et al.Idiopathic thrombocytopenic purpura: current concepts in pathophysioiogy and management[J].Thromb Haemost,2008,99(1):4-13.

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[5]Altintas A,Ozel A,Okur N,et al.Prevalence and clinical significance of elevated antinuclear antibody test in children and adult patients with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].J Thromb Thrombolysis,2007,24(2):163-168.

[6]Abbasi SY,Milhem M,Zaru L,et al.A positive antinuclear antibody test predicts for a poor response to initial steroid therapy in adults with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Ann Hematol,2008,87(6):459-462.

[7]吕迎霞,黄庆华.50例儿童特发性血小板减少性紫癜自身抗体检测结果分析[J].中国保健营养,2013,24(3):1568-1569.

[8]Li HQ,Zhang L,Zhao H,et al.Chronic idiopathic thrombocytopenic purpura in adult Chinese patients: a retrospective single-centered analysis of 1791 cases[J].Chin Med J，2005,118(1):34-37.

(本文编辑：崔沙沙)

Characteristics of ANA and ENA Polypeptide Antibody Spectrum of Children with Idiopathic Thrombocytopenic Purpura

ZHENGHao,GUXiao-qiong,GAOFei,etal.DepartmentofClinicalLaboratory，WomenandChildren′sMedicalCenterofGuangzhou，Guangzhou510623，China

Objective To analyze the characteristics of ANA and ENA polypeptide antibody spectrum of children with idiopathic thrombocytopenic purpura(ITP).Methods From January 2013 to October 2014，a total of 67 children with ITP were selected as case group in the Department of Hematology and Rheumatology，Women and Children′s Medical Center of Guangzhou，and 50 healthy children were selected as control group at the same time.Indirect immunofluorescence technique and western blot was used to detect ANA and ENA polypeptide antibody spectrum，respectively.Results The positive rate of ANA and ENA polypeptide antibody of case group were statistically significantly higher than those of control group(P<0.01).The platelet count of children with positive ANA was statistically significantly lower than that of children with negative ANA in case group before and after treatment，respectively，and so was the appreciation(P<0.05)；clinical effect of children with negative ANA was statistically significantly betterer than that of children with positive ANA in case group(P<0.05).Conclusion The detection of ANA can reflect the response to treatment of children with ITP，ANA and anti-SSA antibody may be related to the onset and development of ITP.

Thrombocytopenia;Child;Antibodies,antinuclear;ENA polypeptide antibody spectrum

510623广东省广州市妇女儿童医疗中心检验科

郑浩，顾晓琼，高飞，等.特发性血小板减少症患儿抗核抗体及可提取性核抗原多肽抗体谱特点分析[J].实用心脑肺血管病杂志，2015，23(5)：137-139.[www.syxnf.net]

R 725.582

B

10.3969/j.issn.1008-5971.2015.05.047

2015-01-20；

2015-03-20)

Zheng H,Gu XQ,Gao F,et al.Characteristics of ANA and ENA polypeptide antibody spectrum of children with idiopathic thrombocytopenic purpura[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2015，23(5)：137-139.